黃振勇 李介華 吳愛(ài)娟 胡慶蘭 岑 歡 周 艷

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第2位。人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一種特異性感染人類(lèi)皮膚和粘膜的雙環(huán)狀DNA病毒，目前該病毒已發(fā)現(xiàn)200多種亞型，其中有50多種特異性感染泌尿生殖道。流行病學(xué)調(diào)查和基礎(chǔ)研究顯示HPV感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical Intraepithelial Neoplasia，CIN)和宮頸癌的主要病因。近年來(lái)，宮頸癌的發(fā)病率呈上升化和年輕化趨勢(shì)，把早期篩查與診斷作為宮頸癌預(yù)防與治療的主要手段已引起醫(yī)學(xué)界及普通民眾的廣泛重視。清遠(yuǎn)地區(qū)位處廣東省西北，經(jīng)濟(jì)與衛(wèi)生條件相對(duì)落后，我們對(duì)本地區(qū)婦女進(jìn)行HPV及細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，分析本地區(qū)婦女人群感染HPV基因亞型的分布情況，以及常見(jiàn)基因亞型與宮頸病變程度的關(guān)系，為宮頸癌防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

2007年6月～2013年12月到清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科門(mén)診及病房就診患者23 983例。年齡19～73歲。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 HPV檢測(cè) 采用凱普生物化學(xué)有限公司生產(chǎn)的人乳頭狀瘤病毒核酸擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑盒進(jìn)行樣品DNA的提取、擴(kuò)增和分型檢測(cè)，本方法一次可以同時(shí)檢測(cè)6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68 和CP8304共21種亞型。標(biāo)本采集均由婦科醫(yī)生采集，用專(zhuān)用的宮頸刷采集宮頸外口與宮頸管宮頸脫落細(xì)胞，保存于專(zhuān)用的細(xì)胞保存液中，放置4℃中保存，1 w內(nèi)檢測(cè)。

1.2.2 宮頸細(xì)胞學(xué)檢查 采用Liqui－PREPTM細(xì)胞涂片試劑，用專(zhuān)用宮頸脫落細(xì)胞采集刷收集宮頸外口與宮頸管的脫落細(xì)胞，保存于專(zhuān)用的細(xì)胞保存液中，對(duì)所取標(biāo)本進(jìn)行宮頸液基細(xì)胞檢查。診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2001年國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)TBS診斷系統(tǒng)。

1.2.3 陰道鏡檢查 對(duì)部分HPV感染陽(yáng)性者和(或)細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性(ASCUS及以上分級(jí))者作陰道鏡檢查，有異常者宮頸活檢送病理檢查，操作由專(zhuān)門(mén)的婦科醫(yī)師進(jìn)行，以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 在所檢測(cè)的23 983例標(biāo)本中，HPV基因陽(yáng)性標(biāo)本為5 372例，陽(yáng)性率為22.40%。所有21種HPV基因亞型均有檢出。在21種亞型中，比例最高的是HPV16型。各種HPV基因亞型陽(yáng)性率見(jiàn)表1。

表1 HPV各亞型感染陽(yáng)性率構(gòu)成 n(%)

2.2 單一感染和多重感染的構(gòu)成情況

在5 372例HPV基因陽(yáng)性標(biāo)本中，單一HPV基因亞型感染為3 966例，占全部感染標(biāo)本的73.83%，雙重感染為19.76%(1 061/5 372)，三重感染為 4.16%(223/5 372)，四重以上感染為2.28%(122/5 372)，最多的一個(gè)標(biāo)本有7個(gè)HPV基因亞型感染。多重感染涉及除HPV－42、35亞型外的19種亞型。

2.3 HPV感染年齡分布

本研究HPV感染者年齡最低19歲，最高73歲，感染高峰年齡為26～45歲，見(jiàn)表2。

表2 廣東清遠(yuǎn)地區(qū)HPV感染年齡分布情況 n(%)

2.4 各級(jí)宮頸病變程度高與危型HPV感染情況的比較

本研究對(duì)603例HPV感染者行陰道鏡下病理學(xué)活檢，病理學(xué)結(jié)果按病變程度分為正常宮頸、宮頸炎、CINⅠ～Ⅲ和侵潤(rùn)癌。隨宮頸疾病及癌前病變程度的加重，高危型HPV感染率均顯著上升，CINⅡ、CINⅢ和侵潤(rùn)癌均為100%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 宮頸病變程度HPV感染情況分析 (n)

3 討論

宮頸疾病是婦女健康的嚴(yán)重威脅，而宮頸癌已成為目前女性中僅次于乳腺癌的第二致死癌癥病因。近年我國(guó)的宮頸癌患者逐漸增多并呈現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)［1］。國(guó)內(nèi)外大量的流行病學(xué)和分子生物學(xué)的研究均表明，HPV感染與宮頸癌及宮頸癌前病變密切相關(guān);其中高危型HPV感染是導(dǎo)致宮頸癌的主要因素［2］。因此，對(duì)宮頸疾病患者進(jìn)行HPV檢測(cè)和分型是宮頸病變處理的重要依據(jù)之一，是進(jìn)行宮頸癌篩查必要的步驟。本研究通過(guò)對(duì)2萬(wàn)多名婦女行HPV 21種HPV基因型的分型檢測(cè)發(fā)現(xiàn)21種亞型均有檢出，共有5 372例陽(yáng)性患者，陽(yáng)性率為22.40%?；颊吒呶Ｐ偷母腥韭视筛叩降鸵来螢?HPV －16、52、56、66、33、18、31、39、68、59、58、51、53、45、35亞型，低危型的感染率由高到低依次為:HPV－11、cp8304、6、44、42、43亞型。高危型的基因亞型主要以HPV－16、52 亞型為主，其次為 HPV －56、66、33、18 亞型等，感染率依次為:6.02%、4.46%、2.68%、1.86%、1.67%、1.51%;而低危型主要為 HPV－11、cp8304、6亞型，感染率依次為:2.25%、1.55% 、1.51% 。

HPV基因亞型的分布有地域性。CLIFFORD等［3］對(duì)在世界范圍內(nèi)的10 058例宮頸癌患者的資料進(jìn)行分析歸納，HPV－16、18亞型為最常見(jiàn)，其次是45、31、33亞型。但是在亞洲，52、58亞型的比例高于45、31、33等基因型。在日本，52亞型居第2位;在韓國(guó)，58亞型居第3位［4－5］。有文獻(xiàn)報(bào)道，新疆地區(qū)排前5 位的HPV 亞型為HPV －16、56、33、18、45亞型［6］，德宏地區(qū)排在前5位的HPV高?；蛐鸵来问荋PV16、HPV58、HPV52、HPV33 和 HPV18［7］，衢州地區(qū)基本相同［8］;而廣東陽(yáng)江地區(qū)排在前5位的 HPV亞型依次為HPV －l8、52、43、16 和58 亞型［9］。本研究顯示，HPV －52 亞型為僅次于16亞型的第二常見(jiàn)亞型，與相關(guān)報(bào)道相近，證明HPV－52亞型在中國(guó)南方有較高感染率，同時(shí)也證明了HPV亞型分布的地域差異性。

有研究表明，HPV多重感染是子宮頸上皮細(xì)胞癌發(fā)生的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素［10］。本研究顯示，多重感染的標(biāo)本占全部陽(yáng)性標(biāo)本的26.17%，涉及除HPV－42、35亞型外的19種亞型，多數(shù)患者為2～3重感染。因此，對(duì)宮頸炎癥患者進(jìn)行HPV基因分型檢測(cè)，對(duì)于指導(dǎo)臨床對(duì)疾病采取及時(shí)、適當(dāng)?shù)闹委煷胧?，?duì)高危型HPV感染的患者進(jìn)行長(zhǎng)期的跟蹤隨訪和預(yù)后判斷，降低宮頸癌的發(fā)病率有著重要的意義。

本研究顯示HPV感染高峰年齡為26～45歲，這可能與該年齡段的婦女性生活較活躍有關(guān)。年輕婦女中HPV感染率很高，雖然大多數(shù)感染HPV的婦女有免疫防御機(jī)制對(duì)抗病毒，HPV感染在1～2年內(nèi)可自行消退，屬于一過(guò)性感染，并不一定導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。但一般來(lái)說(shuō)，高危HPV持續(xù)感染15年左右導(dǎo)致癌前病變，而明確診斷宮頸癌大約在感染后20年［11］。我們可以發(fā)現(xiàn)感染高峰年齡段與宮頸癌的好發(fā)年齡50～55歲約相差10～20年左右，這進(jìn)一步證實(shí)持續(xù)的HPV感染是導(dǎo)致CIN及宮頸癌的元兇［12］。有研究證明hrHPV病毒載量與宮頸病變程度呈正相關(guān)［13］。

本研究也顯示隨宮頸疾病及癌前病變程度的加重，高危型HPV感染率均顯著上升，CINⅡ、CINⅢ和侵潤(rùn)癌均為100%的高危型HPV感染，這也證實(shí)高危型HPV感染與宮頸癌密切相關(guān)［14］。

通過(guò)HPV分型檢測(cè)篩查出感染人群，對(duì)其進(jìn)行跟蹤管理，以期發(fā)現(xiàn)早期的宮頸癌前病變或早期的浸潤(rùn)癌，從而實(shí)現(xiàn)宮頸癌的早期診斷與治療正在變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)。國(guó)外目前已有HPV預(yù)防性疫苗也投入使用多年，但其研發(fā)的數(shù)據(jù)是基于歐美人群的篩查數(shù)據(jù)。由于HPV感染的分布有地域性，現(xiàn)行的疫苗并不一定適合于中國(guó)人群。HPV基因分型檢測(cè)，不但對(duì)臨床治療有指導(dǎo)意義，還可以積累資料，有助于建立中國(guó)的HPV亞型數(shù)據(jù)庫(kù)，為制定相應(yīng)的防治措施提供理論依據(jù)，有針對(duì)性地對(duì)中國(guó)各地區(qū)人群研究適合的HPV疫苗，真正意義上實(shí)現(xiàn)宮頸癌的預(yù)防和根治。

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