鄧勝國(guó) 尹愛武 田 潤(rùn) 李探芳

(湖南科技學(xué)院，湖南 永州 425100)

大花紅景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba系景天科紅景天屬植物，目前，世界上有紅景天90余種，我國(guó)蘊(yùn)藏量和產(chǎn)量最大〔1〕。其含有黃酮類、有機(jī)酸、多糖及揮發(fā)油等多種成分〔2～5〕。研究表明紅景天有抗腫瘤、抗輻射、抗疲勞及增強(qiáng)人體免疫能力等作用〔6～9〕。有文獻(xiàn)報(bào)道紅景天總甙〔10〕與紅景天醇粗提物〔11〕有抗衰老作用。目前還未見紅景天多糖的抗衰老作用，本研究旨在探討紅景天多糖的抗衰老作用。

1 材料與方法

1.1藥物、動(dòng)物、試劑及儀器 紅景天購(gòu)于邵東廉橋藥材大市場(chǎng)，經(jīng)湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校田潤(rùn)博士準(zhǔn)確鑒定，紅景天為大花紅景天的干燥根莖；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒由南京建成生物工程公司所提供；D-半乳糖由Sigma公司提供(用生理鹽水配成10%的濃度)。昆明種2月齡小白鼠80只，雌雄各半。體重18～22 g由廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[SPF級(jí)動(dòng)物]。飼養(yǎng)在溫度(22±2)℃，恒濕(55±5)%的飼養(yǎng)環(huán)境中，標(biāo)準(zhǔn)飼料與自來水隨機(jī)取食。Sartorius 電子天平。KD-2508-Ⅲ恒溫冷凍切片機(jī)(廈門伯力電子科技有限公司)；DY89-Ⅱ組織勻漿機(jī)(浙江寧波新芝生物科技股份有限公司)；SHB-Ⅲ循環(huán)水式真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)易有限公司)；N-1000S-WA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本EYELA)。

1.2方法

1.2.1紅景天多糖溶液的制備 紅景天多糖的提取純化參照文獻(xiàn)〔12～14〕。紅景天加10倍量水加熱回流提取60 min，過濾，濾渣加10倍量水再提取1次，合并2次濾液，減壓濃縮至一定體積，然后加入95 %乙醇使溶液中乙醇濃度達(dá)80%，靜置12 h，過濾濃縮至一定體積。在濾液中加入1/4體積的Sevage試劑(氯仿∶正丁醇=1∶1)，混勻，充分振蕩30 min后，離心1 min(1 000 r/min)，分離水層和氯仿層，水層反復(fù)脫蛋白5次后減壓濃縮，60℃干燥得純化紅景天多糖。經(jīng)硫酸-苯酚法測(cè)定多糖的含量為71.2%。紅景天多糖用生理鹽水配成10 mg/ml的溶液。

1.2.2動(dòng)物分組與給藥 昆明種小白鼠隨機(jī)分為空白組、模型組及紅景天多糖低、中、高劑量組，每組16 只?？瞻捉M每日經(jīng)頸背皮下注射0.5 ml生理鹽水，其余各組每日經(jīng)頸背部皮下注射5%D -半乳糖0. 5 ml，連續(xù)給藥6 w〔15〕。給藥10 d后，紅景天多糖低、中、高劑量組每日灌胃給予紅景天多糖溶液，給藥量分別為100、150、200 mg/kg，空白組和模型組每天灌胃等量的生理鹽水。

1.3生化指標(biāo)及脾臟、胸腺指數(shù)測(cè)定 給藥7 w后，稱量小鼠體重并斷頭取血、分離血清，迅速取出小鼠腦、肝臟并用冰冷生理鹽水清洗兩次，然后用濾紙吸干并稱其質(zhì)量，將小鼠腦、肝臟剪碎后分別倒入勻漿瓶中迅速加入9倍體積量的生理鹽水，勻漿，制備腦、肝組織勻漿。按測(cè)試盒所附方法測(cè)定SOD和MDA含量。摘取小鼠脾臟和胸腺，生理鹽水洗凈，濾紙吸干并稱濕質(zhì)量，計(jì)算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。

1.4小鼠腦神經(jīng)元數(shù)的測(cè)定 取小鼠腦腦組織，用干冰快速冷凍，切片，10%甲醛液溶固定，石蠟包埋、切片，HE染色，常規(guī)透射電鏡觀察。每張切片上隨機(jī)選取10個(gè)視野進(jìn)行神經(jīng)元計(jì)數(shù)，計(jì)算各組平均數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1紅景天多糖對(duì)衰老模型小鼠脾臟和胸腺指數(shù)的影響 與空白組比較，模型組小鼠脾臟、胸腺指數(shù)顯著降低(P<0.01)。與模型組比較，紅景天多糖各劑量組脾臟及胸腺指數(shù)顯著增加(P<0.01，P<0.05)，且隨劑量的增加而增加。見表1。

表1 紅景天多糖對(duì)小鼠脾臟和胸腺指數(shù)的影響

2.2紅景天多糖對(duì)血清、肝組織和腦組織SOD活力的影響 與空白組比較，模型組血清、肝組織、腦組織中SOD活性顯著降低(P<0.01) ；與模型組比較，紅景天多糖各劑量組血清、肝組織、腦組織中SOD活性顯著增加(P<0.01，P<0.05)，且隨高劑的增加而增加。見表2。

表2 血清、肝組織和腦組織SOD活力

2.3紅景天多糖對(duì)血清、肝組織和腦組織MDA含量的影響 與空白組比較，模型組血清、肝組織、腦組織中MDA含量顯著增加(P<0.01)；與模型組比較，紅景天多糖各劑量組血清、肝組織、腦組織中MDA含量顯著降低(P<0.01，P<0.05)，且隨高劑的增加而減少。見表3。

2.4紅景天多糖對(duì)小鼠腦神經(jīng)元數(shù)的影響 與空白組比較，模型組小鼠腦神經(jīng)元數(shù)顯著降低(5 344±359 vs 7 384±681，P<0.01)；與模型組比較，紅景天多糖高、中、低劑量組小鼠腦神經(jīng)元數(shù)(6 741±654、6 459±604、5 770±575)顯著增加〔P<0.01，P<0.05〕，且隨高劑的增加而增加。

表3 血清、肝組織和腦組織MDA含量

3 討 論

現(xiàn)代衰老學(xué)說認(rèn)為，機(jī)體的衰老與自由基及其所誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化物對(duì)機(jī)體的損傷有關(guān)。本研究紅景天多糖的抗衰老作用隨劑量的增加而增強(qiáng)，結(jié)果提示，紅景天多糖的抗氧化作用可能與提高SOD活性，增加清除機(jī)體自由基的機(jī)制有關(guān)。

4 參考文獻(xiàn)

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