曹懷宇 成雪梅 魏磊彬

·論著·

CD105在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及與血管生成的關(guān)系

曹懷宇 成雪梅 魏磊彬

目的分析CD105在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)并探討其與血管生成的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)60例原發(fā)性結(jié)直腸癌組織、20例結(jié)直腸腺瘤組織、10例結(jié)直腸黏膜組織中CD105的表達(dá)。結(jié)果60例結(jié)直腸癌標(biāo)本平均微血管計(jì)數(shù)為(30±8)條。結(jié)直腸癌CD105標(biāo)記的MVD值明顯高于結(jié)直腸腺瘤組織(P<0.01)。CD105標(biāo)記的MVD值與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移明顯差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而與患者的年齡、性別、腫瘤直徑、大體類型、病理類型及組織學(xué)分級(jí)均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論MVD在TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況有明顯差異，提示CD105表達(dá)密度增強(qiáng)的患者浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后差。

結(jié)直腸腫瘤；CD105；臨床病理特征；微血管密度

結(jié)直腸癌是消化道中常見的惡性腫瘤之一，通過測(cè)定微血管密度(MVD)，發(fā)現(xiàn)腫瘤中新生血管數(shù)量越多癌組織發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性越大[1]；研究表明，CD105在腫瘤組織及其周圍的血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)豐富，可以成功標(biāo)記新生血管[2]，且明顯優(yōu)于CD34、Ⅴ Ⅲ因子血管標(biāo)記物[3]。本研究通過免疫組化檢測(cè)結(jié)直腸癌組織中CD105表達(dá)情況并探討其與血管生成的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008至2012年我院就診的的原發(fā)性結(jié)直腸癌術(shù)后標(biāo)本60例，均有明確的病理組織學(xué)診斷結(jié)果，所有患者在術(shù)前均未經(jīng)任何治療，所有病例資料完整。隨機(jī)從60例結(jié)直腸癌標(biāo)本中選取10例，距結(jié)直腸癌組織邊緣10 cm處經(jīng)病理切片證實(shí)的正常黏膜組織為癌旁組織。同時(shí)選取結(jié)直腸腺瘤組織20例作為對(duì)照組。60例結(jié)直腸癌患者中，男35例，女25例，年齡45～65歲。臨床分型：隆起型10例，潰瘍型36例，浸潤(rùn)型5例，其他類型9例。組織學(xué)類型依照2003版美國(guó)腫瘤聯(lián)合會(huì)(AJCC)分類標(biāo)準(zhǔn)分類：高分化腺癌14例，中分化腺癌23例，低分化腺癌23例；根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)制定的TNM分類標(biāo)準(zhǔn)(2003)分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期18例。病理證實(shí)伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例。

1.2 試劑 鼠抗人CD105單克隆抗體(即用型)、LSAB免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法 將所選取的病例標(biāo)本常規(guī)行HE染色確定病理類型。免疫組化染色程序按LSAB免疫組化染色試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判定 CD105表達(dá)呈陽(yáng)性的血管內(nèi)皮細(xì)胞多為不規(guī)則排列方式，較少見到明顯的血管管腔，血管管壁較薄且極少見到平滑肌組織。在被染色的組織切片中，微血管的分布不均勻，許多部位的陽(yáng)性內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)明顯多于其他部位，比如在腫瘤實(shí)質(zhì)邊緣的間質(zhì)即新生血管生成區(qū)CD105表達(dá)呈陽(yáng)性的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)明顯多于其他部位。微血管計(jì)數(shù)參照Weidner方法[4]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD105在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá) CD105陽(yáng)性細(xì)胞著色部位主要位于血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì)，胞膜著色強(qiáng)于胞質(zhì)。CD105標(biāo)記的MVD所顯示的血管多為新生薄壁、管徑小的血管，大的厚壁血管未見CD105的表達(dá)。結(jié)直腸癌CD105標(biāo)記的MVD值明顯高于結(jié)直腸腺瘤組織(P<0.01)。見圖1、表1。

2.2 CD105表達(dá)與結(jié)直腸癌血管生成的關(guān)系 CD105標(biāo)記的MVD值與結(jié)直腸癌腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移明顯相關(guān): (Ⅲ+Ⅳ)期的MVD值明顯高于(Ⅰ+Ⅱ)期MVD值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；在結(jié)直腸癌，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的血管數(shù)為(33±7)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為(23±4)，微血管數(shù)目與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組的血管數(shù)為(37±7)，無遠(yuǎn)處結(jié)轉(zhuǎn)移組為(26±5)，微血管數(shù)目與患者是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。而與年齡、性別、腫瘤直徑、大體類型、病理類型及組織學(xué)分級(jí)，差異無相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

a：結(jié)直腸癌；b：癌旁正常組織

表1 CD105在不同結(jié)直腸組織中的表達(dá)

表1 CD105在不同結(jié)直腸組織中的表達(dá)

組別CD105結(jié)直腸癌組(n=60)30±7*對(duì)照組(n=20)19±4 正常黏膜組(n=10)0

注：與腺癌組比較，*P<0.01

表2 CD105表達(dá)與結(jié)直腸癌血管生成的關(guān)系

3 討論

CD105是內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的糖蛋白，分子量為180kD，由兩個(gè)單體通過二硫鍵連接而成，編碼基因位于9號(hào)染色體長(zhǎng)臂(9q34-qter)，氨基酸序列含有精氨酸-甘氨酸一天門冬氨酸三肽序列[5]。血管生成在惡性腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展中起著重要的作用， 新生的腫瘤微血管在結(jié)構(gòu) 上不完善 ， 具有高通透性的特性， 因此它比正常生理下產(chǎn)生的微血管抵抗腫瘤侵襲的能 力差，更容易發(fā)生血管侵襲和血行肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生[6,7]。

CD105在腫瘤組織及其周圍的血管內(nèi)皮細(xì)胞中有豐富的表達(dá)[8]，可以成功標(biāo)記新生血管[2]，且明顯優(yōu)于CD34、ⅤⅢ因子血管標(biāo)記物[3]，而其在正常組織的血管上無表達(dá)。

Takahashi等[9]檢測(cè)了110例實(shí)體腫瘤患者 (其中34例結(jié)直腸癌、16例乳腺癌、51例其他腫瘤)、8例良性疾病患者和31例健康志愿者的血清CD105水平，發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)移的腫瘤患者血 清CD105高于無轉(zhuǎn)移者，且均高于對(duì)照組；化療后血清CD105下降。有學(xué)者應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)32例原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)行根治性切除術(shù)后隨訪1年以上患者及20例肝內(nèi)膽管結(jié)石患者(對(duì)照組)肝組織CD105mRNA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)CD105mRNA的高表達(dá)與腫瘤大小、臨床病理分期和病理類型無關(guān)(P>0.05)，而與術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，這表明CD105的高表達(dá)有可能成為術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物[10]。Sandlund等[11]通過對(duì)腎細(xì)胞癌的研究發(fā)現(xiàn)，CD105的表達(dá)同腎細(xì)胞癌的分期、分級(jí)、預(yù)后密切相關(guān)。Chien等[12]通過對(duì)舌鱗癌的研究發(fā)現(xiàn)，CD105的高度表達(dá)同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期密切相關(guān)(P均<0.01)，提示CD105的免疫表達(dá)是舌鱗癌的預(yù)后指標(biāo)。相似的研究結(jié)果亦見于肺非小細(xì)胞癌、口腔癌、胃癌等的研究[13，14]。研究表明，CD105可作為腫瘤診斷、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)及判斷預(yù)后理想指標(biāo)[5,15]。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，CD105標(biāo)記的MVD所顯示的血管多為新生薄壁、管徑小的血管，大的厚壁血管未見CD105的表達(dá)。60例結(jié)直腸癌標(biāo)本平均微血管計(jì)數(shù)為(30±8)條。結(jié)直腸癌CD105標(biāo)記的MVD值明顯高于結(jié)直腸腺瘤組織(P=0.005)。

結(jié)直腸癌CD105標(biāo)記的MVD值明顯高于結(jié)直腸腺瘤組織(P=0.005)。CD105標(biāo)記的MVD值與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)(P均<0.01)，而與患者的年齡、性別、腫瘤直徑、大體類型、病理類型及組織學(xué)分級(jí)均無明顯相關(guān)(P均>0.05)。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，CD105標(biāo)記的MVD所顯示的血管多為新生薄壁、管徑小的血管，大的厚壁血管未見CD105的表達(dá)。結(jié)直腸癌CD105標(biāo)記的MVD值明顯高于結(jié)直腸腺瘤組織。這一結(jié)果與Akagi等[4]的研究一致，說明CD105是預(yù)測(cè)結(jié)直腸腺瘤癌變的有效指標(biāo)，CD105有助于早期診斷疾病。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果還顯示，微血管數(shù)目與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有顯著的差異性，這與Saad 等[16，17]的研究結(jié)果一致。

此外，本研究結(jié)果還顯示(Ⅲ+Ⅳ)期的MVD均值明顯高于(Ⅰ+Ⅱ)期的MVD均值，這些均說明了CD105作為血管標(biāo)志物，可參與血管生長(zhǎng)，在結(jié)直腸癌血管生長(zhǎng)過程中發(fā)揮了重要的作用，且與結(jié)直腸癌的進(jìn)展與預(yù)后密切相關(guān)。由此，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果認(rèn)為由于CD105與血管內(nèi)皮細(xì)胞的關(guān)系密切，人們有望通過CD105這一途徑來抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，從而有效控制結(jié)直腸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，達(dá)到治療結(jié)直腸癌的目的。

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ExpressionofCD105incolorectalcarcinomaanditsrelationshipwithangiogenesis

CAOHuaiyu,CHENGXuemei,WEILeibin.DepartmentofAnesthesiology,TheNo.251HospitalofPLA,Hebei,Zhangjiakou075000,China

ObjectiveTo investigate the expression of CD105 in colorectal carcinoma and to explore the relationship between the expression and angiogenesis.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of CD105 in 60 cases of primary colorectal carcinomas,20 cases of colorectal adenomas and 10 cases of normal colorectal tissues.ResultsThe average microvessel number labeled with CD105 in 60 cases of colorectal carcinoma was 30±8.The MVD value in primary colorectal carcinomas labeled with CD105 was significantly higher than that in colorectal adenomas (P<0.01),which was closely related to TNM stage,lymph node metastasis and distant metastasis (P<0.01),however,which was not correlated with patient’s sex and age,the tumor’s size,histological type,pathological type and the degree of differentiation (P>0.05).ConclusionMVD has significant differences at the respects of TNM stage,lymph node metastasis and distant metastasis,which suggests that the patients with enhancement of CD105 expression density have higher rates of tumor metastasis and poorer prognosis.

colorectal carcinoma;CD105;clinicopathologic factors;microvessel density

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.10.008

075000 河北省張家口市，中國(guó)人民解放軍解放軍第251醫(yī)院麻醉科

R 735.31

A

1002-7386(2014)10-1463-03

2014-01-12)