張衛(wèi)紅

(河北省石家莊市中醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050051)

制劑與質(zhì)量控制

高效液相色譜法測(cè)定當(dāng)藥中獐牙菜苦苷的含量

張衛(wèi)紅

(河北省石家莊市中醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050051)

色譜法，高壓液相；當(dāng)藥；獐牙菜苦素

當(dāng)藥為河北、內(nèi)蒙古一帶的民間草原，來(lái)源于獐牙菜屬植物，主要的有效成分為獐牙菜苦苷，具有清肝利膽、清熱除濕功能，并且抗炎作用強(qiáng)，該屬植物中的多個(gè)品種都被臨床廣泛用于治療急慢性黃疸型肝炎、膽囊炎等疾病[1]。現(xiàn)代研究表明，獐牙菜苦苷能有效的保護(hù)肝細(xì)胞，防止或減輕肝組織損傷，并促進(jìn)受損細(xì)胞修復(fù)，并且還能明顯抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有顯著的鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用[2-3]。本研究擬采用高效液相色譜(HPLC)法，測(cè)定當(dāng)藥中獐牙菜苦苷的含量，以保證當(dāng)藥的藥品質(zhì)量。

1 材 料

1.1 儀器 電子天平：德國(guó)賽多利斯BS124S型電子天平；紫外-可見(jiàn)分光度計(jì)：尤尼柯(上海)儀器有限公司UV-2102PCS掃描型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)；HPLC儀：美國(guó)戴安公司DIONEX P680型。

1.2 藥品及試劑 當(dāng)藥，購(gòu)自于安國(guó)市中藥材交易大廳，河北省食品藥品檢驗(yàn)院主任藥師段吉平鑒定為龍膽科植物瘤毛獐牙菜的干燥全草，編號(hào)與產(chǎn)地分別為：1、2、3號(hào)的產(chǎn)地均為河北省，4、5、6號(hào)的產(chǎn)地均為內(nèi)蒙古自治區(qū)；獐牙菜苦苷對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量81.32%，批號(hào)：0785-200203；甲醇，F(xiàn)isher色譜純；水，蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：CAPCELL PAK-C18(5 μm，4.6 mm×150 mm)；流動(dòng)相：甲醇-水(20∶80)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10.0 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取獐牙菜苦苷0.020 32 g，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為獐牙菜苦苷濃溶液。取此溶液10 mL，置100 mL容量瓶中，加入甲醇，并稀釋到刻度，混合，搖勻，得對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取當(dāng)藥樣品粉碎后通過(guò)50目藥篩，混合均勻，取粉末0.2 g，精密稱(chēng)量，置200 mL具塞三角瓶中，加甲醇100 mL，密塞，稱(chēng)質(zhì)量，超聲處理(功率為300 W，頻率為33 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，振搖，濾過(guò)，續(xù)濾液即為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 取獐牙菜苦苷濃溶液10 mL，置200 mL容量瓶中，加入甲醇，并稀釋到刻度，混合，搖勻，作為獐牙菜苦苷稀溶液。取此種稀溶液5.0、10.0 μL和濃溶液5.0、10.0、15.0 μL，分別注入HPLC儀，依法測(cè)定，以吸收度為縱坐標(biāo)，所進(jìn)對(duì)照品量為橫坐標(biāo)，制作工作曲線，其回歸方程為y=1 135 380 X+22 638 R=0.999 9。結(jié)果獐牙菜苦苷的線性范圍是0.082 60～4.958 μg。

2.5 精密度試驗(yàn) 吸取供試品溶液10.0 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定獐牙菜苦苷積分值，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)=0.56%，實(shí)驗(yàn)證明儀器精密度優(yōu)良。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液10.0 μL，注入HPLC儀12次，每次間隔2 h，測(cè)定獐牙菜苦苷峰面積，計(jì)算其RSD。結(jié)果對(duì)照品RSD=0.78%，供試品RSD=0.24%，由此可知，對(duì)照品和供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取1號(hào)當(dāng)藥樣品粉末0.16、0.2、0.24 g各3份，精密稱(chēng)量，參照2.3項(xiàng)方法制成供試品溶液，依法測(cè)定，樣品的平均含量為39.40 mg/g，RSD=1.3%，重復(fù)性好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取1號(hào)當(dāng)藥樣品粉末9份，每份約0.2 g，每3份為1組，分別用濃度為0.030 63、0.051 04、0.071 45 mg/mL獐牙菜苦苷甲醇溶液代替甲醇溶劑，各加100 mL，密塞，稱(chēng)質(zhì)量，超聲處理(功率為300 W，頻率為33 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，振搖，濾過(guò)，續(xù)濾液即為供試品溶液。依法測(cè)定，根據(jù)測(cè)定值和對(duì)照品加入量計(jì)算其回收率。結(jié)果獐牙菜苦苷的平均回收率為99.9%，RSD=1.4%，符合規(guī)定。

2.9 樣品測(cè)定 取6個(gè)批次的當(dāng)藥樣品，依法制成供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中獐牙菜苦苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表1，對(duì)照品及供試品譜圖見(jiàn)圖1、2。

表1 6批樣品的獐牙菜苦苷含量測(cè)定結(jié)果

獐牙菜苦苷對(duì)照品HPLC圖譜

供試品HPLC圖譜

3 討 論

本研究還采用了另外3個(gè)公司的色譜柱，色譜柱型號(hào)分別為：Agilent安捷倫HC-C18液相色譜柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)、迪馬Diamonsil色譜柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)、Waters Symmetry C-18液相色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，研究對(duì)分離及測(cè)定值的影響，結(jié)果3種品牌C18色譜柱柱效、分離度均符合要求，并且含量測(cè)定值無(wú)明顯的區(qū)別，所以本法對(duì)C18色譜柱品牌沒(méi)有特別要求。獐牙菜苦苷具有解痙、鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用[4]，為當(dāng)藥的有效成分，用HPLC法測(cè)定當(dāng)藥中獐牙菜苦苷尚未見(jiàn)報(bào)道，本研究建立的HPLC檢測(cè)方法精密度、重現(xiàn)性好，雜質(zhì)干擾少，獐牙菜苦苷的峰純度、峰型、分離度均比較理想，樣品穩(wěn)定性和回收率均較高，是一種理想的測(cè)定方法。

[1] 胡若琪，饒嫻宜，盧明義，等.獐牙菜甙對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝損傷大鼠血漿cAMP含量的影響[J].中藥藥理與臨床，1989，5(4):31-32.

[2] 郭愛(ài)華.龍膽科獐牙菜屬藥用植物化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，6(1):57-59.

[3] 余放爭(zhēng)，董光平.獐牙菜屬中的藥用植物及其藥理和化學(xué)研究綜述[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，1999，8(4):53-55.

[4] 梁鉅忠，雷偉亞，劉佩.解痙止痛新藥：獐牙菜苦甙[J].新藥與臨床，1985，4(2)：58-59.

(本文編輯：石 康)

張衛(wèi)紅(1963—)，女，副主任中藥師，學(xué)士。從事中藥房管理及中藥鑒別工作。

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1002-2619(2014)05-0740-02

2013-11-14)