李懷斌 烏仁圖雅 侯建平 王佐稷 益小剛

(陜西省咸陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所業(yè)務(wù)管理科，陜西 咸陽(yáng) 712000)

制劑與質(zhì)量控制

蒙藥銀露梅質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究※

李懷斌 烏仁圖雅△侯建平1王佐稷2益小剛1

(陜西省咸陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所業(yè)務(wù)管理科，陜西 咸陽(yáng) 712000)

蒙藥；槲皮素；色譜法，薄層；色譜法，高壓液相

蒙藥銀露梅為薔薇科植物銀露梅的莖枝。蒙藥名為孟根烏日阿拉格。銀露梅作為蒙藥傳統(tǒng)用藥，載于《蒙藥正典》，其性平，味澀，具有固齒、理氣、斂黃水等功效。用于牙病，肺病，胸脅脹滿，黃水病。為了保證該藥的臨床療效，有效控制其質(zhì)量，本研究對(duì)內(nèi)蒙古各地產(chǎn)藥材在仔細(xì)觀察描述性狀的基礎(chǔ)上，以槲皮素為對(duì)照進(jìn)行薄層色譜鑒別研究，并采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定了槲皮素含量[1-2]，從而制定出銀露梅藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為蒙藥銀露梅的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-10AP高效液相色譜儀、N 2000色譜工作站、日本島津SPD-10A型紫外檢測(cè)器。BP210電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)。KQ-250DB型超聲波清洗機(jī)(鞏義予華儀器有限公司)。

1.2 藥品及試劑

1.2.1 藥品 銀露梅樣品來(lái)源：內(nèi)蒙古賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)、內(nèi)蒙古大青山劈柴溝、內(nèi)蒙古蠻罕山及國(guó)家蒙藥制劑中心。槲皮素對(duì)照品：購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)：10081-9905)。

1.2.2 試劑 甲醇為色譜純，水為蒸餾水，濃硫酸，乙酸乙酯，95%乙醇，其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別及結(jié)果

2.1 供試品溶液制備 取本品粉末2g，加甲醇-水(1∶1)50mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液濃縮至近干，加水50mL溶解，加濃硫酸0.5mL，加熱回流1h，放冷，移至分液漏斗中，用乙酸乙酯液萃取3次，每次20mL。合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)?5%乙醇2mL溶解，作為供試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液制備 取槲皮素對(duì)照品0.5mg，加95%乙醇1mL，制成對(duì)照品溶液。

2.3 鑒別操作及結(jié)果 供試品溶液點(diǎn)樣量5μL，對(duì)照品溶液點(diǎn)樣量2μL，采用4種不同的吸附劑及展開(kāi)系統(tǒng)進(jìn)行比較優(yōu)選。①號(hào)薄層系統(tǒng)：羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板，環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶7∶1)為展開(kāi)劑；②號(hào)薄層系統(tǒng)：硅膠H板，甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶3∶1)為展開(kāi)劑；③號(hào)薄層系統(tǒng)：0.5%氫氧化鈉溶液為黏合劑的G板，甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(8∶5∶7∶1)為展開(kāi)劑；④號(hào)薄層系統(tǒng)：硅膠H板，甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)為展開(kāi)劑。依次分別展開(kāi)，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱2min，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果①號(hào)薄層系統(tǒng)效果最佳(圖1、2、3、4，見(jiàn)封3)。

3 槲皮素HPLC含量測(cè)定及結(jié)果

3.1 色譜條件 C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-0.4%磷酸溶液(52∶48)為流動(dòng)相，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm[1-3]。

3.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取槲皮素對(duì)照品17.00mg，加甲醇定容至100mL，搖勻，即得濃度為0.17mg/mL的對(duì)照品溶液。

3.3 供試品溶液制備 取4批銀露梅樣品粉末(過(guò)40目篩)約1.0g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL密塞。稱定質(zhì)量，加熱回流1h，放冷，再稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10mL，加入鹽酸1mL，置90℃水浴中加熱回流1h，取出，迅速冷卻。轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

3.4 線性范圍考察 精密吸取3.2項(xiàng)槲皮素對(duì)照品溶液1.5、2.5、5.0、7.5、10.0mL，分別定容于100mL容量瓶中，搖勻，得到濃度分別為0.00255、0.00425、0.0085、0.0125、0.0170mg/mL，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，以取樣量為X軸，峰面積為Y軸，得回歸方程Y=2E+0.6X-18494，r=0.999 8。結(jié)果表明：槲皮素在0.0255～0.1700μg范圍內(nèi)，峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取內(nèi)蒙古賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)樣品，按供試品溶液制備方法制成穩(wěn)定性試驗(yàn)溶液，分別在0、1、2、3、8h，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.2%。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.6 精密度測(cè)定 精密吸取3.5樣品溶液10μL，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果顯示槲皮素峰面積RSD為1.1%，表明系統(tǒng)精密度良好。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取內(nèi)蒙古賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)樣品5份，每份約1.0g，分別按3.3方法制成重復(fù)性試驗(yàn)溶液，精密吸取10μL，進(jìn)樣分析，槲皮素峰面積RSD為1.68%(n=5)，方法重復(fù)性良好。

3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品(3.7中的樣品)6份，每份約1.0g，加入適量的槲皮素對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制成加樣回收試驗(yàn)溶液。分別精密吸取10μL，進(jìn)樣分析。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

由表1可見(jiàn)，平均回收率為96.72%，RSD為2.169%。加樣回收率良好。

3.9 樣品含量測(cè)定 取4批銀露梅樣品粉末各1.0g，分別精密稱定，按3.3方法進(jìn)行供試品溶液制備，各精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定。樣品含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

由表2可見(jiàn)，4批樣品中槲皮素的平均含量1.2630mg/g，最高為1.7013mg/g，最低為0.839 0mg/g，考慮本次收集樣品量小、產(chǎn)地少等因素，故規(guī)定本品按干燥品計(jì)算，每克含槲皮素不得少于0.5mg。

4 討 論

4.1 本試驗(yàn)所用樣品均經(jīng)過(guò)了原植物鑒定，并在試驗(yàn)前進(jìn)行了性狀比較與鑒定，確保了試驗(yàn)結(jié)果的一致性。

4.2 4個(gè)地區(qū)所產(chǎn)藥材薄層色譜結(jié)果一致，考慮以后增加銀露梅對(duì)照藥材與槲皮素同時(shí)做對(duì)照，增強(qiáng)鑒別的專屬性。

4.3 對(duì)樣品中雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分進(jìn)行檢查[4]，在正式標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)其指標(biāo)做了規(guī)定，確保了所制訂標(biāo)準(zhǔn)的完整與實(shí)用。

本試驗(yàn)建立了蒙藥銀露梅鑒別與含量測(cè)定方法，定性專屬性強(qiáng)，定量精密度高，穩(wěn)定性好，可作為蒙藥銀露梅的質(zhì)量控制重要項(xiàng)目。

[1] 王煥蕓，王玉華，賈彥勝，等.丁香藥材中槲皮素的定性鑒別和含量測(cè)定[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，30(S1)：534-537.

[2] 孫文基，謝世昌.天然藥物成分定量分析[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2003：400-403.

[3] 張文霞，包文芳，趙淑華.高效液相色譜法測(cè)定文冠木各部位中楊梅樹(shù)皮素和槲皮素的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，17(3):194-196.

[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄47-53.

(本文編輯：李珊珊)

※ 項(xiàng)目來(lái)源：內(nèi)蒙古自治區(qū)蒙藥現(xiàn)代化研究項(xiàng)目(編號(hào)：MX2005BZ008)

李懷斌(1962—)，男，副主任中藥師，學(xué)士。研究方向：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究、新藥研究。

R284.1

A

1002-2619(2014)08-1224-02

2013-05-13)

△ 通訊作者：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院外科教研室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110

1 陜西中醫(yī)學(xué)院藥理教研室，陜西 咸陽(yáng) 712000

2 陜西省乾縣食品藥品監(jiān)督管理局稽查科，陜西 乾縣 713300