于丹，劉巖，趙雪，程金章，齊欣萌，金春順

（吉林大學(xué) 第二臨床醫(yī)院 耳鼻咽喉頭頸外科，吉林 長(zhǎng)春 130041）

鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail在喉癌中的表達(dá)及其與不同亞群喉癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

于丹，劉巖，趙雪，程金章，齊欣萌，金春順△

（吉林大學(xué) 第二臨床醫(yī)院 耳鼻咽喉頭頸外科，吉林 長(zhǎng)春 130041）

目的探討鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況及其與臨床特征的關(guān)系,通過檢測(cè)不同喉癌細(xì)胞亞群中Snail的表達(dá)研究其與喉癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。方法免疫組化法檢測(cè)吉林大學(xué)第二醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科48例喉癌組織和20例癌旁對(duì)照組織手術(shù)標(biāo)本Snail蛋白的表達(dá)情況，并分析Snail與臨床特征的相關(guān)性。采用RT-PCR及Western blot和細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測(cè)CD 44+CD 133+、CD 44-和CD 133-不同亞群喉癌細(xì)胞中Snail和粘附分子E-cadherin的表達(dá)情況，并與侵襲及轉(zhuǎn)移進(jìn)行相關(guān)性探討。結(jié)果Snail在喉癌組織中表達(dá)水平顯著高于癌旁對(duì)照組織(P＜0.01)。Snail的表達(dá)與喉癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度密切相關(guān)（P＜0.05），而與患者的性別、年齡、臨床分型等無關(guān)。RT-PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果均證實(shí)，Snail在CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于CD 44-和CD 1333-喉癌細(xì)胞，而粘附分子E-cadherin在CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯低于CD 44-和CD 133-喉癌細(xì)胞，細(xì)胞免疫組化染色證實(shí)CD 44+CD 133+喉癌亞群細(xì)胞中Snail和E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論Snail的表達(dá)與喉癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān),且在高致瘤亞群CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞中呈顯著高表達(dá)，與粘附分子E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與喉癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移具有密切相關(guān)性。

喉癌；Snail；E-cadherin；腫瘤轉(zhuǎn)移;上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化

1 資料和方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取吉林大學(xué)第二醫(yī)院2011年1月～2013年10月48例喉鱗狀細(xì)胞癌患者癌組織和20例同期手術(shù)病例的癌旁組織進(jìn)行SP染色，每例患者均有明確的臨床分型、病理診斷及詳細(xì)的病歷資料（所有患者資料的選取已經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)），臨床分期采用2002年抗癌國際聯(lián)盟（UICC）正式頒布的喉癌TNM分期法?；颊咝g(shù)前均未接受放療和化療，男性33例，女性15例，年齡51～67歲，平均59.21±2.34歲。將Hep-2喉癌細(xì)胞應(yīng)用帶有熒光的細(xì)胞表面抗原CD 133和CD 44標(biāo)記，應(yīng)用流式細(xì)胞分選技術(shù)分選為CD 133+CD 44+細(xì)胞組、CD 44-細(xì)胞和CD 133-細(xì)胞組。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及用品 SP免疫組化試劑盒購自長(zhǎng)春百奧生物技術(shù)公司。Snail、E-cadherin和GAPDH引物均由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。Snail和E-cadherin單克隆抗體購自SantaCruz公司。RPMI 1640培養(yǎng)基及胎牛血清購自美國Gibco公司。藻紅蛋白（phycoerythrobilin，PE）抗鼠CD 133及異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC)抗鼠CD 44購自美國 Gene Tex公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 免疫組化SP法 具體方法詳見試劑盒說明書。結(jié)果判定：Snail陽性信號(hào)為細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒，每張切片高倍鏡下隨機(jī)選取10不同的視野，按陽性細(xì)胞數(shù)占視野中總細(xì)胞數(shù)的百分比計(jì)分。陽性細(xì)胞率＜10%為1分，10%＜陽性細(xì)胞率≤50%為2分，50%＜陽性細(xì)胞率≤75%為3分，陽性細(xì)胞率＞75%為4分；同時(shí)，根據(jù)染色的強(qiáng)弱程度計(jì)分：陰性1分，弱染色2 分，中等強(qiáng)度染色3分，強(qiáng)染色4分。通過二者的乘積來判斷結(jié)果：≤4分為（－）；5～8分為（＋）；9～12分為（＋＋）；13～16 分為（＋＋＋）。

1.3.2 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（P T-P C R）和Western blot法檢測(cè)Snail和E-cadherin基因在各亞群喉癌細(xì)胞中的表達(dá)：針對(duì)人 Snail基因的 cDNA序列(5’-AGAGTTTACCTTCCAGCCCCTACGACCAG GCCC-3’；5’-AAGGCCTTCAACTGCAAATACTG CAA-3’）片斷長(zhǎng)度為315 bp。針對(duì)人E-cadherin基因cDNA序列（5’-GGCATTGGGAAGAATCAGCC-3’；5’－ATTGATGTGTCCAATGGCCG-3’）片段長(zhǎng)度：4 8 7 b p。以 GA P D H為內(nèi)參基因，其上游引物序列為5’-CTGGGACGACATGGAGAAAA-3’，下游引物序列為 5’-AAGGAAGGCTGGAAGAGTGC-3’，片斷長(zhǎng)度為600 bp。PCR擴(kuò)增條件為熱變性94℃5 min；94℃30 s，56℃30 s，72℃1 min，30～35個(gè)循環(huán)，72℃4 min。取5μL反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳分析。Westernblot法常規(guī)提取蛋白，Bradford法進(jìn)行蛋白定量。蛋白電泳，電轉(zhuǎn)膜后用0.01 mol/L的 PBS洗膜3次，8%脫脂奶粉室溫封閉2 h，加入一抗（1∶1000），4℃過夜，洗膜3次，加入二抗（1∶1000），37℃孵育1 h，洗膜3次，按化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑盒說明操作，顯影、定影、沖洗、晾干后進(jìn)行灰度掃描。

1.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)及流式細(xì)胞儀分選：應(yīng)用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基常規(guī)行Hep-2喉癌細(xì)胞培養(yǎng)，各個(gè)喉癌細(xì)胞亞群的流式細(xì)胞儀分選步驟詳見參考文獻(xiàn)[4]。

1.3.4 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 將流式細(xì)胞儀分選得到的CD 44+CD 133+細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)并以1×104/孔密度接種于24孔板內(nèi)的蓋玻片上，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合后，PBS沖洗蓋玻片，4%多聚甲醛固定30 min，PBS洗滌3次后經(jīng)3%過氧化氫孵育10 min，PBS沖洗3次后10%正常山羊血清室溫封閉20 min，滴加一抗（1∶50鼠抗人Snail抗體和1∶100鼠抗人E-cadherin抗體）。4℃過夜后，按SP免疫組化染色試劑盒說明操作，DAB染色，蘇木精復(fù)染，棕褐色為陽性顯色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組正態(tài)計(jì)量資料均采用“x±s”表示，KS 400圖像系統(tǒng)進(jìn)行灰度分析，用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所得數(shù)據(jù)百分率的比較用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。采用單因素方差分析及各組間比較。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化分析Snail蛋白在喉癌組織中的表達(dá) 免疫組化染色結(jié)果：Snail蛋白在癌旁對(duì)照組織中染色呈陰性或弱陽性，Snail蛋白陽性表達(dá)主要集中在癌細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，鏡下呈現(xiàn)棕黃色或者棕色顆粒。在高分化喉癌組織中表現(xiàn)為弱染色和或中等強(qiáng)度染色，在中低分化喉癌組織中，多表現(xiàn)為強(qiáng)染色(見圖1)。

圖1 免疫組化檢測(cè)喉癌組織中Snail的表達(dá)1 a 癌旁組織中表達(dá)較少（×200）；1 b.高分化喉癌組織中為弱染色（×200）；1 c.中分化鱗狀細(xì)胞癌中呈現(xiàn)較強(qiáng)染色（×200）；1 d.低分化鱗狀細(xì)胞癌中呈現(xiàn)強(qiáng)染色（×200）Fig.1 Analysis of Snail protein expression by immunohistochemistry in laryngeal carcinomas1 a Negative Snail staining in adjacent non-cancerous epithelial tissue sample (×200)；1 b.weak positive Snail staining in well differentiated laryngeal carcinoma (×200)；1 c.Positive Snail staining in moderately differentiated laryngeal carcinoma (×200)；1 d.Strong Positive Snail staining in poorly differentiated laryngeal carcinoma (×200)

2.2 Snail因子在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性 Snail的表達(dá)與喉癌的臨床特征的相關(guān)性見表1所示。

表1 Snail蛋白的表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌臨床特征的相關(guān)性Tab.1 The correlation between the Snail expression and clinical characteristics of laryngeal carcinoma

2.3 Snail和E-cadherin在各亞群喉癌細(xì)胞中的表達(dá)情況 RT-PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果均證實(shí)，各亞群喉癌細(xì)胞中Snail和E-cadherin mRNA和蛋白質(zhì)水平均有不同程度的表達(dá)（見圖2及表2），Snail在CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于CD 44-和CD 1333-喉癌細(xì)胞，而粘附分子E-cadherin在CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯低于CD 44-和CD 133-喉癌細(xì)胞組（圖2 a和圖2 b），且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各亞群細(xì)胞中Snail 和E-cadherin mRNA灰度值及蛋白表達(dá)量Tab 2. The expression of mRNA and protein of Snail and E-cadherinin in subgroups of laryngeal carcinoma cells

以GAPDH蛋白表達(dá)量為對(duì)照（設(shè)為1.000），在上樣蛋白量基本一致的條件下，各亞群細(xì)胞中Snail和E-cadherin蛋白均有不同程度的表達(dá)。

2.4 細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測(cè)CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞亞群中Snail和E-cadherin的表達(dá)情況 CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞亞群中Snail呈現(xiàn)高表達(dá)，胞漿和胞核被染成深淺不一的棕黃色；而E-cadherin呈弱陽性表達(dá)（見圖3）。

圖2 a 各亞群喉癌細(xì)胞中Snail 和E-cadherin mRNA的表達(dá)M.1 kb DNA Ladder；1.CD 44-喉癌細(xì)胞中Snail 和E-cadherin的表達(dá)；2.CD 133-喉癌細(xì)胞中Snail和E-cadherin 的表達(dá)；3.CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞中Snail和E-cadherin的表達(dá)Fig.2 a Snail and E-cadherin mRNA expression in different subgroup laryngeal carcinoma cellsM.1 kb DNA ladder；1.Snail and E-cadherin mRNA expression in CD 44- laryngeal carcinoma cells；2.Snail and E-cadherin mRNA expression in CD 133-laryngeal carcinoma cells；3.Snail and E-cadherin mRNA expression in CD 44+CD 133+laryngeal carcinoma cells

圖2 b 各亞群喉癌細(xì)胞中Snail和E-cadherin蛋白的表達(dá)1.CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞中Snail和E-cadherin 蛋白質(zhì)的表達(dá)；2.CD 44-喉癌細(xì)胞中Snail和E-cadherin的表達(dá)；3.CD 133-喉癌細(xì)胞中Snail和E-cadherin的表達(dá)Fig.2 b The expression of Snail and E-cadherin protein in different subgroup laryngeal carcinoma cells1.The expression of Snail and E-cadherin protein CD 44+ CD 133+inlaryngeal carcinoma cells；2.Snail and E-cadherin mRNA expression in CD 44- laryngeal carcinoma cells；3.Snail and E-cadherin mRNA expression in CD 133- laryngeal carcinoma cells

圖3 CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞亞群中Snail和E-cadherin的表達(dá)情況3 a. Snail在胞核及胞質(zhì)可見高表達(dá)，表現(xiàn)為棕黃色顆粒（×200）；3 b.E-cadherin表達(dá)在細(xì)胞膜，呈弱陽性表達(dá)（×200）；3 c.CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞陰性對(duì)照（×200）Fig.3 The expression of Snail and E-cadhein in CD 44+CD 133+ of laryngeal carcinoma cells3 a. Strong Positive Snail staining in cytoplasm and cell nucleus of CD 44+CD 133+ laryngeal carcinoma cells(×200)；3 b.weak positive E-cadherin staining on the surface of cell membrane in CD 44+CD 133+ laryngeal carcinoma cells (×200)；3 c.negtive control of CD 44+CD 133+ laryngeal carcinoma cells (×200)

3 討論

喉癌是東北地區(qū)患病率較高的惡性腫瘤之一，占全身惡性腫瘤的5.7%～7.6%[5]，其發(fā)病率居頭頸部腫瘤第三位。隨著臨床醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，喉癌的綜合治療方式（包括手術(shù)及放、化療方案）得到不斷改進(jìn)，但局部復(fù)發(fā)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移仍是喉癌患者主要的死亡原因。因此，研究喉癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制并尋找新的治療靶點(diǎn)是我們迫切需要解決的問題 。目前，“腫瘤干細(xì)胞”學(xué)說認(rèn)為：腫瘤細(xì)胞具有異質(zhì)性，具有腫瘤干細(xì)胞特性的細(xì)胞亞群有較強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[6]，是腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源所在，而EMT是腫瘤干細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移早期的重要啟動(dòng)步驟。EMT過程中首先是與細(xì)胞粘附有關(guān)的細(xì)胞因子的表達(dá)下調(diào)使連續(xù)的上皮層細(xì)胞間作用變松散，從原發(fā)部位脫落，其次是上皮細(xì)胞分子構(gòu)成改變，使細(xì)胞獲得侵襲和運(yùn)動(dòng)能力。在此過程中，E-cadherin下調(diào)起到了關(guān)鍵作用。細(xì)胞黏附分子E-cadherin蛋白是一種鈣依賴性細(xì)胞黏附分子[7]，分布在上皮組織中，而鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail則通過與E-cadherin上游啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合而轉(zhuǎn)錄抑制其表達(dá)［8］。人們首先在果蠅中發(fā)現(xiàn)了鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail的存在，在原腸胚形成中，可以通過轉(zhuǎn)錄抑制E-cadherin表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞從相鄰細(xì)胞脫落并遷移至遠(yuǎn)處［9－10］。由于在腫瘤轉(zhuǎn)移中也存在癌細(xì)胞脫落、轉(zhuǎn)移的事件發(fā)生，因此引起了廣大腫瘤研究者對(duì)Snail/ E-cadherin通路在腫瘤轉(zhuǎn)移中作用的研究興趣。研究證實(shí)[11]：通過RT-PCR檢測(cè)Snail的表達(dá)，證實(shí)在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中，Snail的表達(dá)明顯增高，E-cadherin表達(dá)下降，二者呈負(fù)相關(guān)。卓文磊等[12]發(fā)現(xiàn)：高侵襲性人肺腺癌A 549細(xì)胞株高表達(dá)Snail，而E-cadherin呈低表達(dá)，提示Snail/E-cadherin通路與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。研究證明在肝癌細(xì)胞中，Snail不僅通過抑制E-cadherin的表達(dá)來介導(dǎo)EMT的發(fā)生，還通過調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員的表達(dá)來增加肝癌細(xì)胞的侵襲能力，在肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用[13]。夏曦等[14]研究表明：將PEGFPC 1/Snail轉(zhuǎn)染入卵巢癌細(xì)胞株A 2780后，細(xì)胞內(nèi)E-cadherin的表達(dá)明顯下調(diào)，而轉(zhuǎn)染Snail/siRNA入卵巢癌細(xì)胞株，則使E-cadherin表達(dá)明顯上調(diào)，提示Snail因子的表達(dá)與卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。

在本項(xiàng)研究中，首先采用免疫組化SP方法檢測(cè)喉癌組織中Snail的表達(dá)，并觀察與喉癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果表明：隨著喉癌病理分級(jí)的增高，Snail的陽性表達(dá)強(qiáng)度隨之增強(qiáng)，提示惡性程度較高的喉癌細(xì)胞更具有轉(zhuǎn)移能力。Snail的表達(dá)與患者的年齡、性別及腫瘤的臨床分型無相關(guān)性。而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期具有相關(guān)性，在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的喉癌組織中表達(dá)明顯高于不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示Snail基因與喉癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，可以成為進(jìn)一步研究的靶點(diǎn)。

研究表明：Snail和 E-cadherin在很多上皮性癌中存在明顯的反向表達(dá)。在對(duì)鱗狀細(xì)胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)，E-cadherin陰性克隆細(xì)胞侵襲力強(qiáng)且高表達(dá)Snail因子，E-cadherin陽性克隆侵襲力弱，Snail的表達(dá)呈陰性或弱陽性[15]。本課題組在前期針對(duì)喉癌干細(xì)胞的初步研究中已經(jīng)證實(shí)高致瘤細(xì)胞亞群（CD 44+CD 133+細(xì)胞）具有較強(qiáng)的局部侵襲能力[4]，因此預(yù)通過此研究證實(shí)其侵襲能力是否與Snail 的表達(dá)具有相關(guān)性。應(yīng)用RT-PCR、Western blot和細(xì)胞免疫化學(xué)染色，結(jié)果均證實(shí)在基因和蛋白質(zhì)水平上Snail 在高致瘤亞群CD 44+CD 133+喉癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)，且與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，筆者認(rèn)為，Snail可能通過抑制E-cadherin的表達(dá)從而導(dǎo)致上皮間連接的破壞，使癌細(xì)胞間粘附松散則易于脫離原發(fā)灶而發(fā)生侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此聯(lián)合檢測(cè)Snail與E-cadherin的表達(dá)可作為喉癌惡性程度及預(yù)后的參考指標(biāo)。

腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移過程受多種因素的影響，而EMT參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Snail的表達(dá)與喉癌臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，同時(shí)亦初步證實(shí)了在具有較強(qiáng)的侵襲能力的喉癌細(xì)胞CD 44+CD 133+亞群細(xì)胞中Snail/E-cadherin通路可能在其中起到了重要的作用，相關(guān)的機(jī)制還有待于在進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中深入的研究和探討。

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Expression of Snail in laryngeal carcinoma and its relationship with invasion and metastasis in subgroup laryngeal carcinoma cells

YU Dan, LIU Yan，ZHAO Xue，CHENG Jin-zhang，QI Xin-meng，JIN Chun-shun△
(Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, The Second Hospital of Jilin University , Changchun 130041,China)

ObjectiveTo study the expression of Snail in laryngeal carcinoma and to explore its relationship with invasion and metastasis in subgroup laryngeal carcinoma cells。MethodThe expression of Snail protein was examined by immunohistochemistry staining in the tissue of laryngeal carcinoma. The statistical evaluation was performed to detect the correlation between the Snail protein expression and clinical features. In different subgroups of laryngeal carcinoma cells (CD 44+CD 133+cells, CD 44 and CD 133–cells), the expression of Snail and adhesion molecules E-cadherin were detected by RT-PCR，Western blot test and immunochemical staining which were studied in the correlation with invasion and metastasis。ResultsThe result of immunohistochemical staining revealed that Snail was moderately or highly expressed in the tissue of laryngeal carcinoma significantly and higher than those in adjacent non-cancerous tissues(P＜0.01). Expression of Snail was highly correlated with lymph node metastasis, tumor differentiation and clinical classi fi cation（P＜0.05）.However, it was not related to the age , gender and clinical type. RT-PCR and Western blot test results con fi rmed that the expression level of Snail was signi fi cantly higher in CD 44+CD 133+laryngeal cancer cells than in CD 44-and CD 133-laryngeal cancer cells, otherwise the expression level of E-cadherin in CD 44+CD 133+laryngeal cancer cells was signi fi cantly lower than in the CD 44-and CD 133-laryngeal cancer cells. Cell immunohistochemical staining con fi rmed the expression of Snail and E-cadherin were negatively correlated in CD 44+CD 133+laryngeal cancer cells。ConclusionOver expression of Snail in laryngeal carcinoma is closely related to the development of laryngeal cancer and lymph node metastasis. The expression of Snail in the CD 44+CD 133+laryngeal cancer cell subgroup is negatively correlated with adhesion molecules E-cadherin, which is a close correlation with invasion and metastasis of laryngeal cancer cells.

laryngeal carcinoma；Snail；E-cadherin；tumor metastasis; epithelial-mesenchymal transition

R 739.91

A

1005-1678(2014)01-0001-05

上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是指上皮細(xì)胞在特定的生理及病理情況下向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象，表現(xiàn)為上皮細(xì)胞失去極性，與周圍細(xì)胞和基質(zhì)間的黏附能力減小，遷移性和運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)，EMT是腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移早期的重要啟動(dòng)步驟，與腫瘤細(xì)胞的原位侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系［1］。研究表明：轉(zhuǎn)錄因子Snail可促進(jìn)EMT的發(fā)生，并在多種腫瘤中呈高表達(dá)［2］。近年來Snail/E-cadherin信號(hào)通路在EMT中的作用越來越受到人們的關(guān)注[3]。本研究通過檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子Snail在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)，研究其與喉癌臨床特征的關(guān)系，并通過檢測(cè)不同生物學(xué)特性喉癌細(xì)胞亞群中Snail和E-cadherin的表達(dá)情況，評(píng)估其與喉癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

吉林省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（20130101151JC）；教育部博士點(diǎn)新教師基金項(xiàng)目（20120061120092）

于丹，女，博士，主治醫(yī)師，研究方向：喉癌干細(xì)胞的基礎(chǔ)研究，E-mail:yudan 19792003@163.com；金春順，通信作者，女，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：頭頸腫瘤的基礎(chǔ)及臨床研究，Tel:0431-88796636，E-mail:chunshunjindan@163.com。