程 輝 江 慶 黃彩鳳 蔡 鑫

(安慶市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科，安徽 安慶 246003)

白細(xì)胞介素-6(IL-6)作為重要的炎癥因子，可直接或間接作用于冠心病(CHD)的發(fā)生與發(fā)展。據(jù)此IL-6基因也就成為多種CHD發(fā)病候選基因中的一種〔1〕。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)存在-634C/G多態(tài)性，這種基因多態(tài)性的存在很可能導(dǎo)致IL-6的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平在個(gè)體間有差異，從而影響IL-6的生物學(xué)水平及其作用。本文旨在研究IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)-634C/G多態(tài)性與CHD的關(guān)系及其對血脂的影響。

1 對象與方法

1.1研究對象 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2009年5月至2010年6月心內(nèi)科住院患者，CHD組120例，心肌梗死者63例，心絞痛者57例，其中男70例，女50例，年齡(61.45±10.52)歲，CHD經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查證實(shí),以管腔直徑狹窄≥50%為有意義的病變，心絞痛組與心肌梗死組年齡及性別無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。健康對照組100例,男58例，女42例，年齡(58.69±12.45)歲，為年齡、性別與CHD組相匹配的同時(shí)間段在蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院門診體檢的健康人群，均無CHD史。各組受檢者均為無血緣關(guān)系的中國漢族人。校正了合并呼吸系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、風(fēng)濕性疾病及嚴(yán)重肝、腎功能不全患者的影響。

1.2研究方法

1.2.1基因組DNA的抽提 取外周靜脈血2 ml，采用全血基因組DNA提取盒(大連寶生物工程有限公司)提取人白細(xì)胞基因組DNA。

1.2.2引物的合成與設(shè)計(jì) 參照文獻(xiàn)〔2〕設(shè)計(jì)引物，由上海生工有限公司合成。 IL-6-634C/G引物序列為,上游引物： 5'-GAGACGCCTTGAAGTAACTG-3'， 下游引物： 5'-AACCAAAGATGTTCTGAACTGA-3'。

1.2.3PCR擴(kuò)增條件 IL-6的PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系均為25 μl，其中含10×PCR緩沖液2.5 μl；2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μl；20 μmol/L上、下游引物各1 μl；模板DNA 4.0 μl；Taq DNA聚合酶1.25 U；不足體積用滅菌雙蒸水補(bǔ)足至25 μl。置PCR儀中94℃預(yù)變性5 min。按下列程序循環(huán)35次：94℃變性30 s，54℃退火45 s，72℃延伸45 s；末次循環(huán)后72℃延伸5 min。

1.2.4擴(kuò)增產(chǎn)物的限制性酶切 取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10 μl，用10 U限制性內(nèi)切酶BsrBⅠ酶切IL-6基因-634位點(diǎn)，37℃孵育3 h，反應(yīng)終止后在2%的瓊脂糖凝膠上(含0.5%溴乙啶)電泳1 h，電壓100 V。以DL2000 DNA片段長度標(biāo)準(zhǔn)物為參考，在紫外燈下判斷結(jié)果，并拍照。

1.2.5血脂水平的測定 總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)均由蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科測定。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0軟件包進(jìn)行χ2和t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1IL-6基因-634位點(diǎn)多態(tài)性 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為180 bp(圖1),根據(jù)限制性內(nèi)切酶BsrBⅠ酶切片段的情況，基因型有CC型(180 bp 1個(gè)條帶)、CG型(180 bp、120 bp、60 bp 3個(gè)條帶)和GG型(120 bp、60 bp 2個(gè)條帶)3種(圖2)。

2.2CHD組與健康對照組IL-6基因-634C/G多態(tài)性的分布與比較 兩組中IL-6基因-634位點(diǎn)基因型在兩組人群中的分布差異有顯著性(χ2=6.16,P<0.05);等位基因頻率在兩組人群中的分布差異也有顯著性，隨等位基因G的增加，患CHD的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(χ2=5.53,P<0.05)。見表1。

2.3心肌梗死組與心絞痛組IL-6基因-634C/G多態(tài)性的分布與比較 IL-6基因-634位點(diǎn)CG、GG、CC基因型在兩組人群中的分布均無顯著性差異(P>0.05)。見表1。

2.4健康對照組與CHD組血脂及CHD組IL-6各基因型間血脂水平的比較 CHD組TC〔(5.11±1.14)mmol/L〕和TG〔(1.72±0.90)mmol/L〕水平均顯著高于健康對照組〔(4.09±1.09)、(1.26±0.55)mmol/L〕(P<0.05)，HDL〔(1.13±0.29)mmol/L〕水平明顯低于健康對照組〔(1.33±0.33)mmol/L〕(P<0.05)；CHD組IL-6基因-634位點(diǎn)CG+GG基因型攜帶者的血清TC水平顯著高于CC基因型〔(4.72±1.09)mmol/L〕(P<0.05)。TG〔(1.75±0.83)mmol/L〕、HDL〔(1.07±0.31)mmol/L〕水平與CC基因型〔(1.70±0.92)、(1.14±0.30)mmol/L〕比較無顯著差異(P>0.05)。

1：DL-2000 Marker；2～4：PCR產(chǎn)物

1：CC基因型；2～3：CG基因型；4～5：GG基因型；6：DL-2000 Marker

表1CHD組與對照組IL-6基因多態(tài)性的分布〔n(%)〕

組別n基因型分布CC CG GG等位基因C GCHD組12067(55.8)47(39.2)6(5.0)181(75.4)59(24.6)健康對照組10070(70.0)29(29.0)1(1.0)169(84.5)31(15.5)χ2/P值6.16/P<0.055.53/P<0.025心絞痛組5733(57.9)22(38.6)2(3.5)88(77.2)26(22.8)心肌梗死組6334(54.0)25(39.7)4(6.3)93(73.8)33(26.2)χ2/P值0.60/P>0.050.37/P>0.05

3 討 論

炎癥因子基因表達(dá)水平的差異可能與人群對冠心病的易感性有關(guān)。在外周動(dòng)脈疾病中存在IL-6基因多態(tài)性等多種危險(xiǎn)因素共同影響〔3〕。IL-6系迄今發(fā)現(xiàn)的功能最為廣泛的炎性細(xì)胞因子之一，是肝急性期反應(yīng)蛋白-C-反應(yīng)蛋白(CRP)產(chǎn)生的主要介質(zhì)，在CHD發(fā)生發(fā)展過程中的作用可能比CRP更重要，參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，在CHD炎癥反應(yīng)過程中起關(guān)鍵作用〔4，5〕。 IL-6的基因定位于人類7號染色體短臂2區(qū)1帶，其中包含5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子。IL-6基因啟動(dòng)子上游區(qū)域634位點(diǎn)存在C→G堿基置換。

IL-6基因多態(tài)性影響CHD發(fā)病的可能機(jī)制尚不明確。其可能是相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展過程中的一個(gè)重要角色〔6〕。推測 IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)的-634位點(diǎn)多態(tài)性有可能改變基因的結(jié)合序列，增強(qiáng)或減弱基因的表達(dá)調(diào)控與表達(dá)水平，從而影響個(gè)體CHD發(fā)生的易感性。本研究認(rèn)為攜帶G基因型的個(gè)體可促進(jìn)血清TC的高度表達(dá)而間接增加CHD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

總之，本研究結(jié)果顯示IL-6基因-634C/G多態(tài)性可能是CHD發(fā)病的遺傳危險(xiǎn)因素之一，其可能通過改變基因的結(jié)合序列，增強(qiáng)或減弱基因的表達(dá)調(diào)控與表達(dá)水平，從而增加個(gè)體CHD發(fā)生的易感性。攜帶G基因型的個(gè)體可促進(jìn)血清TC的高度表達(dá)而間接增加CHD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

4 參考文獻(xiàn)

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