龐偉斌，李 琴，趙鎖林，湯淑斌，王紅武（陜西省寶雞市婦幼保健院：．檢驗(yàn)科；．兒科 7000）

肺炎鏈球菌是引起細(xì)菌性肺炎的主要病原菌。在發(fā)展中國(guó)家，每年有500萬(wàn)5歲以下兒童死于肺炎鏈球菌感染引起的肺炎（肺炎鏈球菌肺炎）［1］。早期有效的抗菌藥物治療可明顯降低兒童肺炎鏈球菌肺炎的病死率。目前，實(shí)驗(yàn)室主要以傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)法分離肺炎鏈球菌作為診斷肺炎鏈球菌肺炎的依據(jù)。然而，由于肺炎鏈球菌為苛養(yǎng)菌，培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)條件要求高，生長(zhǎng)所需時(shí)間長(zhǎng)，鑒定程序繁瑣，且檢測(cè)陽(yáng)性率較低，有研究報(bào)道其診斷肺炎鏈球菌肺炎的特異度為55%，靈敏度64%，不能滿足臨床快捷診斷的需要［2］。膠體金法是目前廣泛應(yīng)用于肺炎鏈球菌肺炎快速檢測(cè)的方法，通過(guò)檢測(cè)尿液中肺炎鏈球菌抗原（C多糖抗原）對(duì)肺炎鏈球菌肺炎進(jìn)行診斷，具有較高的靈敏度和特異度。本研究通過(guò)檢測(cè)下呼吸道感染兒童尿標(biāo)本中的肺炎鏈球菌抗原，以評(píng)價(jià)其在疾病臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1．1 一般資料 2012年6～12月本院兒科收治的初診且未接受治療的下呼吸道感染患兒300例，男162例、女138例，年齡0～5歲，平均（2．37±0．58）歲；所有患兒均符合小兒下呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。

1．2 試劑與儀器 血培養(yǎng)瓶和血培養(yǎng)儀采用美國(guó)BD公司產(chǎn)品；美國(guó)BINAX公司膠體金法肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)試劑盒。

1．3 方法

1．3．1 痰標(biāo)本檢測(cè) 留取吸引痰或自咳痰標(biāo)本。留取痰標(biāo)本前，囑患兒反復(fù)以清水漱口，用無(wú)菌痰杯收集患兒痰標(biāo)本，立即送檢；在生物安全柜中將痰標(biāo)本分別接種于血平板、麥康凱平板和巧克力平板，置37℃、5%二氧化碳孵育箱，連續(xù)培養(yǎng)12、24、48h后觀察結(jié)果。

1．3．2 外周血培養(yǎng) 無(wú)菌技術(shù)采集患兒靜脈外周血3～4 mL，注入 BACTEC PEDSPLUS／F培養(yǎng)瓶，置 BACTEC 9120血培養(yǎng)儀中自動(dòng)培養(yǎng)與檢測(cè)，期間避免培養(yǎng)瓶通氣。血培養(yǎng)標(biāo)本在血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)至出現(xiàn)陽(yáng)性報(bào)警，但最長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)7d。所有陽(yáng)性瓶均進(jìn)行涂片鏡檢和傳代培養(yǎng)。如果涂片鏡檢為陰性結(jié)果，提示儀器培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)警為假陽(yáng)性，應(yīng)將相應(yīng)的培養(yǎng)瓶再次放入血培養(yǎng)儀中進(jìn)行培養(yǎng)，直到傳代培養(yǎng)物生長(zhǎng)或再次出現(xiàn)陽(yáng)性報(bào)警。對(duì)于初次報(bào)警為假陽(yáng)性，但出現(xiàn)第2次陽(yáng)性報(bào)警的標(biāo)本，應(yīng)進(jìn)行第2次涂片和傳代培養(yǎng)。對(duì)培養(yǎng)儀培養(yǎng)7 d仍未出現(xiàn)陽(yáng)性報(bào)警的標(biāo)本，進(jìn)行涂片鏡檢和（或）傳代培養(yǎng)，以排除假陰性結(jié)果。

1．3．3 尿標(biāo)本檢測(cè) 采集患兒無(wú)菌中段尿標(biāo)本，收集于無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)容器中，用于肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)。檢測(cè)步驟及結(jié)果判讀嚴(yán)格參照BINAX檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；不同方法學(xué)檢測(cè)結(jié)果一致性分析采用Kappa檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)；P＜0．05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 尿肺炎鏈球菌抗原與血培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果比較 尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)陽(yáng)性率為19．33%（58／300），58例尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)陽(yáng)性患兒中，血培養(yǎng)陽(yáng)性39例，其中5例檢出的病原菌并非肺炎鏈球菌。血培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率為15．67%（47／300）。尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于血培養(yǎng)檢測(cè)（P＜0．05），但兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性較強(qiáng)（K＝0．877，u＝19．38，P＜0．05）。以血培養(yǎng)檢測(cè)作為診斷兒童肺炎鏈球菌肺炎的臨床標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)診斷肺炎鏈球菌肺炎的靈敏度和特異度分別為82．98%（39／47）和92．49%（234／253）。血培養(yǎng)與尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 血培養(yǎng)與尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)結(jié)果（n）

2．2 尿肺炎鏈球菌抗原與痰培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果比較 痰培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率為10．33%（31／300），低于尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)陽(yáng)性率（P＜0．05），但兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性較強(qiáng)（K＝0．767，u＝18．27，P＜0．05）。尿肺炎鏈球菌抗原與痰培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 尿肺炎鏈球菌抗原與痰培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果（n）

2．3 血培養(yǎng)與痰培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果比較 血培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率為15．67%（47／300），痰培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率為10．33%（31／300），血培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于痰培養(yǎng)（P＜0．05），但兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性較強(qiáng)（K＝0．796，u＝17．27，P＜0．05）。血培養(yǎng)與痰培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 血培養(yǎng)與痰培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果（n）

3 討 論

肺炎鏈球菌極易導(dǎo)致感染性疾病，尤其易導(dǎo)致兒童感染，是兒童社區(qū)獲得性肺炎、腦膜炎、鼻竇炎、敗血癥、中耳炎的主要病原菌［3－4］。世界衛(wèi)生組織2010年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，在發(fā)展中國(guó)家，每年有500萬(wàn)5歲以下兒童死于肺炎鏈球菌肺炎，10～50萬(wàn)兒童死于肺炎鏈球菌感染引起的腦膜炎。一項(xiàng)來(lái)自全球11個(gè)國(guó)家的報(bào)告數(shù)據(jù)顯示，2010年2～6月肺炎患兒臨床標(biāo)本中肺炎鏈球菌檢出率僅為0．0%～6．7%［5］。肺炎鏈球菌肺炎的臨床診斷主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢查、臨床癥狀、肺部X線片檢查和病史，而確診則必須依賴于呼吸道標(biāo)本分離出病原菌。肺炎難以實(shí)現(xiàn)病原學(xué)確診，導(dǎo)致其病死率較高，一方面是受到目前診斷技術(shù)的限制，另一方面歸因于實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果報(bào)告延遲，導(dǎo)致病情未得到及時(shí)控制以及長(zhǎng)期過(guò)度使用抗菌藥物導(dǎo)致的耐藥菌增加［6］。因此，建立快速、準(zhǔn)確的兒童肺炎病原菌檢測(cè)方法極為重要。

目前，實(shí)驗(yàn)室多以傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法分離出肺炎鏈球菌作為診斷肺炎鏈球菌肺炎的依據(jù)，如痰培養(yǎng)和血培養(yǎng)。然而，由于肺炎鏈球菌可產(chǎn)生自溶酶，且屬于苛養(yǎng)菌，對(duì)培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)條件要求高，導(dǎo)致分離率不高［7］。全自動(dòng)血液培養(yǎng)儀的應(yīng)用雖然提高了肺炎鏈球菌的檢測(cè)陽(yáng)性率［2］，但分離、培養(yǎng)、鑒定步驟繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)（需要2～3d），不能在最短的時(shí)間內(nèi)為臨床提供診斷依據(jù)［8－10］。本研究采用的膠體金法，主要檢測(cè)尿標(biāo)本中肺炎鏈球菌特有的可溶性C多糖抗原，15min即可發(fā)出報(bào)告，檢測(cè)過(guò)程快速，國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道其診斷肺炎鏈球菌肺炎的靈敏度為86%、特異度為94%，可以彌補(bǔ)血、痰培養(yǎng)的局限性。膠體金法檢測(cè)尿抗原以尿標(biāo)本作為檢測(cè)對(duì)象，在標(biāo)本收集、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)确矫婢哂休^大的優(yōu)勢(shì)，而且檢測(cè)結(jié)果不受接受抗菌藥物治療的影響，不僅能夠快速提供診斷依據(jù)，更在抗菌藥物使用方面具有指導(dǎo)意義，為診斷肺炎鏈球菌肺炎提供了快速、有效的輔助診斷方法。

本研究中，尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)陽(yáng)性率為19．33%，血培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率為15．67%，痰培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率為10．33%，尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)陽(yáng)性率高于痰培養(yǎng)及血培養(yǎng)，血培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率高于痰培養(yǎng)，且尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)診斷肺炎鏈球菌肺炎的靈敏度和特異度分別達(dá)到了82．98%和92．49%，與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道基本相符［11－12］。本研究結(jié)果顯示，相比傳統(tǒng)的肺炎鏈球菌肺炎病原學(xué)診斷方法，尿肺炎鏈球菌檢測(cè)陽(yáng)性率高于傳統(tǒng)方法，且具有較高診斷靈敏度和特異度，檢測(cè)步驟簡(jiǎn)便快捷，是行之有效的肺炎鏈球菌肺炎實(shí)驗(yàn)室診斷方法。上述3種檢測(cè)方法中，痰培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率最低，一方面可能與部分患兒痰標(biāo)本不合格有關(guān)，另一方面可能與肺炎鏈球菌生長(zhǎng)條件較為苛刻有關(guān)。尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)不受標(biāo)本上述兩個(gè)因素的影響，若聯(lián)合血培養(yǎng)檢測(cè)，則可進(jìn)一步提高肺炎鏈球菌的檢測(cè)陽(yáng)性率。

綜上所述，相比傳統(tǒng)的痰、血培養(yǎng)檢測(cè)技術(shù)，尿肺炎鏈球菌抗原檢測(cè)在陽(yáng)性率、診斷靈敏度和特異度方面均表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢(shì)，是可用于診斷肺炎鏈球菌肺炎的快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，值得臨床推廣應(yīng)用。

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