張 靜 黃麗華 耿秀蘭

濟(jì)南市衛(wèi)生科技交流服務(wù)中心，山東濟(jì)南 250013

隨著人們保健養(yǎng)生意識(shí)的增強(qiáng)，對(duì)藥品的毒副作用關(guān)注度提高，為使患者放心用藥，就要有真實(shí)的科學(xué)依據(jù)。梔翹生肌軟膏是以梔子[1]、連翹、大黃[2]、蜂蠟等制成的治療燒、燙傷及痔瘡的外用軟膏制劑，為確保臨床用藥安全，我們對(duì)其進(jìn)行了多項(xiàng)毒理實(shí)驗(yàn)，研究起止時(shí)間1991—2013年，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 材料來(lái)源

梔翹生肌軟膏由本中心中試基地提供，2，4—二硝基氯代苯由山東省藥檢所提供。

1.2 動(dòng)物來(lái)源

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由山東醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物室提供，家兔為中國(guó)本兔（白色，紅眼）年齡130 d左右；豚鼠為非純種短毛三色豚鼠，年齡3個(gè)月左右；小鼠為昆明小白鼠，年齡60～70 d。健康狀況良好，購(gòu)進(jìn)后常規(guī)飼養(yǎng)一周進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 分組依據(jù)

實(shí)驗(yàn)方法及分組是根據(jù)新藥審批辦法皮膚用藥毒理研究的技術(shù)要求進(jìn)行的，[3]動(dòng)物脫毛用氯化鋇、氧化鋅法。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，方法用均數(shù)顯著性檢驗(yàn)（t檢驗(yàn)）[4]，結(jié)果用P值表示，P﹥0.05為無(wú)顯著性差異；P﹤0.05為顯著性差異；P﹤0.01為非常顯著性差異。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 皮膚急性毒性試驗(yàn)方法

家兔8只，雌雄各半，體重1.5～2.5 kg。實(shí)驗(yàn)分完整皮膚與破損皮膚組，每組4只兔。8只家兔背部脫毛﹙150 cm2﹚，其中4只脫毛區(qū)用刀片致?lián)p，24 h后將梔翹生肌軟膏均勻涂于脫毛區(qū)，每3 h涂一次﹙即每只兔涂藥20 g左右，相當(dāng)于人體用藥有效劑量的20倍以上﹚，24 h后去掉殘留受試物，連續(xù)14 d觀察家兔的中毒表現(xiàn)。

2.2 皮膚長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)方法

家兔 12只，雌雄各半，體重 1.5～2.5 kg，實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組﹙NS﹚和實(shí)驗(yàn)組﹙梔翹生肌軟膏﹚每組6只兔。家兔背部脫毛﹙150 cm2﹚，24 h后按分組涂藥，4次/d，5 g/次﹙為有效劑量的20倍以上﹚，連續(xù)用藥45 d，最后一次給藥24 h后取心血做血液學(xué)檢驗(yàn)，生化檢驗(yàn)。另每組隨機(jī)取2只兔進(jìn)行系統(tǒng)尸解，取心、肝、脾、腎、皮膚﹙用藥部位﹚進(jìn)行病理學(xué)檢查。余者繼續(xù)觀察3周，再行檢查。

2.3 皮膚刺激試驗(yàn)方法

豚鼠5只，雄性3只，雌性2只，體重250～350 g，實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組﹙不涂藥﹚，完整皮膚和破損皮膚組﹙梔翹生肌軟膏﹚。豚鼠背部脫毛三個(gè)區(qū)﹙20 cm2﹚定為 1、2、3 區(qū)，將第 3 區(qū)用刀片致?lián)p，24 h后按分組將藥物均勻的涂于脫毛區(qū)，2次/d，1 g/次，連續(xù)用藥7 d，最后一次給藥24 h后用溫水清洗殘留物，1、24、48、72 h觀察涂藥部位有無(wú)紅斑和水腫。

2.4 皮膚過(guò)敏試驗(yàn)方法

豚鼠 18只，雌雄各半，體重250～350g，實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照組﹙基質(zhì)﹚，陽(yáng)性對(duì)照組﹙2,4—二硝基氯代苯，致敏濃度為1℅，激發(fā)濃度為0.1%﹚和實(shí)驗(yàn)組﹙梔翹生肌軟膏﹚。每組6只豚鼠，豚鼠背部?jī)蓚?cè)脫毛，24 h后按分組將藥物0.2 g涂在豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)致敏，3 h后重復(fù)涂藥一次，以保證藥物接觸6 h，第7天和第14天重復(fù)涂藥致敏，于末次給藥14 d再按分組將藥物涂于豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)激發(fā)，6 h后去掉受試物，觀察紅斑和水腫情況，連續(xù)觀察3 d，按皮膚過(guò)敏反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。

2.5 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞﹙PCE﹚微核試驗(yàn)方法

小鼠24只，雌雄各半，體重25～30 g，實(shí)驗(yàn)分陰性對(duì)照組﹙NS﹚，陽(yáng)性對(duì)照組﹙環(huán)磷酰胺[CP]，22 mg/kg，一次給藥﹚和實(shí)驗(yàn)組﹙基質(zhì)組、梔翹生肌軟膏組，均為4次/d連續(xù)5 d給藥﹚每組6只小鼠，方法參照文獻(xiàn)[5]。實(shí)驗(yàn)鼠全部背部脫毛,24 h后按分組給藥，最末一次給藥24 h后頸椎脫臼處死，取雙后股骨，小牛血清沖洗骨髓制成細(xì)胞懸液，推片，甲醇固定，Giemsa染色，計(jì)數(shù)1000個(gè)PCE的微核細(xì)胞數(shù)，計(jì)算微核細(xì)胞率，并計(jì)算PCE/RBC比值。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 皮膚急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

兩組家兔均食欲正常，精神狀況良好，毛發(fā)光滑，用藥局部未見(jiàn)紅、腫及其它不良反應(yīng)。表明家兔皮膚短期內(nèi)接觸梔翹生肌軟膏未產(chǎn)生毒性反應(yīng)。

3.2 皮膚長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)結(jié)果

①一般觀察。試驗(yàn)期間兩組家兔精神、體征良好，食欲活動(dòng)正常，無(wú)死亡，亦未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。

②血液學(xué)檢查、生化檢驗(yàn)均未見(jiàn)異常。

③系統(tǒng)尸解及各臟器病理組織學(xué)未見(jiàn)異常。

④恢復(fù)性觀察未見(jiàn)延遲性毒性反應(yīng)，參照人及家兔的檢測(cè)指標(biāo)正常值[6]，以上試組結(jié)果均在正常范圍內(nèi)，兩組比較均無(wú)顯著意義﹙P﹥0.05﹚，表明家兔長(zhǎng)期用梔翹生肌軟膏不產(chǎn)生毒性反應(yīng)。

3.3 皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，刺激反應(yīng)分值﹤0.5即為無(wú)刺激性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各組分值均﹤0.5，表明梔翹生肌軟膏對(duì)豚鼠完整與破損皮膚均無(wú)刺激性。

3.4 皮膚過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性對(duì)照組紅斑和水腫都非常明顯﹙紅斑3.83分，水腫2.33分﹚，而空白和實(shí)驗(yàn)組則皮膚光滑、無(wú)紅斑、無(wú)水腫﹙均為0分﹚，不顯示任何過(guò)敏反應(yīng)。

3.5 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞﹙PCE﹚微核試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陰性對(duì)照組微核率為(2.33±1.03)‰與日前文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)5‰以下相符，陽(yáng)性對(duì)照CP誘導(dǎo)小鼠骨髓PCE微核率為（22.16±2.92）‰與陰性對(duì)照組比較有顯著意義﹙P﹤0.01﹚，而實(shí)驗(yàn)組盡管用藥劑量為人體有效劑量的100倍以上與陰性對(duì)照組比較仍無(wú)顯著意義﹙P﹥0.05﹚。表明梔翹生肌軟膏對(duì)小鼠無(wú)誘變作用。且各組PCE∕RBC比值均大于0.1，說(shuō)明骨髓增生不受抑制。

4 討論

中藥的有毒、無(wú)毒是中藥藥性理論的重要組成部分。但長(zhǎng)期以來(lái)，古今醫(yī)家對(duì)同一味中藥毒性大小載述不一，給臨床用藥帶來(lái)混亂，究其原因，顯然是中藥毒性確定無(wú)客觀標(biāo)準(zhǔn)，也反應(yīng)中藥毒性的確定因素是復(fù)雜的。如配伍是否合理、劑量是否適當(dāng)、炮制是否得法、劑型是否適宜，這些均能影響藥物的毒性。另外中藥的產(chǎn)地、用藥部位、采收時(shí)間、儲(chǔ)存條件等對(duì)中藥的毒性也有一定影響。為確保臨床用藥安全，我們對(duì)梔翹生肌軟膏進(jìn)行了急毒、長(zhǎng)毒、刺激、過(guò)敏和誘變實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示梔翹生肌軟膏對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚無(wú)刺激、不致敏、無(wú)吸收中毒，亦無(wú)潛在的誘變作用，表明臨床應(yīng)用安全可靠，為臨床用藥提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]賈玉杰.梔子對(duì)大鼠出血壞死性胰腺炎早期內(nèi)臟血流的影響[J].中國(guó)中藥雜志，1993，18（7）：431.

[2]劉興祥.大黃的藥理作用及臨床應(yīng)用[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1992，2（9）：571.

[3]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部新藥審批辦法[S].1992：35.

[4]施新猷.醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1983：357.

[5]黃幸紓.環(huán)境化學(xué)物致突變致畸致癌試驗(yàn)方法[M].浙江：浙江科技出版社，1985：220.

[6]施新猷.醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1983：442.