吳禮高,朱 清,于東紅，承澤農(nóng)

乳腺浸潤性微乳頭狀癌(invasive micropapillary carcinoma,IMPC)是近些年來病理和臨床逐漸認(rèn)識(shí)的少見的乳腺浸潤性癌，具有獨(dú)特的組織學(xué)形態(tài)和生物學(xué)行為?；谌橄買MPC在生物學(xué)行為上具有高淋巴管侵襲性、高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和預(yù)后差等特性，2003年，WHO乳腺癌新分類將其列為獨(dú)立的乳腺上皮性腫瘤類型。隨著病例的積累，人們對(duì)乳腺IMPC的獨(dú)特生物學(xué)行為的分子機(jī)制的研究逐漸增多。關(guān)于MMP-9、uPAR和VEGF-C在乳腺IMPC組織中的表達(dá)和意義的研究尚未見報(bào)道。本研究通過檢測乳腺IMPC組織中MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白的表達(dá)情況，并分析與乳腺IMPC生物學(xué)行為的相關(guān)性，探討它們在乳腺IMPC浸潤和轉(zhuǎn)移機(jī)制中的作用和意義。

1 資料與方法

1.1資料 復(fù)查蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院臨床病理科2002年1月-2012年12月間乳腺癌存檔資料，選擇IMPC腫瘤成分占整個(gè)腫瘤5%～100%的病例為研究對(duì)象，共57例，癌旁正常乳腺組織30例作為對(duì)照。病理資料完整。所有患者術(shù)前未經(jīng)治療，均為女性，中位年齡53歲(32～72歲)。所有病例均為乳腺癌改良根治標(biāo)本，經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。

1.2方法 試劑：即用型抗體MMP-9、uPAR和VEGF-C，免疫組化試劑盒和DAB顯色劑均購自福州邁新公司。

1.2.1免疫組織化學(xué)染色 采用免疫組化SP法，按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作。切片常規(guī)脫蠟至水，高溫高壓抗原修復(fù)，一抗4℃孵育過夜，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽性表達(dá)組織作為陽性對(duì)照。

1.2.2染色結(jié)果判斷 以雙盲法進(jìn)行判斷，MMP-9和VEGF-C定位于胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒，uPAR定位于胞膜和胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒。于染色相對(duì)密集區(qū)選取5個(gè)視野，半定量分析陽性表達(dá)。每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，無著色記0分，淺黃色記1分，黃色和棕黃色記2分；陽性細(xì)胞數(shù)<10%記0分，陽性細(xì)胞數(shù)達(dá)10%-50%記1分，陽性細(xì)胞數(shù)>50%記2分；兩項(xiàng)記分相乘結(jié)果<2為陰性表達(dá)，≥2為陽性表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 根據(jù)資料性質(zhì)采用χ2檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1乳腺IMPC組織中MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白的表達(dá) 腫瘤組織中MMP-9蛋白的陽性表達(dá)率為84.2%(48/57),正常組織中MMP-9蛋白陽性表達(dá)率為10%(3/30)；腫瘤組織中uPAR和VEGF-C蛋白陽性蛋白表達(dá)率分別為77.2%(44/57)和80.7%(46/57)，在癌旁正常乳腺組織中不表達(dá)或少量弱表達(dá)。MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白在乳腺IMPC組織中表達(dá)顯著高于癌旁正常乳腺組織。

2.2乳腺IMPC組織中MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白的表達(dá)與年齡、IMPC占腫瘤成分比例無相關(guān)性(P>0.05)，與組織學(xué)分級(jí)存在相關(guān)性(P<0.05)。MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白的表達(dá)率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)多的組高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)少的組，差異有顯著性(P<0.05)。見表1。

2.3乳腺IMPC組織中MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白的相關(guān)性 MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白三者之間表達(dá)差異無顯著性。見表2、表3。

表1 MMP-9、uPAR和VEGF-C蛋白的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2 VEGF-C和MMP-9、uPAR蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性分析

表3 MMP-9和uPAR蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性分析

3 討論

乳腺浸潤性微乳頭狀癌(IMPC)由于其獨(dú)特的組織學(xué)形態(tài)和高淋巴管侵襲性的生物學(xué)行為引起病理和臨床醫(yī)師的關(guān)注，其病理學(xué)診斷已為病理學(xué)醫(yī)師所掌握，但形成其獨(dú)特的組織學(xué)形態(tài)和高侵襲性的不良后果的分子機(jī)制是目前探索的方向。國內(nèi)付麗等[1-2]較早關(guān)注其分子機(jī)制，認(rèn)為IMPC組織中癌巢周圍的空隙樣結(jié)構(gòu)使癌巢容易從原發(fā)灶脫離，付麗團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)IMPC癌巢E-鈣黏附素、α和β-連環(huán)素的表達(dá)模式使得腫瘤更容易脫落原發(fā)灶，從而認(rèn)為IMPC比其它類型癌具有更強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)能力和侵襲能力。此后陸續(xù)有文獻(xiàn)[3-5]報(bào)道Hsp27、L1-CAM、前列腺干細(xì)胞抗原等在乳腺IMPC的表達(dá)與其生物學(xué)行為的關(guān)系，豐富了乳腺IMPC分子機(jī)制的探索和研究。

基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPS)在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，MMP-9能夠使Ⅳ 型膠原蛋白降解，從而有利于腫瘤脫落基底膜浸潤和轉(zhuǎn)移。尿激酶型纖溶酶原激活物受體(uPAR)與其受體結(jié)合，激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)水解，另外活化的纖溶酶能夠激活基質(zhì)金屬蛋白酶，參與細(xì)胞外蛋白水解。VEGF-C是刺激腫瘤淋巴管生成的重要因子，韓艷春等[6]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中VEGF-C和uPAR的配體uPA表達(dá)存在正相關(guān)，推測VEGF-C和uPA相互上調(diào)，形成正反饋調(diào)節(jié)。總之，MMP-9、uPAR和VEGF-C協(xié)同作用，利于腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移。

MMP-9、uPAR和VEGF-C在肺癌、肝癌、腸癌、子宮內(nèi)膜癌、常見乳腺癌等腫瘤中表達(dá)的研究比較多，有了較充分的認(rèn)識(shí)，在乳腺IMPC中表達(dá)情況及與其生物學(xué)行為的關(guān)系研究尚未見報(bào)道。

本研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9、uPAR和VEGF-C在乳腺IMPC中的表達(dá)率比較高,而且其高表達(dá)與患者年齡、IMPC占腫瘤成分的比例不相關(guān)，與組織分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道相近[7]。提示MMP-9、uPAR和VEGF-C在乳腺IMPC的高淋巴管侵襲性、高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力和不良預(yù)后等方面也扮演了重要的角色。雖然MMP-9、uPAR和VEGF-C的表達(dá)相互之間統(tǒng)計(jì)學(xué)提示不存在相關(guān)性，與部分文獻(xiàn)結(jié)果有所差別，但三者的表達(dá)是否相互影響、相互協(xié)調(diào)，共同作用于腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，其作用機(jī)制以及是否能成為判斷乳腺IMPC預(yù)后的有益指標(biāo)和未來分子治療的靶點(diǎn)，仍有待進(jìn)一步研究。

【 參 考 文 獻(xiàn) 】

[1] 付 麗.重視乳腺浸潤性微乳頭狀癌的診斷[J].中華病理學(xué)雜志，2004，33(4)：305-307.

[2] 付 麗.乳腺浸潤性微乳頭狀癌病理診斷的臨床意義及研究現(xiàn)狀[J].中華病理學(xué)雜志，2008，37(2)：79-82.

[3] 高 霞，錢曉龍，李崖青，等.Hsp27在乳腺浸潤性微乳頭狀癌中的表達(dá)及其意義[J].中國腫瘤臨床，2013，40(9)： 525-528.

[4] 張 超，范 宇，李偉東，等.L1-CAM在乳腺浸潤性微乳頭狀癌的表達(dá)及其意義[J].中國腫瘤臨床，2013，40(4)：198-201.

[5] 郝金燕，楊壹羚，李 帥，等.前列腺干細(xì)胞抗原的表達(dá)在乳腺浸潤性微乳頭狀癌中的意義[J].中華病理學(xué)雜志，2011，40(6)：382-386.

[6] 韓艷春，劉魯英，王 霞，等. 乳腺癌組織中VEGF-C和uPA的表達(dá)及意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2010，26(3)：296-299.

[7] 祝淑釵，王亞飛，蘇景偉，等.食管癌中MMP-9、uPA和uPAR蛋白表達(dá)及其臨床意義[J].2008，17(4)：263-267.