盛望鵬

（海南科技職業(yè)學(xué)院生物與化工學(xué)院，海南 ?？?571126）

八正顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改善研究

盛望鵬

（海南科技職業(yè)學(xué)院生物與化工學(xué)院，海南 ?？?571126）

目的改進(jìn)八正顆粒的含量測(cè)定法，更好地控制藥品質(zhì)量。方法運(yùn)用高效液相色譜法對(duì)八正顆粒中梔子苷、大黃素和大黃酚含量進(jìn)行測(cè)定，擬訂含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，改進(jìn)和完善質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果新修訂的梔子苷、大黃素和大黃酚含量檢測(cè)方法簡(jiǎn)單可行，且靈敏度高。結(jié)論統(tǒng)一了八正顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為規(guī)范市場(chǎng)中八正顆粒的質(zhì)量提供了依據(jù)。

八正顆粒；梔子苷；大黃素；大黃酚；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

八正顆粒是由八正合劑演變而來(lái)的中藥新藥，處方由瞿麥、大黃、梔子、車前子、滑石、甘草、萹蓄、川木通、燈芯草組成。具有清熱，利尿，通淋等功效。用于抗菌消炎、利尿消腫、溶石排石、及下焦?jié)駸岚Y［1］。應(yīng)用廣泛，藥效顯著，為常用藥品。鑒于目前八正顆粒生產(chǎn)廠家多，2010版藥典沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)，且有關(guān)于八正顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制還不夠完善，市場(chǎng)上藥材質(zhì)量亦普遍下降，以及技術(shù)層面的局限性，無(wú)法做到更好的控制八正顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［2］。本文探索八正顆粒質(zhì)量控制新標(biāo)準(zhǔn)，力求改變目前八正顆粒的標(biāo)準(zhǔn)參差不齊的現(xiàn)狀，建立一個(gè)簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，從而更好的控制市場(chǎng)上八正顆粒的質(zhì)量，使藥用更安全，療效更顯著［3］。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 高效液相色譜儀（Waters2695 Agillent1100），色譜柱（菲羅門 C18，5μm，4.6mm×250mm），色譜柱（迪馬C18，5μm，4.6mm×250mm），十萬(wàn)分之一電子分析天平（梅特勒－托利多），萬(wàn)分之一電子分析天平（梅特勒－托利多）。

梔子苷對(duì)照品：中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)：110749-200714），大黃素、大黃酚對(duì)照品：中國(guó)藥品生物制品檢定所（大黃素批號(hào)：110756-200110、大黃酚批號(hào)：110796-201017），八正顆粒分別購(gòu)于湖南方盛制藥有限公司（規(guī)格：8g×12袋，批號(hào)：100101、100102、100103），陜西康惠制藥有限公司（規(guī)格：8g×12袋，批號(hào)：100601）；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 梔子苷的含量測(cè)定：梔子苷為藥典標(biāo)準(zhǔn)收載中藥材梔子的含量測(cè)定的指標(biāo)，本文以梔子苷為指標(biāo)成分對(duì)八正顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了如下方法的修訂。

①溶液制備 對(duì)照品溶液的制備：取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液即得。供試品溶液的制備：取八正顆粒適量，研細(xì)，精密稱取3 g，用50%乙醇溶解并定容至25mL的容量瓶中，0.45 uL微孔濾膜濾過(guò)，即得。陰性溶液制備：取卻梔子的處方量下各藥材按照處方提取，并按供試品處理方法處理，即得。

②色譜條件選擇 流動(dòng)相統(tǒng)為乙腈－水（12∶88），檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm［4］，對(duì)照品、供試品、陰性溶液分別進(jìn)樣檢測(cè)。

③線性關(guān)系考察 精密稱取梔子苷對(duì)照品0.010 89 g，置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液2mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再精密量取上述溶液5mL，置0mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，逐級(jí)稀釋，分別配制成濃度為 0.027 225、0.054 45、0.544 5、0.217 8、0.435 6mg／mL的溶液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定結(jié)果。

④精密度試驗(yàn) 以梔子苷對(duì)照品溶液（0.010 89mg／mL）連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10μL，測(cè)定峰面積。

⑤穩(wěn)定性試驗(yàn) 按2.1.2項(xiàng)下制備供試品溶液，精密進(jìn)樣10μL，測(cè)定梔子苷峰面積，在0、2、4、8、12小時(shí)測(cè)定一次。

⑥重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品（湖南方盛制藥有限公司，批號(hào)100101），按溶液制備方法制備6份供試品溶液，測(cè)定其梔子苷含量。

⑦加樣回收率考察 分別精密量取梔子苷對(duì)照品甲醇溶液（濃度為2.284 6mg／mL）2.0 mL置6個(gè)具塞錐形瓶中，揮干溶劑，再精密量取已測(cè)定含量的樣品（同重復(fù)性試驗(yàn)樣品，其中梔子苷含量為6.54mg／粒）6份，分別加入上述具塞錐形瓶中，按溶液制備方法制備，測(cè)定梔子苷含量，計(jì)算加樣回收率。

⑧方法耐用性考察 采用不同牌號(hào)儀器，不同牌號(hào)、規(guī)格的色譜柱，按溶液制備方法制備，分別測(cè)定樣品中梔子苷含量。

⑨供試品含量測(cè)定與含量限度的制定 按色譜條件選擇制備供試品溶液，并進(jìn)樣測(cè)定八正顆粒樣品中梔子苷含量。

1.2.2 大黃的含量測(cè)定：大黃為八正顆粒質(zhì)量控制指標(biāo)之一，現(xiàn)對(duì)其進(jìn)行了如下的修訂。

①供試品溶液制備 對(duì)照品溶液的制備：取大黃酚對(duì)照品和大黃素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含大黃酚12 ug、大黃素5 ug的混合溶液，即得。供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇－鹽酸（10∶1）的混合溶液25 m L，稱定重量，置80℃水浴中加熱回流30min，放冷，再稱定重量用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2mL，置5mL量瓶中，加2%氫氧化鈉溶液1mL，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

②適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 流動(dòng)相為乙腈－甲醇－0.1%磷酸溶液（42∶23∶35）；檢測(cè)波長(zhǎng)為 254 nm［5-6］，分別吸取對(duì)照品、供試品、陰性溶液進(jìn)樣檢測(cè)。

③線性關(guān)系考察 精密稱取大黃素對(duì)照品0.010 68 g，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，逐級(jí)稀釋，分別配制成濃度為 0.002 67、0.005 34、0.010 68、0.021 36、0.042 72 mg／mL的溶液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，大黃素峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密稱取大黃酚對(duì)照品0.016 76 g（含量按99.6%計(jì)算），置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，逐級(jí)稀釋，分別配制成濃度為0.004 17、0.008 35、0.016 69、0.033 39、0.066 77mg／mL的溶液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定。

④精密度實(shí)驗(yàn) 以大黃素、大黃酚混合對(duì)照品溶液（0.010 68mg／mL、0.016 69mg／mL）連續(xù)進(jìn)樣 5次，每次 20μL，測(cè)定峰面積。

⑤穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 按供試品溶液制備方法配制供試品溶液，精密進(jìn)樣10μL，測(cè)定大黃素、大黃酚峰面積，在0、2、4、8 h測(cè)定1次。

⑥重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品（湖南方盛制藥有限公司，批號(hào)100101），按供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液，分別測(cè)定其總大黃素和總大黃酚總量以及游離大黃素和游離大黃酚的總量。

⑦加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密量取大黃素、大黃酚對(duì)照品甲醇溶液（濃度為0.106 8mg／mL、0.1669mg／mL）各1.5mL置6個(gè)具塞錐形瓶中，揮干溶劑，再精密量取已測(cè)定含量的樣品（同重復(fù)性試驗(yàn)樣品，其中大黃素、大黃酚含量為0.097 5mg／g、0.15mg／g）6份，分別加入上述具塞錐形瓶中，按供試品溶液制備方法操作，測(cè)定大黃素、大黃酚含量，計(jì)算加樣回收率。

分別精密量取大黃素、大黃酚對(duì)照品甲醇溶液（濃度為0.106 8mg／mL、0.166 9mg／mL）1.0mL和0.5mL置6個(gè)具塞錐形瓶中，揮干溶劑，再精密量取已測(cè)定含量的樣品（同重復(fù)性試驗(yàn)樣品，其中大黃素、大黃酚含量為 0.060 mg／g、0.045 mg／g）6份，分別加入上述具塞錐形瓶中，按供試品溶液制備供試品制備方法制備，測(cè)定大黃素、大黃酚含量，計(jì)算加樣回收率。

⑧方法耐用性實(shí)驗(yàn) 采用不同牌號(hào)儀器，不同牌號(hào)、規(guī)格的色譜柱，按適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)方法，分別測(cè)定樣品中梔子苷含量。

⑨供試品含量測(cè)定與含量限度的制定 按供試品溶液制備方法制備供試品，適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣測(cè)定八正顆粒樣品中總大黃素和總大黃酚總量以及游離大黃素和游離大黃酚總量。

2 結(jié)果

2.1 梔子苷含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件選擇：按照梔子苷檢測(cè)方法進(jìn)樣得八正顆粒中梔子苷色譜峰分離度均良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.1.2 線性關(guān)系考察：以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，梔子苷峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖2），并按最小二乘法計(jì)算直線回歸方程，得Y＝2044X－1.269（r＝0.999 5）。結(jié)果表明，梔子苷進(jìn)樣量在0.272 25μg～4.356 0μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖2 梔子苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 The standard curve of gardenin

2.1.3 精密度試驗(yàn)：以梔子苷對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次峰面積見(jiàn)表1，試驗(yàn)結(jié)果表明，儀器精密度良好。

表1 梔子苷精密度試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Precision result of gardenin

2.1.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：梔子苷在0、2、4、8、12 h峰面積檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2，試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液穩(wěn)定性良好。

表2 梔子苷穩(wěn)定性考察結(jié)果Tab.2 Stability investigation result of gardenin

2.1.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：6份供試品溶液梔子苷含量見(jiàn)表3，6次重復(fù)測(cè)定結(jié)果RSD為1.1%，表明該方法重復(fù)性較好。

表3 梔子苷重復(fù)性考察結(jié)果Tab.3 Repeatability result of gardenin

2.1.6 加樣回收率考察：梔子苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法回收率良好。

表4 梔子苷加樣回收率考察結(jié)果Tab.4 Recovery result of gardenin of gardenin

2.1.7 方法耐用性考察：不同牌號(hào)儀器，不同牌號(hào)、規(guī)格的色譜柱，測(cè)定樣品中梔子苷含量結(jié)果見(jiàn)表5，試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法耐用性良好。

表5 梔子苷方法耐用性考察結(jié)果Tab.5 Durability Results of gardenin

2.1.8 供試品含量測(cè)定與含量限度的制定：八正顆粒樣品中梔子苷含量試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 八正顆粒樣品中梔子苷含量測(cè)定結(jié)果Tab.6 Determination Results of gardenin in eight-positive particles

根據(jù)原標(biāo)準(zhǔn)含量限度，測(cè)定結(jié)果，結(jié)合藥典對(duì)梔子藥材中梔子苷限度（1.8%）的規(guī)定，以及生產(chǎn)的實(shí)際情況及原料藥材含量的波動(dòng)，暫訂：本品每袋（8 g／袋）含梔子以梔子苷 （C17H24O10）計(jì)，不得少于16.0mg。

2.2 大黃的含量測(cè)定

2.2.1 適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)：八正各劑型樣品中大黃素、大黃酚色譜峰分離度均良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，八正顆粒HPLC圖譜見(jiàn)圖3。

圖3 八正顆粒各劑型樣品HPLC圖Fig.3 HPLC diagram of eight-positive particles

2.2.2 線性關(guān)系考察：以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，分別以大黃素、大黃酚峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖4、圖5），并按最小二乘法計(jì)算直線回歸方程，得大黃素回歸方程為Y＝142 5.7X＋2.152 1（r＝0.999 8），大黃酚回歸方程為 Y＝156 7.3X－8 566.2（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，大黃素進(jìn)樣量在0.026 7μg～0.427 2 μg范圍內(nèi)，大黃酚進(jìn)樣量在0.041 7～0.667 7μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖4 大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Standard curve of emodin

圖5 大黃酚標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard curve of chrysophanol

2.2.3 精密度實(shí)驗(yàn)：精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7，結(jié)果表明，儀器精密度良好。

表7 大黃素和大黃酚精密度試驗(yàn)結(jié)果Tab.7 Precision results of emodin and chrysophanol

2.2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表8，表明供試品溶 液穩(wěn)定性良好。

表8 大黃素和大黃酚供試品溶液的穩(wěn)定性考察結(jié)果Tab.8 Stability investigation Results of emodin and chrysophanol

2.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表9，6次重復(fù)測(cè)定結(jié)果的RSD分別為0.80%、0.50%，表明該方法重復(fù)性較好。

表9 大黃素和大黃酚重復(fù)性考察結(jié)果Tab.9 Repeatability Results of emodin and chrysophanol

2.2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：大黃素、大黃酚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果分別見(jiàn)表10、表11。試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法回收率良好。

表10 大黃素加樣回收率考察結(jié)果Tab.10 Recovery result of emodin

表11 大黃酚加樣回收率考察結(jié)果Tab.11 Recovery result of chrysophanol

2.2.7 方法耐用性實(shí)驗(yàn)：不同牌號(hào)儀器，不同牌號(hào)、規(guī)格的色譜柱測(cè)定樣品中梔子苷含量結(jié)果見(jiàn)表12。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法耐用性良好。

表12 大黃素和大黃酚方法耐用性考察結(jié)果Tab.12 Durability Results of emodin and chrysophanol

2.2.8 供試品含量測(cè)定與含量限度的制定：試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表13。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，結(jié)合藥典對(duì)大黃藥材中大黃酚和大黃素限度的規(guī)定，以及生產(chǎn)的實(shí)際情況及原料藥材含量的波動(dòng)，暫訂：本品每粒含大黃以總大黃酚（C15H10O4）和總大黃素（C15H10O5）的總量計(jì)，不得少于1.5mg；以游離大黃酚（C15H10O4）和游離大黃素（C15H10O5）的總量計(jì)，不得少于0.55mg。

表13 八正顆粒樣品中大黃素和大黃酚含量測(cè)定結(jié)果Tab.13 Determination results of emodin and chrysophanol in eight-positive particles

3 討論

八正顆粒原標(biāo)準(zhǔn)為：①國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBZ10372005；②國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBZ00992005；③國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ08992006；④國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ02662006；⑤國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ09332006等五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)之間在指標(biāo)性成分含量檢測(cè)方法上均存在差異。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，八正其他劑型均以梔子苷、大黃素、大黃酚為質(zhì)量控制指標(biāo)［7-13］，綜合全方各味藥比例及其有效成分的提取和含量情況，本實(shí)驗(yàn)修訂了梔子苷HPLC含量測(cè)定方法，擬定了含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)；新增訂了大黃素、大黃酚的HPLC含量測(cè)定方法并建立了新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定從方法學(xué)上進(jìn)行了明顯的提高。

［1］ 中國(guó)藥典一部（S）.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］ 苗明三，李振國(guó).現(xiàn)代中藥質(zhì)量控制技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，36-38.

［3］ 中國(guó)藥品生物制品鑒定所等.現(xiàn)代實(shí)用本草學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，123-124.

［3］ 鄭虎占.中藥現(xiàn)代化研究與應(yīng)用［M］.北京：學(xué)苑出版社，76-77.

［4］ 韓晉，蔡光明.反相高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方茵陳注射液中氯原酸和梔子甙的含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2012（3）：9-10.

［5］ 高宇明，曾銳.高效液相色譜法測(cè)定胃欣舒膠囊中大黃酸、大黃素和大黃酚的含量［J］.中南藥學(xué)，2009，7（4）：275-276.

［6］ 劉桂艷，王曄，馬雙成，等.木通屬植物木通化學(xué)成分及藥理活性研究概況［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2014（5）：1223-1225.

［7］ 陳長(zhǎng)水，桑旭峰.HPLC法測(cè)定八正合劑中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃酚［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（5）：1088-1089.

［8］ 陳金文，曹林林.HPLC法測(cè)定八正合劑中梔子苷的含量［J］.陜西中醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，26（4）：61-62.

［9］ 孟婷，郭建麗.HPLC法測(cè)定八正片中梔子苷的含量［J］.陜西中醫(yī)，2012，33（7）：893-894.

［10］ 冉長(zhǎng)清，陳萬(wàn)群.八正合劑的主要藥效學(xué)研究［J］.中成藥，2014，22（8）：565-567.

［11］ 陳紅英，蔣平.八正合劑中桅子昔的含量測(cè)定［J］.中國(guó)藥師，2006，9（1）：17-18.

［12］ 金燦，姜寧華.八正顆粒的制備及臨床應(yīng)用［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，21（11）：693-694.

［13］ 黃順旺.八正顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的初步研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（11）：20-22.

（編校：李璐璐）

Investigate the improvement of quality standard on eight-positive particles

SHENGWang-peng

（College of Biological and Chemical，Hainan College of Science and Technology，Haikou 571126，China）

ObjectiveTo improve the content determination of eight-positive particles，and better control drug quality.MethodsGardenin，emodin and chrysophanol of eight-positive particles were determined by HPLC.Revised content determination standards and improved the standards of quality control.ResultsThe revised content determinations of gardenin， emodin and chrysophanol were simple and feasible， and had high sensitivity.ConclusionUnification the quality standards of eight positive granules，the standards provide the basis for standardizing themarket of eightpositive particles.

eight-positive particles；gardenin；emodin；chrysophanol；quality standards

R283.6

A

1005－1678（2014）04－0164－05

海南省自然科學(xué)基金（812186）

盛望鵬，男，博士，講師，研究方向：中藥學(xué)，E-mail：758691571＠qq.com。