王雨，劉春英

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 研究生院，遼寧 沈陽(yáng) 110032)

補(bǔ)中益氣湯對(duì)A 5 4 9荷瘤小鼠脾臟上Caspase-3蛋白表達(dá)影響研究

王雨，劉春英△

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 研究生院，遼寧 沈陽(yáng) 110032)

目的研究補(bǔ)中益氣湯對(duì)半胱氨酸天冬氨酸酶-3（Caspase-3）在人肺腺癌細(xì)胞株(A 549)荷瘤小鼠脾臟上表達(dá)的影響。方法隨機(jī)對(duì)照法將24只A 549荷瘤BALB/c小鼠分為空白對(duì)照組，補(bǔ)中益氣湯低劑量組、補(bǔ)中益氣湯高劑量組，順氯氨鉑（cisplatin,DDP）組；補(bǔ)中益氣湯每日給藥2次連續(xù)10天，順鉑每日給藥1次連續(xù)3天，在連續(xù)15天后將所有荷瘤小鼠的脾臟取出。將新鮮的脾臟組織固定后制作石蠟切片。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組脾組織中Caspase-3蛋白表達(dá)的部位與含量多少；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR) 檢測(cè)各組組織中Caspase-3 mRNA的表達(dá)。結(jié)果免疫組化結(jié)果顯示與空白對(duì)照組相比，補(bǔ)中益氣湯低劑量組Caspase-3蛋白的表達(dá)量顯著增多(P＜0.05)，補(bǔ)中益氣湯高劑量組蛋白的表達(dá)量增多(P＜0.05)。而DDP組與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，DDP組與補(bǔ)中益氣湯低劑量組、補(bǔ)中益氣湯高劑量組相比的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。RT-PCR結(jié)果同免疫組化結(jié)果具有一致性。結(jié)論補(bǔ)中益氣湯可增加A 549荷瘤小鼠脾臟上Caspase-3蛋白的表達(dá)，從而使Caspase-3誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用增強(qiáng)。

人肺腺癌細(xì)胞株；半胱氨酸天冬氨酸酶-3；補(bǔ)中益氣湯；脾臟

肺癌在我國(guó)是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。當(dāng)今的21世紀(jì)肺癌已成為第一大惡性腫瘤，在常見(jiàn)的惡性腫瘤中肺癌的發(fā)生率及死亡率居于首位[1]。肺癌是受多因素影響多基因參與的一類(lèi)復(fù)雜性呼吸系統(tǒng)疾病，其病因與發(fā)病機(jī)制至今尚未明確。且男女性別差異和城鄉(xiāng)差別逐漸縮小，平均發(fā)病年齡逐年升高[2-3]。Caspase-3蛋白是介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的一種蛋白水解酶，即Caspase家族中的關(guān)鍵效應(yīng)酶，是執(zhí)行細(xì)胞凋亡的重要效應(yīng)分子，廣泛表達(dá)于正常人體組織及多種腫瘤組織中[4-6]。脾為人體最大的免疫器官，可以提高肺癌患者的免疫力[7-8]。研究表明補(bǔ)中益氣湯對(duì)肺與脾的補(bǔ)益作用符合“培土生金”的治療原則，且有治療肺癌所需的扶正固本、益氣補(bǔ)血、健脾補(bǔ)肺等功能，達(dá)到“扶正驅(qū)邪”的目的，能增加體內(nèi)Caspase-3蛋白的表達(dá)從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[9-11]。但補(bǔ)中益氣湯增加Caspase-3蛋白表達(dá)的作用機(jī)制尚不明確。本研究將通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)來(lái)探討補(bǔ)中益氣湯對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549荷瘤小鼠脾臟上Caspase-3蛋白表達(dá)的影響，為補(bǔ)中益氣湯在治療肺癌的臨床應(yīng)用上提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑 人肺腺癌細(xì)胞株A 549由中國(guó)醫(yī)科院腫瘤研究中心細(xì)胞庫(kù)提供。雌性SPF級(jí)BALB/c小鼠[動(dòng)物許可證號(hào)：scxk(京)2011-0011，體重9～11 g]購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；RIPA裂解液購(gòu)于北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司(批號(hào)：WB-0071)；熒光定量PCR儀購(gòu)于ABI公司。Caspase-3多克隆抗體(博奧森)；藥物順鉑注射液購(gòu)于山東齊魯醫(yī)藥有限公司(批號(hào)：2030132 DB)。

1.2 補(bǔ)中益氣湯煎劑的制備 以“人和動(dòng)物按體表面積折算等效劑量比值表”為計(jì)算原則，并根據(jù)人民衛(wèi)生出版社出版的《現(xiàn)代臨床方劑學(xué)》中規(guī)定的補(bǔ)中益氣湯用藥劑量(黃芪18 g，白術(shù)9 g，陳皮6 g，升麻6 g，柴胡6 g，人參6 g，甘草9 g，當(dāng)歸身3 g)，以及臨床常用劑量計(jì)算出小鼠用藥的等效劑量，分別設(shè)高、低劑量組，即5.82 g/kg（生藥）、1.46 g/kg（生藥），常規(guī)煎煮3次，煎至最終濃度為每毫升含生藥2.33 g濃縮成1 kg/L的補(bǔ)中益氣湯煎劑，放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 動(dòng)物分組與處理 用隨機(jī)數(shù)字表法將24只BALB/c小鼠隨機(jī)分成4組，每組6只。實(shí)驗(yàn)分組為：空白對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯低劑量組、補(bǔ)中益氣湯高劑量組、DDP組。荷瘤方法是在小鼠腋下均注射A549細(xì)胞懸液0.2 mL（密度為2×108/L），5 d后觀(guān)察小鼠腋下是否有米粒狀突起物，如果小鼠腋下出現(xiàn)米粒狀突起物，隨即開(kāi)始用藥?？瞻讓?duì)照組：每只小鼠0.5 mL的生理鹽水灌胃，每天2次，連續(xù)10 d；補(bǔ)中益氣湯低劑量組：每只小鼠0.5 mL的低劑量補(bǔ)中益氣湯灌胃，每天2次，連續(xù)10 d；補(bǔ)中益氣湯高劑量組：每只小鼠0.5 mL的高劑量補(bǔ)中益氣湯灌胃，每天2次，連續(xù)10 d；DDP組：注射DDP的劑量和方法是順鉑腹腔注射，l.38 mg/m2，每天1次，連續(xù)3 d。以上所有小鼠于給藥15 d后處死并且取出脾臟，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 免疫組織化學(xué) 采用免疫組織化學(xué)SABC法（親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物法）先將脾組織石蠟切片放置于玻片架上在干燥箱中以56℃烘烤40 min，之后將石蠟切片放置于染色缸中分別用二甲苯Ⅰ、Ⅱ（各浸泡15～30 min）脫蠟和下行梯度乙醇（浸泡無(wú)水乙醇Ⅰ、Ⅱ各5 min，95%、90%、80%及70%乙醇各2 min）水化，用PBS緩沖液沖洗5 min×3次后放置蒸餾水中待用。用溫度達(dá)到92℃以上的水浴箱對(duì)組織抗原Caspase-3蛋白進(jìn)行40 min加熱修復(fù)，PBS沖洗3 min×3次后0.3%TritonX-100（PBS稀釋30%TritonX-100，現(xiàn)用現(xiàn)配）中室溫浸泡25 min打孔細(xì)胞膜，用PBS沖洗5 min×3次后蒸餾水配制新鮮3%H2O2（蒸餾水稀釋30%H2O2，現(xiàn)用現(xiàn)配）室溫浸泡10 min滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗5 min×3次后每張切片滴加50μL正常山羊血清封閉液（與二抗同種動(dòng)物來(lái)源的血清），室溫孵育20 min，甩去多余液體，不洗。每張切片滴加按1∶100或1∶500比例稀釋的一抗（Rb a Caspase-3）50μL～100μL，4℃冰箱過(guò)夜或37℃孵育2 h，PBS沖洗5 min×3次。每張切片滴加兔IgG-免疫組化試劑盒（SABC即用型試劑盒）中羊抗兔IgG-Biotin一滴，37℃孵育20 min，PBS沖洗3 min×3次。每張切片滴加SABC即用型試劑盒中SABC液一滴，37℃孵育20 min，PBS沖洗3 min×3次。室溫配置DAB溶液（現(xiàn)用現(xiàn)配）顯色，白色紙張作襯5～10 min內(nèi)組織顯示為淡棕色時(shí)或者顯微鏡下控制顯色程度直至其呈現(xiàn)最合適的免疫反應(yīng)陽(yáng)性效果后用蒸餾水洗滌終止顯色。蘇木素復(fù)染5～10 s，自來(lái)水返藍(lán)，流水沖洗40 min，上行梯度乙醇（70%、80%、90%、95%及無(wú)水乙醇）脫水各2 min和二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各10 min，中性樹(shù)脂膠水封片，顯微鏡下觀(guān)察。

2.2 PCR檢測(cè)各組脾組織中Caspase-3 mRNA的表達(dá)采用Trizol一步法，提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。Caspase-3引物序列：上游引物5-GTCCCACTGTCTGTCTCA-3 PIE，下游引物3-GAATGTCATCTCGCTCTG-5；內(nèi)參序列：上游引物5′-CCAACCGTGAAAAGATGACC-3′，下游引物5′-CAGGAGGAGCAATGATCTTG-3′；長(zhǎng)度為498 bp，預(yù)變性94℃ 1 min， 退火60℃ 1 min，延伸72℃ 2 min，循環(huán)35次。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS Stastistics 17.0數(shù)據(jù)編輯器統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以“x±s”表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 補(bǔ)中益氣湯對(duì)各組脾組織上Caspase-3蛋白表達(dá)的影響 結(jié)果顯示，空白對(duì)照組中Caspase-3蛋白在細(xì)胞漿和細(xì)胞核中均無(wú)表達(dá)；補(bǔ)中益氣湯低劑量組與空白對(duì)照組相比，胞漿中明顯出現(xiàn)棕黃色顆粒，表明Caspase-3蛋白的表達(dá)量明顯增加(P＜0.05)；Caspase-3蛋白的表達(dá)量隨著補(bǔ)中益氣湯劑量的增加而明顯增多，補(bǔ)中益氣湯高劑量組與空白對(duì)照組相比胞漿中出現(xiàn)大量較大的棕黃色染色顆粒，與補(bǔ)中益氣湯低劑量組相比胞漿中大量出現(xiàn)的棕黃色顆粒明顯成片，Caspase-3蛋白的表達(dá)量顯著增多(P＜0.05)。而DDP組與空白對(duì)照組相比，Caspase-3蛋白的表達(dá)量少量增多，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DDP組Caspase-3蛋白的表達(dá)量與補(bǔ)中益氣湯低劑量組、補(bǔ)中益氣湯高劑量組相比的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01，見(jiàn)圖1、圖2)。

圖1 補(bǔ)中益氣湯對(duì)各組脾細(xì)胞中Caspase-3蛋白表達(dá)量的影響（免疫組織化學(xué)法)(×400)A.空白對(duì)照組；B.補(bǔ)中益氣湯低劑量組（1.46 g·kg-1）；C.補(bǔ)中益氣湯高劑量組(5.82 g·kg-1）；D.DDP組Fig.1 Effect of Buzhong Yiqi Decoction on the expression of Caspase-3 protein in every group(Immunohistochemical method)(×400）A. Control group；B. Low-dose group（1.46 g·kg-1）；C. High-dose group（5.82 g·kg-1）；D. DDP group

圖2 補(bǔ)中益氣湯對(duì)各組脾細(xì)胞中Caspase-3 AOD表達(dá)量的影響*P＜0.05，與空白對(duì)照組相比；△P＜0.05，與補(bǔ)中益氣低劑量組相比；##P＜0.01，與補(bǔ)中益氣高劑量組相比Fig.2 Effect of Buzhong Yiqi Decoction on the expression of Caspase-3 AOD in every group*P＜0.05，compared with control group；△P＜0.05， compared with low-dose group；##P＜0.01，compared with high-dose group

3.2 補(bǔ)中益氣湯對(duì)各組脾組織上Caspase-3 mRNA表達(dá)的影響 與空白對(duì)照組相比，補(bǔ)中益氣湯低劑量組Caspase-3 mRNA的表達(dá)顯著增加(P＜0.01)。隨著補(bǔ)中益氣湯劑量的增加，脾細(xì)胞上Caspase-3 mRNA的表達(dá)也增多。與空白對(duì)照組相比，補(bǔ)中益氣湯高劑量組Caspase-3 mRNA的表達(dá)顯著增加(P＜0.05)，并且與低劑量組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。而DDP組Caspase-3 mRNA的表達(dá)與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，與補(bǔ)中益氣湯低劑量組、補(bǔ)中益氣湯高劑量組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。將RT-PCR檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，同空白對(duì)照組相比，補(bǔ)中益氣湯低劑量組，補(bǔ)中益氣湯高劑量組和DDP組與之的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)圖3）。

圖3 補(bǔ)中益氣湯對(duì)各組脾細(xì)胞中Caspase-3 mRNA表達(dá)量的影響*P＜0.05，*P＜0.01，與空白對(duì)照組相比；△P＜0.05，△△P＜0.01，與補(bǔ)中益氣低劑量組相比；##P＜0.01，與補(bǔ)中益氣高劑量組相比Fig.3 Effect of Buzhong Yiqi Decoction on the expression of Caspase-3 mRNA in every group*P＜0.05，*P＜0.01，compared with control group；△P＜0.05，△△P＜0.01，compared with low-dose group；##P＜0.01，compared with highdose group

4 討論

我國(guó)人口老齡化現(xiàn)狀導(dǎo)致肺癌的發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢(shì)，因此肺癌是影響我國(guó)居民健康的主要惡性腫瘤，必須采取積極有效的防治措施[12]。根據(jù)組織學(xué)分類(lèi)，肺癌中的肺腺癌屬于一種非小細(xì)胞癌，目前在臨床上針對(duì)于肺腺癌的常用治療方法包括手術(shù)、化療、放療等等。長(zhǎng)期以來(lái)，常規(guī)西醫(yī)診療方法在對(duì)抗腫瘤的同時(shí)也不可避免地產(chǎn)生了一些不良反應(yīng)。既往大量研究表明，Caspase-3蛋白與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[13-15]，且中藥可通過(guò)調(diào)節(jié)脾的免疫功能從而對(duì)腫瘤產(chǎn)生抑制作用[16]。

本實(shí)驗(yàn)以A549荷瘤小鼠的脾組織作為研究對(duì)象，研究補(bǔ)中益氣湯對(duì)荷瘤小鼠脾臟上Caspase-3蛋白表達(dá)的影響，并檢測(cè)補(bǔ)中益氣湯對(duì)脾臟上Caspase-3蛋白基因表達(dá)的影響。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：補(bǔ)中益氣湯可使A549荷瘤小鼠脾臟上Caspase-3蛋白的表達(dá)量增加，并呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性——?jiǎng)┝吭礁逤aspase-3蛋白的表達(dá)量越大。其對(duì)于耐順鉑肺腺癌患者脾細(xì)胞上Caspase-3蛋白的表達(dá)也有一定影響，表明祖國(guó)醫(yī)學(xué)傳統(tǒng)方劑補(bǔ)中益氣湯能緩解肺腺癌患者對(duì)于順鉑的耐藥性，提高治療藥物對(duì)腫瘤的作用，并且有研究證實(shí)中醫(yī)藥針對(duì)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療手段下的耐藥肺腺癌患者具有一定的臨床療效[17-18]。但是尚不明確補(bǔ)中益氣湯是否能完全逆轉(zhuǎn)肺腺癌患者對(duì)于化療的耐藥性。另外對(duì)Caspase-3蛋白的基因檢測(cè)表明，補(bǔ)中益氣湯能使Caspase-3蛋白mRNA的表達(dá)量增多，且表達(dá)量與補(bǔ)中益氣湯的劑量呈正相關(guān)。本研究表明，低劑量和高劑量的補(bǔ)中益氣湯均可增加肺腺癌患者脾臟上Caspase-3蛋白的表達(dá)，且高劑量的補(bǔ)中益氣湯可使其表達(dá)更明顯，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，達(dá)到緩解或治療肺腺癌的目的。

截止到目前，已有大量實(shí)驗(yàn)研究表明現(xiàn)代醫(yī)學(xué)手段聯(lián)合中藥能更好地改善或治療腫瘤，特別是對(duì)于惡性腫瘤有明顯的臨床療效，并且可以減低現(xiàn)代醫(yī)學(xué)手段帶來(lái)的毒副作用[19-20]。例如有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可通過(guò)誘導(dǎo)Caspase-3蛋白的表達(dá)而起到誘導(dǎo)A549腫瘤細(xì)胞凋亡的作用[21]。本實(shí)驗(yàn)研究可為臨床上治療肺腺癌的個(gè)體化合理方案提供理論參考，從而將中醫(yī)藥與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)手段有效結(jié)合起來(lái)。但是補(bǔ)中益氣湯增強(qiáng)肺腺癌患者脾臟上Caspase-3蛋白表達(dá)的具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

[1] 楊玲，李連弟，陳育德，等.中國(guó)肺癌死亡趨勢(shì)分析及發(fā)病、死亡的估計(jì)與預(yù)測(cè)[J].中國(guó)肺癌雜志，2005，8(4)：274-278.

[2] 王強(qiáng)修，李鈞，朱良明.肺癌診斷與治療[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2013:16.

[3] 韓仁強(qiáng)，鄭榮壽，張思維，等.1989年-2008年中國(guó)肺癌發(fā)病性別、城鄉(xiāng)差異及平均年齡趨勢(shì)分析[J].中國(guó)肺癌雜志，2013，16(9)：445-451.

[4] Hishikawa K,NakakiT,FujiiT.Connective tissue growth factor induce apoptosis via Caspase-3 in culturel human aortic smooth muscle cells [J].Eur J Pharmaco,2000,392(1-2):19-22.

[5] Sykes MC,Mowbray AL,Jo H.Reversible Glutathiolation of caspase-3 by glutaredoxin as a novel redox signaling mechanism in tumor necrosis Factorα-InducedCellDeath[J].Cir Res,2007,100(2):152-154.

[6] Kageaki Kuribayashi,Patrick A.Mayes,Wafik S.El-Deiry.What are Caspases 3 and 7 Doing Upstream of the Mitochondria?[J].Cancer Biology and Therapy,2006,5(7):763-765.

[7] 陳丹丹，宋亮，劉麗娟.黃芪多糖對(duì)肺氣虛小鼠免疫調(diào)節(jié)作用[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，30(3)：35-37.

[8] 鄭紅剛，樸炳奎，花寶金，等.肺瘤平膏及其拆方對(duì)Lewis肺癌小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，30(12)：1288-1291.

[9] 李自全，蔡倫華，吳萬(wàn)梅，等.甘溫除熱法在腫瘤發(fā)熱中的應(yīng)用[J].四川中醫(yī)，2008，26(7)：61.

[10] 張?chǎng)?扶正法治療肺癌芻議[J].江西中醫(yī)藥，2007，38(291)：52-53.

[11] 高天舒，韓曉晴，尹慧絲.補(bǔ)中益氣湯對(duì)甲狀腺功能減退大鼠心肌細(xì)胞凋亡及Fas、Fasl和Caspase-3蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(10)：236-239.

[12] 陳萬(wàn)青，張思維，鄒小農(nóng).中國(guó)肺癌發(fā)病死亡的估計(jì)和流行趨勢(shì)研究[J].中國(guó)肺癌雜志，2010，13(5)：488-493.

[13] 王艷，宋英，買(mǎi)玲.Survivin、Caspase-3和Bcl-2在肺癌中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)癌癥雜志，2009，19(1)：25-28.

[14] 王靖華，陳龍邦，黃文斌，等.Survivin和Caspase-3在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J].中國(guó)肺癌雜志，2005，8(5)：435-438.

[15] 李承慧，胡冰，王曉秋，等.非小細(xì)胞肺癌中Caspase-3、Survivin、K-ras的表達(dá)及其意義[J].中國(guó)肺癌雜志，2008，11(1)：90-95.

[16] 于明薇，孫桂芝，吳潔，等.黃芪、蘇木及其組方對(duì)荷瘤小鼠脾調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)及血清細(xì)胞因子水平的干預(yù)作用[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33(4)：241-245.

[17] 農(nóng)麗，伍鋼，戴曉芳，等.吳茱萸堿逆轉(zhuǎn)人肺癌細(xì)胞株A 549/DDP耐藥機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2010，15(6)：487.

[18] 胡碩，胡成平，梁昌華，等.人參單體Rh2對(duì)肺腺癌耐藥細(xì)胞促凋亡作用的研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，25(2)：14-16.

[19] 胡強(qiáng)，汪宏云，楊勇剛.補(bǔ)中益氣湯防治晚期肺癌化療毒副反應(yīng)臨床觀(guān)察[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2008，24(5)：271-272.

[20] 劉明，薛芳芳.化療聯(lián)合補(bǔ)中益氣湯加減治療中晚期非小細(xì)胞肺癌30例[J].湖南中醫(yī)雜志，2013，29(5)：42-44.

[21] 聞春生，應(yīng)斌武，張永剛，等.槲皮素對(duì)肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞中凋亡相關(guān)因子Caspase-3表達(dá)的影響[J].中國(guó)肺癌雜志，2008，11(2)：194.

Effect of Buzhong Yiqi Decoction on the expression of Caspase-3 protein of A549 tumor-bearing mice’spleen

WANG Yu,LIU Chun-YingΔ
(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Faculty of Graduate Studies,Shenyang 110032,China)

ObjectiveTo analyses the effect of Buzhong Yiqi Decoction on the expression of Caspase-3 in human lung adenocarcinoma cells (A 549) tumor-bearing mice’spleen。Method24 BALB/c mice were randomly divided into the control group(given saline),low-dose and high-dose Buzhong Yiqi Decoction groups,cisplatin(DDP)group；Buzhong Yiqi Decoction was administered twice daily for 10 days consecutively and DDP was administered once daily for 3 days consecutively, after 15 days was the spleens of all tumor-bearing mice were obtained.The expression of Caspase-3 protein and Caspase-3 mRNA in every group were detected by immunohistochemical method seperately and polymerase chain reaction method seperately。ResultsCompared with control group,the result of immunohistochemistry showed that the expression of the Caspase-3 protein in Buzhong Yiqi Decoction low-dose group and high-dose group were both ssigni fi cantly increased (P＜0.05). The differences hetween DDP group and control group was not signi fi cant, but the differences between DDP sroup and Buzhong Yigi Decoction Low-dose sroup and hishdoe group were signi fi cant (P＜0.05, P＜0.01).The result of RFPCR was accordance with the result of immunohisto chemistry。ConclusionBuzhong Yiqi Decoction can increase the expression of Caspase-3 protein in A549 ctumor-bearing mice’spleen,and promote the Caspase-3’s inducing effect on tumor cell apoptosis.

A549;Caspase-3;Buzhong Yiqi Decoction;spleen

R 285.5

A

1005-1678(2014)01-0019-03

遼寧省自然基金資助項(xiàng)目（20102145）

王雨，女，碩士在讀，研究方向：中藥干預(yù)腫瘤細(xì)胞凋亡，Email：63 wym@sina.com。劉春英，通信作者，女，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥抗腫瘤作用機(jī)制研究，Email：chunying 99@163.com。