袁曉春 李輔碧

摘要 [目的] Folin-Ciocalteu法測(cè)定葡萄總酚含量，為昭通葡萄生產(chǎn)及其釀制工藝提供科學(xué)依據(jù)。[方法] 采用甲醇作溶劑，超聲提取葡萄總酚，以Folin-Ciocalteu試劑和50 g/L Na2CO3溶液處理，在765 nm處測(cè)其吸光度。 [結(jié)果] 以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)量濃度在1～40 mg/L范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好（r=0.999 5）。平行測(cè)定（n=6）葡萄總酚含量，RSD在1.1%～1.6%，對(duì)葡萄和葡萄酒的加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果分別為98.8%、98.3%，RSD依次為1.8%、2.0%。 [結(jié)論] 該法操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于測(cè)定葡萄及葡萄酒中總酚含量。

關(guān)鍵詞 昭通葡萄;Folin-Ciocalteu法;測(cè)定;總酚

中圖分類號(hào) S663.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）33-11859-02

Measure of Total Polyphenols Content in Zhaotong Grape and Grape Wine by Folin-Ciocalteu Method

YUAN Xiao-chun1， LI Fu-bi2 （1. Zhaotong University， Zhaotong，Yunnan 657000; 2. Food and Drug Inspection Office in Zhaotong City， Zhaotong， Yunnan 657000）

Abstract [Objective] In order to provide scientific basis for production and brewing of Vitis vinifera in Zhaotong， the total polyphenol content in grapes was measured by Folin-Ciocalteu method. [Method] Using methyl alcohol as the solvent， total polyphenols of Vitis vinifera was extracted by supersonic method， then added Folin-Ciocalteu reagent and 50 g/L Na2CO3 solution， and measured the absorbancy at 765 nm. [Result] Basing on gallic acid， the mass concentration had an obvious linear relation （r=0.999 5） with absorbancy within the scope of 1-40 mg/L. The parallel determination （n=6） of total polyphenol results were that， when RSD was between 1.1% to 1.6%， the adding standard recovery of Vitis vinifera and grapes wine were 98.8%， 98.3%， RSD 1.8%， 2.0%. [Conclusion] This method is convenient， repeatable and faithful， which can be used for determination of polyphenol in grapes and grape wine.

Key words Zhaotong grape; Folin-Ciocalteu assay; Determination; Total polyphenol

作者簡(jiǎn)介 袁曉春（1968- ），女，云南威信人，講師，從事物質(zhì)成分分析及其應(yīng)用的研究。

收稿日期 2014-10-17

植物多酚（Plant polyphenol）又名植物單寧（Vegetable tannin），為植物體內(nèi)的復(fù)雜酚類次生代謝物，具有多元酚結(jié)構(gòu)，主要存在于植物的皮、根、葉、果中。植物多酚具有很強(qiáng)的抗氧化和清除自由基活性，水果、蔬菜、飲料等是植物多酚的主要來(lái)源[1]。因?yàn)楣麑?shí)汁多味美并含有豐富營(yíng)養(yǎng)，而倍受人們青睞的葡萄[2]中就含有大量的多酚類物質(zhì)。葡萄多酚是一種植物多酚類活性物質(zhì)，能溶于水，易溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑，它廣泛存在于葡萄籽、葡萄皮與果汁中。葡萄多酚由表兒茶酸等酚酸類、黃烷醇類、花色苷類、黃酮醇類和縮聚單寧等物質(zhì)組成[3]。研究表明，葡萄中的多酚含量對(duì)葡萄酒的釀制影響很大。葡萄酒存放時(shí)多酚的各種化學(xué)反應(yīng)將影響到葡萄酒的色澤、口感、品質(zhì)。在葡萄酒釀制和葡萄多酚提取中，都要對(duì)多酚含量進(jìn)行監(jiān)控和測(cè)定。采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定葡萄多酚具有很好的精密度和準(zhǔn)確度[4]。

葡萄和葡萄酒中所含多酚可以消除人體內(nèi)的自由基而起到抗氧化、抗腫瘤、抗癌、降血脂、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病等保健作用，因而深受人們喜愛(ài)。生活在云南昭通的人們除了喜歡食用新鮮葡萄，好多家庭還在本土葡萄大量上市的時(shí)候，選擇新鮮葡萄自行釀制葡萄酒[5]。為此，筆者對(duì)昭通葡萄及其家釀葡萄酒進(jìn)行采樣，通過(guò)超聲提取技術(shù)，采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定其葡萄總酚量，以期為昭通葡萄的生產(chǎn)及其葡萄酒的釀制工藝提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原材料。從市場(chǎng)購(gòu)進(jìn)昭通本土出產(chǎn)的不同品種的新鮮葡萄，在不同家庭采集以昭通葡萄為原料的家釀葡萄酒。

1.1.2 主要試劑。

Folin-Ciocalteu試劑，上海荔達(dá)生物科技有限公司（分析純 20140806）;無(wú)水碳酸鈉，分析純，天津化學(xué)試劑三廠;甲醇，色譜純Fisher Scientific公司;沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，中國(guó)食品藥品檢定研究院，110831-201204;水，超純水。

1.1.3 主要儀器。GZX-9246MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備;MS105DU電子天平，梅特勒-托利多公司; UC-7100S超聲波清洗器，美瑞泰克科技（天津）有限公司;TG16-WS臺(tái)式高速離心機(jī)，長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司; UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津公司。

1.2 方法

1.2.1 試劑的配制。

50.0 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取5.0 mg沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶解于8.0 ml的甲醇中，并用超純水定容至100 ml（現(xiàn)配）。50 g/L Na2CO3溶液：稱取50.00 g無(wú)水Na2CO3，溶于超純水并定容至1 000 ml。80%甲醇溶液：量取80 ml 甲醇，加12 mol/L的鹽酸0.1 ml ，并用超純水稀釋定容至100 ml[6]。

1.2.2 試樣的準(zhǔn)備。將2種新鮮葡萄的葡萄皮1號(hào)、2號(hào)，于40 ℃下烘80 min后冷卻備用。采集3個(gè)家庭以昭通葡萄為原料的家釀葡萄酒3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)（釀制年份、保存條件不詳）。

1.2.3 顯色時(shí)間的確定。準(zhǔn)確吸取50.0 mg/L沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50 ml于25 ml比色管中，加入80%甲醇溶液0.50 ml、1.00 ml Folin-Ciocalteu試劑、50 g/L Na2CO3溶液8.00 ml，充分搖勻，在15、30、45、60 min處測(cè)其吸光度，在15～45 min的吸光度逐漸增大，45 min后吸光度有所降低。以此確定測(cè)定反應(yīng)的顯色時(shí)間為45 min。

1.2.4 總酚的提取。準(zhǔn)確稱取0.050 g已烘干的葡萄皮，置于5.0 ml 80% 甲醇溶液中，在40 ℃、40 kHz超聲提取40 min后，在4 000 r/min下離心20 min后分離出上層清液，同等條件下提取2次，合并提取液，用超純水稀釋并定容至100 ml。

對(duì)于家釀葡萄酒，直接吸取1.0 ml于100 ml容量瓶中，加8.0 ml 甲醇并用超純水定容。

2 結(jié)果與分析

2.1 工作曲線的繪制

準(zhǔn)確吸取50.0 mg/L沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80 ml分別于7支25 ml比色管中，依次加入80%甲醇溶液1.00、0.90、0.80、0.70、0.60、0.40、0.20 ml。測(cè)樣品時(shí)，吸取試液1.00 ml。然后加入1.00 ml Folin-Ciocalteu試劑，充分振蕩后，依次加入50 g/L Na2CO3溶液溶液8.00 ml，充分搖勻，45 min后，于25 ℃下，在765 nm處測(cè)其吸光度，以吸光度對(duì)沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度作圖，酚含量在1～40 mg/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，線性計(jì)算公式y(tǒng)=0.015 9x-0.002 5，r=0.999 5。

2.2 總酚量測(cè)定結(jié)果

按照“2.1”分析步驟，對(duì)葡萄皮試液1號(hào)、2號(hào)和家釀葡萄酒3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)試液各進(jìn)行6次平行測(cè)定，葡萄皮總酚含量計(jì)算公式：葡萄皮總酚含量（mg/g）=xVn/ms，其中x=（y+0.002 5）/0.015 9（mg/L），V=0.001 L，n=100（稀釋倍數(shù)），ms為葡萄皮試樣的質(zhì)量;葡萄酒總酚含量計(jì)算公式：葡萄酒總酚含量（mg/L）=nx，x=（y+0.002 5）/0.015 9（mg/L），n=100（稀釋倍數(shù)）[7]。葡萄皮和家釀葡萄酒總酚含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

由表1、2可見(jiàn)，平行測(cè)定樣品總酚含量的RSD在1.1%～1.6%，說(shuō)明該方法具有較好的精密度。

表1 葡萄皮總酚量測(cè)定結(jié)果

表2 家釀葡萄酒總酚量測(cè)定結(jié)果

2.3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

利用“2.2”節(jié)的分析結(jié)果，分別按1號(hào)葡萄皮試液總酚含量的63.3%、94.9%、126.6%和3號(hào)家釀葡萄酒試液總酚含量的65.8%、98.7%、131.6%，添加50.0 mg/L沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，各平行試驗(yàn)3次，測(cè)定其總酚含量，并計(jì)算回收率。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，可見(jiàn)該方法具有較好的回收效果。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

以Folin-Ciocalteu 法測(cè)定昭通葡萄及其家釀葡萄酒的總酚含量。選用50.0 mg/L沒(méi)食子酸溶液為標(biāo)準(zhǔn)，其質(zhì)量濃度在1～40 mg/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系（y=0.015 9x-0.002 5，r=0.999 5）。準(zhǔn)確稱取40 ℃下烘干葡萄皮0.050 g，采用80%甲醇溶液作為溶劑，在40 ℃、40 kHz超聲提取昭通葡萄皮總酚。移取1.00 ml試液，以1.00 ml Folin-Ciocalteu試劑和8.00 ml 50 g/L Na2CO3溶液處理，顯色45 min后，在765 nm處測(cè)定葡萄皮和家釀葡萄酒試液的吸光度。平行測(cè)定（n=6）總酚含量RSD在1.1%～1.6%。對(duì)葡萄皮和葡萄酒試液進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)的平均回收率分別為98.8%、98.3%，RSD分別為1.8%、2.0%。該法操作簡(jiǎn)便，具有較好的精密度，重復(fù)性好。

2種品種的市售昭通葡萄總酚含量有一定的差別，可能是因?yàn)橘?gòu)進(jìn)的葡萄品種不一樣，再加上葡萄的種植方式和生長(zhǎng)周期可能也不相同等因素所致。昭通葡萄總酚含量的高低具體受哪些因素影響及其如何影響的問(wèn)題，還待進(jìn)一步研究。3種家庭釀制的葡萄酒總酚含量差別較大，可能是因?yàn)楦鱾€(gè)家庭釀制葡萄酒時(shí)選用了不同品種的昭通葡萄、采用了

不同釀制工藝、在不同環(huán)境下以不同的方式保存葡萄酒和保存家釀葡萄酒的時(shí)間長(zhǎng)短不一等因素所致[8]。

參考文獻(xiàn)

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