車力凡,邵素芳,劉瑤
(濰坊市益都中心醫(yī)院 婦產(chǎn)科,山東 濰坊 262500)
人血白蛋白聯(lián)合小劑量肝素治療重度子癇前期的臨床療效及其對(duì)胎盤(pán)組織中Endoglin、VEGF、Flt-1表達(dá)的影響
車力凡,邵素芳,劉瑤
(濰坊市益都中心醫(yī)院 婦產(chǎn)科,山東 濰坊 262500)
目的研究人血白蛋白聯(lián)合小劑量肝素治療重度子癇前期的臨床療效及其對(duì)胎盤(pán)組織Endoglin,血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受體蛋白(Flt-1)表達(dá)的影響。方法選取2012年10月~2014年1月在濰坊市益都中心醫(yī)院產(chǎn)科收治的重度子癇前期患者60例,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組,每組各30例。對(duì)照組予降壓、擴(kuò)容、利尿等常規(guī)治療;實(shí)驗(yàn)組在治療組的基礎(chǔ)上,每日予肝素25mg靜脈滴注,5%人血白蛋白10 g靜脈滴注,每天1次,連續(xù)治療7 d。另選取本院同期住院行剖宮產(chǎn)分娩的正常足月妊娠孕婦30例作為空白組。療程結(jié)束后,對(duì)比治療前后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組患者的平均動(dòng)脈壓(Kpa)及24 h尿蛋白定量,觀察臨床療效;鏡下觀察治療后空白組、對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組胎盤(pán)組織中Endoglin、VEGF、Flt-1的表達(dá)情況,比較Endoglin、VEGF、Flt-1在子癇前期患者體內(nèi)的陽(yáng)性表達(dá)率。結(jié)果治療后2組平均動(dòng)脈壓、尿蛋白均有所改善,與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組患者平均動(dòng)脈壓、尿蛋白改善更明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后鏡下觀察 空白組、對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組中,Endoglin、VEGF與Flt-1的表達(dá)部位大致相同;與空白組比較,對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組胎盤(pán)組織中Endoglin、VEGF蛋白、Flt-1的陽(yáng)性表達(dá)率較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組中Endoglin、VEGF蛋白、Flt-1的陽(yáng)性表達(dá)率更高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論人血白蛋白聯(lián)合小劑量肝素治療重度子癇前能有效改善患者Kpa、24 h尿蛋白定量,降低胎盤(pán)組織中Endoglin VEGF和Flt-1蛋白表達(dá)。
子癇前期;Endoglin;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體;
子癇前期(pre-eclampsia)屬于妊娠高血壓疾病的疾病譜,其主要臨床表現(xiàn)為在妊娠20周以后,逐漸出現(xiàn)血壓升高、尿中出現(xiàn)蛋白、水腫,甚者會(huì)出現(xiàn)抽搐、昏迷,常伴發(fā)較高的圍產(chǎn)兒病死率。多數(shù)孕婦在生產(chǎn)后上述癥狀逐漸消失,僅有少數(shù)患者轉(zhuǎn)變成高血壓病,本病也成為臨床高血壓的一個(gè)重要因素[1]。本病對(duì)妊娠女性及胎兒有嚴(yán)重危害,是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦死亡及新生兒死亡的一個(gè)主要原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年約有5~7.5萬(wàn)孕婦死于本病,本病在我國(guó)的發(fā)病率高達(dá)9.4%[2]。子癇前期的病因復(fù)雜,病理機(jī)制未明確,大多數(shù)學(xué)者認(rèn)同的關(guān)于本病的病理機(jī)制有以下3個(gè):胎盤(pán)著床過(guò)淺、母體滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)不足以及胎盤(pán)的血管重塑發(fā)生障礙,最終導(dǎo)致胎盤(pán)灌注缺失。其中Endoglin、VEGF及Flt-1是已經(jīng)驗(yàn)證的與血管形成和滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)密切聯(lián)系的細(xì)胞因子[3]。因此,筆者通過(guò)觀察人血白蛋白聯(lián)合小劑量肝素治療重度子癇前期臨床療效,并對(duì)Endoglin、VEGF及Flt-1在子癇前期患者胎盤(pán)組織中的變化進(jìn)行了分析,旨在探索Endoglin、VEGF及Flt-1與子癇前期發(fā)病的關(guān)系。
1.1 一般資料 選取2012年10月~2014年1月在濰坊市益都中心醫(yī)院產(chǎn)科收治的60例重度子癇前期患者,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組,每組各30例。并選取本院同期住院行剖宮產(chǎn)分娩的正常足月妊娠孕婦30例作為空白組。實(shí)驗(yàn)組患者平均年齡(30.23±5.38)歲,平均孕周(35.34±3.25)周,平均體質(zhì)量(68.1±8.25)kg;對(duì)照組患者平均年齡(29.54±4.74)歲,平均孕周(33.95±4.02)周,平均體質(zhì)量(70.0±8.39)kg;空白組孕婦平均年齡(28.25±3.23)歲,平均孕周(38.22±2.38)周,平均體質(zhì)量(67.0±9.73)kg。所有入組孕婦均為單胎初產(chǎn),分娩方式均為破宮產(chǎn),在手術(shù)之前未進(jìn)入產(chǎn)程。3組孕婦在年齡、平均孕周、體質(zhì)量等方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有患者均自愿參與本實(shí)驗(yàn),并簽署知情同意書(shū),由當(dāng)?shù)貍惱韰f(xié)會(huì)全程跟蹤。
1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 符合子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第七版《婦產(chǎn)科學(xué)》[4]:重度子癇前期:在實(shí)驗(yàn)子癇前期的診斷基礎(chǔ)上,若患者出現(xiàn)下述任一則診斷為重度子癇前期:①血壓持續(xù)升高:SBP≥160mmHg和(或)DBP≥110mmHg;②24小時(shí)尿蛋白定量≥2.0 g或隨機(jī)蛋白尿陽(yáng)性(++);③新發(fā)血清肌酐≥1.2mg/dL;④血小板計(jì)數(shù)<100×109/L;⑤微血管病性溶血;⑥肝功異常;⑦持續(xù)頭痛或視覺(jué)異常;⑧持續(xù)性腹痛。
1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 原發(fā)性高血壓;急、慢性傳染病史;慢性腎炎、糖尿病等病史;心、肺、肝、腎功能異常者;癲癇、腦炎、腦腫瘤、腦血管畸形等病史。
1.4 治療方法 對(duì)照組給予常規(guī)治療:5%葡萄糖注射液500mL+25%硫酸鎂60mL,1次靜脈滴注,持續(xù)靜滴6~8 h,必要時(shí)予口服降壓、擴(kuò)容、利尿等治療;實(shí)驗(yàn)組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用肝素、人血白蛋白聯(lián)合治療,5%葡萄糖注射液500 mL+25%硫酸鎂60mL+肝素25 mg,每天1次靜脈滴注,持續(xù)靜滴6~8 h,5%葡萄糖注射液100mL+5%人血白蛋白10 g,每天1次靜脈滴注,其余治療方法同實(shí)驗(yàn)組。治療期為7 d(1個(gè)療程)。
1.5 實(shí)驗(yàn)方法
1.5.1 胎盤(pán)標(biāo)本采集:胎兒產(chǎn)出后,立即于胎盤(pán)上臍帶母體測(cè)切取全層胎盤(pán)組織,體積約為(1.0×1.0×1.0)cm3,10%福爾馬林溶液中固定,石蠟包埋。
1.5.2 免疫組化檢測(cè):采用 SP法觀察3組胎盤(pán)組織Endoglin、VEGF和Flt-1蛋白的表達(dá)。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野,測(cè)定胎盤(pán)內(nèi)總灰度值切面面積,采用陽(yáng)性反應(yīng)平均灰度值代表3種蛋白的相對(duì)表達(dá)量。Endoglin、VEGF、Flt-1表達(dá)陽(yáng)性均為棕黃色顆粒。參照 Hao綜合記分法[5]來(lái)觀察 Endoglin、VEGF和Flt-1陽(yáng)性率。根據(jù)染色程度,不顯色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,深黃色為3分;根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比,其中0分(<5%),1分(5% -35%),2分(36% ~65%),3分(>65%)。實(shí)驗(yàn)圖像采集分析系統(tǒng)采用上海山富科學(xué)儀器有限公司提供Biosens系統(tǒng);光學(xué)顯微鏡選取日本Olympus雙目顯微鏡BH-2型。
1.5.3 臨床療效指標(biāo)檢測(cè):測(cè)定治療前后2組患者Kpa和24 h尿蛋白定量情況。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理,正態(tài)計(jì)量資料用“±s”表示,兩均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn)。
2.1 2組重度子癇前期患者臨床療效比較 與治療前相比,2組患者治療后Kpa和24 h尿蛋白定量均明顯降低(P<0.05),且治療后實(shí)驗(yàn)組Kpa、24 h尿蛋白定量顯著低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表1)。
表1 2組重度子癇前期患者臨床療效比較Tab.1 Comparision of clinical efficacy in severe preeclampsia patients
2.2 3組患者胎盤(pán)組織中Endoglin、VEGF和Flt-1蛋白表達(dá)比較 空白組胎盤(pán)組織中Endoglin主要表達(dá)位置在滋養(yǎng)細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上;VEGF主要表達(dá)位置在血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)以及自相細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)中;Flt-1主要表達(dá)位置在絨毛毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜、滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜、間質(zhì)細(xì)胞瘤的細(xì)胞膜以及散在胞質(zhì)中。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組Endoglin、VEGF和Flt-1在胎盤(pán)組織中的表達(dá)部位與正常組相同(見(jiàn)表 1)。
2.3 治療后3組胎盤(pán)組織中Endoglin的陽(yáng)性表達(dá)率 空白組、實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組胎盤(pán)組織中Endoglin的陽(yáng)性表達(dá)率分別為33.33%,40.00%和66.67%。其中實(shí)驗(yàn)組與空白組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表2)。
表2 3組胎盤(pán)組織中Endoglin表達(dá)情況比較Tab.2 Comparision of endoglin expression in placenta
圖1 3組胎盤(pán)組織Endoglin、Flt-1、VEGF蛋白表達(dá)情況Fig.1 Expression of placenta Endoglin,F(xiàn)lt-1,VEGF protein in three groups
2.4 治療后胎盤(pán)組織中VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率 空白組、實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組胎盤(pán)組織中VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100.00%、73.33%和53.33%,其中實(shí)驗(yàn)組與空白組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表3)。
表3 各組間VEGF在胎盤(pán)組織中的表達(dá)情況Tab.3 VEGF expression in placenta in each group
2.5 治療后胎盤(pán)組織中Flt-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率 空白組、實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組胎盤(pán)組織中Flt-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為53.33%、73.33%和86.67%,其中實(shí)驗(yàn)組與空白組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表4)。*P<0.05,與空白組相比,compared with blank group;ΔP<0.05,與對(duì)照組相比,compared with control group
表4 各組間Flt-1在胎盤(pán)組織中的表達(dá)情況Tab.4 Flt-4 in each group in the expression of placental tissue
胎盤(pán)與母體之間的關(guān)系只有協(xié)調(diào)發(fā)展,才能完成正常的分娩過(guò)程,一個(gè)很重要的環(huán)節(jié)為絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞能否正常浸入子宮肌層。在妊娠早期,絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入已經(jīng)發(fā)生蛻膜化的子宮內(nèi)膜及肌層,取代血管內(nèi)皮細(xì)胞,形成大直徑低阻力的血管,從而完成正常的血管重鑄[6]。大量研究表明,妊娠期高血壓疾病患者血液高凝狀態(tài)與病情發(fā)展相平行。因此在臨床中如何采用有效的治療子癇前期的治療方案對(duì)母嬰尤為重要。小劑量肝素作為臨床最常用的抗血小板聚集藥物,通過(guò)影響凝血因子生成,增強(qiáng)抗凝血活酶Ⅲ活性,滅活凝血酶、凝血因子,促進(jìn)組織型纖溶酶原tpA的釋放等途徑干擾凝血過(guò)程,緩解血液高凝狀態(tài)。同時(shí),小劑量肝素還可以結(jié)合并滅活血管緊張素和血管活性物質(zhì),抑制血管收縮,改善多臟器血流灌注,增加腎小球?yàn)V過(guò)率,增加尿量,減少水腫。而人血白蛋白具有調(diào)節(jié)循環(huán)血量的作用,5%人血白蛋白溶液的滲透壓相當(dāng)于等體積人血漿滲透壓,當(dāng)患者因血容量不足需要治療時(shí),輸注白蛋白的效果可持續(xù)數(shù)小時(shí),多數(shù)研究者建議人血白蛋白水平應(yīng)維持在約2.5 g/dL,即提供了20mmHg血漿滲透壓。雖然子癇前期的發(fā)病機(jī)理至今尚未闡明,但近年來(lái)多數(shù)研究認(rèn)為滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)淺是子癇前期發(fā)生的重要原因之一,MadazliR等[7]的研究表明滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力下降的程度與子癇前期發(fā)生的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)關(guān)系。且滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)程是多方位因素共同調(diào)節(jié)的,其中最重要的必備條件是血管通透性的顯著增加[8]。Endoglin、VEGF與Flt-1 3者是滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)的細(xì)胞因子中最主要的因素,3者的表達(dá)直接影響正常胎盤(pán)血管網(wǎng)絡(luò)的形成[9]。
本研究旨在觀察人血白蛋白聯(lián)合小劑量肝素治療重度子癇前期臨床療效,結(jié)果顯示與治療前相比,2組患者治療后Kpa均明顯下降,24 h尿蛋白定量均明顯減少,且實(shí)驗(yàn)組Kpa、24 h尿蛋白定量均顯著低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)于重度子癇前期患者,Kpa、24 h尿蛋白定量能直接、客觀的反應(yīng)其病情發(fā)展情況,較常規(guī)治療相比,人血白蛋白聯(lián)合小劑量肝素的療效顯著。實(shí)驗(yàn)表明治療后,3組Endoglin、VEGF和Flt-1蛋白表達(dá)部位大致相同;與空白組比較,對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組胎盤(pán)組織中Endoglin、VEGF蛋白、Flt-1的陽(yáng)性表達(dá)率較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與實(shí)驗(yàn)組比較,對(duì)照組中 Endoglin、VEGF蛋白、Flt-1的陽(yáng)性表達(dá)率較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。因此,Endoglin、VEGF和Flt-1可作為臨床檢測(cè)提早防治重度子癇前期患者發(fā)病情況的敏感指標(biāo)。Endoglin是一種由二硫鍵相連的同源二聚體的膜結(jié)合性糖蛋白[10],它不僅參與血管新生,還與血管收縮和舒張的動(dòng)態(tài)平衡有關(guān)[11]。VEGF是一種具有高度保守性的二聚糖體蛋白,由2個(gè)相同的多肽鏈以二硫鍵交聯(lián)結(jié)合。研究表明,正常孕產(chǎn)婦胎盤(pán)切片組織的VEGF的表達(dá)非常豐富,在蛻膜內(nèi)滋養(yǎng)細(xì)胞與合體滋養(yǎng)細(xì)胞明顯,其機(jī)理主要為刺激滋養(yǎng)細(xì)胞中UPA、MMP9等物質(zhì)的活性,提高滋養(yǎng)細(xì)胞的滲透能力,加強(qiáng)母體胎盤(pán)細(xì)胞的灌注,影響妊娠[12]。Chou MM等[13]的研究表明,VEGF受體在滋養(yǎng)細(xì)胞中含量較高,說(shuō)明VEGF能夠?qū)ψ甜B(yǎng)細(xì)胞的分化、浸潤(rùn)等全程進(jìn)行調(diào)控,輔助蛻膜血管網(wǎng)絡(luò)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。Flt-1為聚酪氨酸激酶受體,是VEGF的高親和性受體之一,存在滋養(yǎng)細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞等位置,對(duì)于血管的再生起到非常重要的作用,同時(shí)對(duì)胎盤(pán)的形成、發(fā)育也起到了重要的作用[14]。Boyle E等[15]的研究表明Flt-1的顯著升高會(huì)阻斷胎盤(pán)分泌的VEGF對(duì)內(nèi)皮組織的營(yíng)養(yǎng)作用,使系統(tǒng)的內(nèi)皮細(xì)胞功能受損,即意味著子癇前期的發(fā)生。
終上所述,人血白蛋白聯(lián)合小劑量肝素治療重度子癇前能有效改善患者Kpa、24 h尿蛋白定量,降低胎盤(pán)組織中Endoglin、VEGF和Flt-1蛋白表達(dá)。
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(編校:吳茜)
Clinical efficacy of human blood album in and small dose heparin in treatment of severe preeclampsia and their effect on Endoglin,VEGF and Flt-1 expression in p lacenta tissues
CHE Li-fan,SHAO Su-fang,LIU Yao
(Department of Obstetrics and Gynecology,Yidu Central Hospital ofWeifang City.Weifang 262500,China)
ObjectiveTo study the clinical efficacy of human blood albumin and small dose heparin in treatment of severe preeclampsia and its effect on the expression of Endoglin,vascular endothelial growth factor(VEGF)and its receptors(Flt)in placental tissue.Methods60 cases of severe preeclampsia collected in weifang yidu central hospital from October 2012 to January 2014 were randomly divided into experimental group and control group,each had 30 cases.Control group were given oral antihypertensive,expansion and diuretic treatment.Experiment group were received injection with 500mL 5%glucose,60mL 25%magnesium sulfate and 25 mg heparin on the basis of control group,one time each day,for successive seven days.Another 30 cases of normal full-term pregnancy for cesarean section delivery collected in our hospital during the same period were as blank group.Mean arterial pressure(Kpa)and 24 h urine protein quantitative and clinicalefficacywere observed and compared between experimentalgroup and control group before and after treatment.curative effect.Microscopically observed treatment after Endoglin in blank group,control group and experimental group placenta tissue,The expression of Endoglin,VEGF and Flt1 in placental tissue among three groups were observed by microscope,and their positive expression rate were compared.ResultsThe mean arterial pressure and urine protein were all improved after treatment in control group,and experimental group,but the latter wasmore obvious than the former(P<0.05).The expression location of Endoglin,VEGF and PLT-1 in three groupswere the same with microscopic observation.Compared with blank group,the positive expression rate of Endoglin,VEGF protein and PLT-1 in placenta of other two groupswere higher(P<0.05),and those in experimental group weremore higher than control group(P<0.05).ConclusionHuman blood albumin and small dose heparin can effectively improve the indexes of quantitative Kpa and 24 h urine protein in severe preeclampsia,reduce the expression of Endoglin,VEGF and Flt1 protein in placental tissue.
preeclampsia;endoglin;vascular endothelial growth factor;vascular endothelial growth factor receptor
R71
A
1005-1678(2014)04-0157-04
車力凡,女,碩士,副主任醫(yī)師,研究方向:婦產(chǎn)專業(yè),E-mail:chelifan@126.com。