馬方勵(lì)，沈雪梅，時(shí) 軍

(1.無(wú)限極(中國(guó))有限公司，廣東廣州 510665;2.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

黨參(Radix Codonopsis)為桔梗科植物黨參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.、素花黨參Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川黨參Codonopsis tangshen Oliv.的干燥根，性平味甘，為補(bǔ)氣良藥，歷代醫(yī)家常替代人參藥用。黨參具有補(bǔ)氣益肺功效，其健脾養(yǎng)胃功效亦很突出，因其健脾而不燥、養(yǎng)胃而不濕，常被用于改善消化類(lèi)的方劑及保健食品組方中。《本草從新》描述，黨參“補(bǔ)中益氣，和脾胃除煩渴”?！侗静菡x》亦有描述，“黨參力能補(bǔ)脾養(yǎng)胃，潤(rùn)肺生津，健運(yùn)中氣，本與人參不甚相遠(yuǎn)。其尤可貴者，則健脾運(yùn)而不燥，滋胃陰而不濕”［1］。

多糖類(lèi)成分是黨參藥材中的重要活性成分，含量達(dá)10% ～20%［2］。多糖類(lèi)成分藥理活性明顯，如增強(qiáng)免疫功能和超氧化物歧化酶(SOD)活性、降低丙二醛(MDA)的含量、清除超氧和羥自由基、促進(jìn)脾臟造血等。另外，多糖還可顯著降低胃液、胃酸分泌和胃蛋白酶活性［3-4］。然而，關(guān)于黨參多糖改善消化功能的研究報(bào)道較少，筆者從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物食物攝取量、體重增加、胃液活力及消化道黏膜切片觀察等角度，考察黨參多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸道功能的影響，以期闡述黨參“健脾益胃”的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材與試劑 甘肅產(chǎn)黨參藥材，安徽歸然藥業(yè)有限公司，批號(hào)20120318;復(fù)方地芬諾酯片，江蘇平光制藥有限公司，批號(hào)1205221;活性炭，天津咸水沽化工有限公司;阿拉伯樹(shù)膠，天津永大化工有限公司。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種雄性小鼠，體重(20±2)g(合格證號(hào)SCXK粵2011-0015)，南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;SD雄性大鼠，體重(140±10)g(合格證號(hào)SCXK粵2011-0015)，南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.3 儀器 海精科YP1002N百分之一電子天平電子分析天平，上海玖梧康德萊一次性注射器、手術(shù)器械，測(cè)量器具等。

1.2 方法

1.2.1 黨參多糖的提取與純化 取黨參藥材，60℃烘干，剪碎，以濃度95%乙醇冷浸提取3次，每次12 h。藥渣于室溫通風(fēng)處晾干，加水熱提取3次，合并濾液，將濾液濃縮成稠浸膏狀后，加無(wú)水乙醇調(diào)整醇濃度至80%后，靜置過(guò)夜。將提取液過(guò)濾，收集沉淀物，即得黨參粗多糖。將粗多糖用濃度5%三氯醋酸溶解，離心(3 000 rpm)，上清液濃縮成稠浸膏，用無(wú)水乙醇洗滌2次，離心(3 000 rpm)，留沉淀物。將沉淀物減壓干燥，即得精制多糖。按苯酚—硫酸法測(cè)定多糖純度，含量(65.8±2.4)%(n=3)，平均得率(19.9±1.9)%(n=3)。

1.2.2 樣品溶液的配制 (1)受試樣品溶液:稱(chēng)取適量的黨參多糖提取物，加水配制成3種濃度(5、10、20 g·L-1)的黨參多糖溶液各200 mL，置于冰箱中0～4℃保存，用前水浴加熱至40～50℃;(2)四君子湯(實(shí)驗(yàn)室自制):將人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草各10 g，加水煎煮3次，合并濾液，濾液濃縮至200 mL，放涼，置于冰箱中0～4℃保存，灌胃給藥前水浴加熱至40～50℃;(3)活性炭混懸液:稱(chēng)取阿拉伯樹(shù)膠100 g，加水750 mL，煮沸至溶液呈透明，活性炭粉碎成細(xì)粉，稱(chēng)取50 g，加至上述溶液中煮沸3次，溶液放涼后加水定容到1 000 mL。0～4℃保存，用前搖勻;(4)復(fù)方地芬諾酯混懸液:取復(fù)方地芬諾酯片(每片2.5 mg)10片，研碎后加水至100 mL，臨用前配制。

1.2.3 試驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥 (1)大鼠試驗(yàn)組，共50只。設(shè)黨參多糖3個(gè)劑量組 (50、100、200 mg·kg-1)，空白組，陽(yáng)性對(duì)照組(四君子湯濃縮液，7.5 mL·kg-1)，每組10只。每日灌胃給藥1次，空白組按同體積給予試驗(yàn)用水，試驗(yàn)期間自由進(jìn)食;(2)小鼠試驗(yàn)組，共60只。設(shè)黨參多糖3個(gè)劑量組(100、200、400 mg·kg-1)、空白組、陽(yáng)性對(duì)照組(四君子湯濃縮液，15 mL·kg-1)，模型對(duì)照組，每組10只。每日灌胃給藥1次，空白組和模型對(duì)照組按同體積給予試驗(yàn)用水，試驗(yàn)期間自由進(jìn)食。

1.2.4 大鼠體重、體重增重、攝食量和食物利用率［5］連續(xù)給藥30 d，每周測(cè)體重和食物攝入量，計(jì)算食物利用率(見(jiàn)公式1)。

1.2.5 小鼠小腸運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)［6］連續(xù)給藥20 d，結(jié)束給藥后禁食不禁水24 h，給予各給藥組、空白組及模型對(duì)照組一次受試樣品或蒸餾水，30 min后各給藥組和模型對(duì)照組按劑量5 mg·kg-1給予復(fù)方地芬諾酯(制成0.05 g/100 mL混懸液)，空白組給予蒸餾水，30 min后各組按10 mg·kg-1劑量給予指示劑(含5%的活性炭粉、10%阿拉伯樹(shù)膠)。

25 min后斷頸處死動(dòng)物，解剖分離腸系膜，取出幽門(mén)(上端)至回盲部(下端)小腸管，測(cè)量小腸總長(zhǎng)度及墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度(幽門(mén)至墨汁前沿)。計(jì)算炭末推進(jìn)比P(見(jiàn)公式2)及炭末推進(jìn)率(見(jiàn)公式3)。

1.2.6 消化酶測(cè)定 受試試驗(yàn)大鼠與1.2.4項(xiàng)同為一組，末次給予受試樣品后，大鼠禁食不禁水16 h。乙醚麻醉后，結(jié)扎大鼠幽門(mén)，收集2 h內(nèi)排出的胃液，測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)胃液量。取胃液1 mL，加入0.05 mol·L-1鹽酸溶液15 mL搖勻，放入新鮮制作的蛋白管兩根。塞好瓶口，37℃恒溫孵育24 h，取出蛋白管，用尺測(cè)量蛋白管兩端透明部分的長(zhǎng)度(mm)，以四端之值求其平均值。計(jì)算胃蛋白酶活性(見(jiàn)公式4)和胃蛋白酶排出量(見(jiàn)公式5)。

1.2.7 胃腸切片制片及觀察 連續(xù)給藥30 d，結(jié)束給藥后禁食不禁水24 h，腹腔注射烏來(lái)糖(劑量1.5 g·kg-1)，麻醉后在無(wú)菌條件下取大鼠胃、十二指腸、空腸組織，經(jīng)福爾馬林(濃度10%)固定，24 h后常規(guī)石蠟包埋，4 mm厚連續(xù)切片，蘇木素—伊紅(HE)染色，光鏡觀察微黏膜表面特征及變化，攝片。

1.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)行組間方差分析。若各組方差齊，采用單因素方差分析法(one way-ANOVA)，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，采用LSD法進(jìn)行各劑量組與對(duì)照組之間的均數(shù)比較;若方差齊性不能滿(mǎn)足，采用Tamhane＇s T2法統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 大鼠體重、體重增重、攝食量和食物利用率試驗(yàn)

2.1.1 黨參多糖對(duì)大鼠體重的影響 從第1周開(kāi)始，黨參多糖高劑量組大鼠體重均顯著高于空白組(P＜0.05或P＜0.01);觀察期末，中、高劑量組大鼠體重顯著高于空白組 (P＜0.05)，與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)差異。中劑量組、高劑量組大鼠總體重增長(zhǎng)顯著高于空白組(P＜0.01)，見(jiàn)表1。

2.1.2 黨參多糖對(duì)大鼠攝食量的影響 第2周大鼠的攝食量明顯增加，與空白組相比，黨參多糖高劑量組攝食量均顯著增加(P＜0.01)。中、高劑量組總攝食量與空白組比較，差異有顯著性 (P＜0.05)，見(jiàn)表 2。

表1 黨參多糖對(duì)大鼠體重的影響(±s，n=10)

表1 黨參多糖對(duì)大鼠體重的影響(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較，△P ＜0.05;△△P＜0.01。

.9 230.4±19.8 89.1±12.8低劑量組(50 mg·kg-1) 139.34±14.6 157.4±15.8 194.9±24.1 220.4±19.6△ 241.2±18.4△ 101.9±12.2△中劑量組(100 mg·kg-1) 143.7±12.9 170.2±8.8 197.6±11.8 228.0±12.67* 250.2±12.4* 106.5±12.8*高劑量組(200 mg·kg-1) 143.0±9.4 173.2±10.9* 209.1±18.2＊＊ 234.1±12.4＊＊ 261.3±12.0＊＊ 118.3±13.1＊＊陽(yáng)性對(duì)照組(7.5 mL·kg-1) 139.2±11.2 169.5±10.8 193.2±10.2 235.4±9.8＊＊ 257.4±10.9＊＊ 118.2±5.4/g空白組 141.3±10.5 162.00±10.3 183.7±16.2 212.6±19組別 體重/g初始 第1周 第2周 第3周 期末 體重增長(zhǎng)＊＊

表2 黨參多糖對(duì)大鼠攝食量的影響(±s，n=10)

表2 黨參多糖對(duì)大鼠攝食量的影響(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較，△P ＜0.05;△△P＜0.01。

±36.4低劑量組(50 mg·kg-1) 55.8±11.0 81.9±4.4△ 82.5±4.4△ 68.9±5.3 289.1±14.7中劑量組(100 mg·kg-1) 60.2±8.4 78.4±16.4 92.5±5.4△ 71.5±7.7 302.6±20.7*高劑量組(200 mg·kg-1) 59.7±16.8 92.8±9.7＊＊△△ 81.5±19.8△△ 71.8±8.9 305.8±20.1*陽(yáng)性對(duì)照組(7.5 mL·kg-1) 63.2±3.7 71.2±8.5 106.1±7.8＊＊ 64.2±14.4 304.7±17.6/g空白組 58.7±6.4 72.8±8.6 86.4±19.7 63.2±14.6 281.1組別 攝食量/g第1周 第2周 第3周 期末 總攝食量*

2.1.3 黨參多糖對(duì)食物利用率的影響 黨參多糖具有一定程度的增加食物利用率作用。與空白組相比，黨參多糖高劑量組食物總利用率較大，與陽(yáng)性對(duì)照組相當(dāng)(P＜0.01);高劑量試驗(yàn)組顯著高于空白組，見(jiàn)表3。

2.2 小腸運(yùn)動(dòng)試驗(yàn) 模型組小腸推進(jìn)率明顯低于空白組(P＜0.01)，表明便秘模型建立成功。各劑量組小鼠小腸炭末推進(jìn)率明顯高于模型組，其中中劑量組、高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組相當(dāng)，與模型組比較，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。說(shuō)明黨參多糖對(duì)復(fù)方地芬諾酯引起的小腸推進(jìn)降低有改善作用，見(jiàn)表4。

2.3 大鼠消化酶測(cè)定結(jié)果 黨參多糖可明顯提高胃蛋白酶活力及胃蛋白酶排出量，其中高劑量組極為顯著(P＜0.01)，見(jiàn)表5。

2.4 大鼠胃腸病理切片觀察結(jié)果 黨參多糖各劑量組，相對(duì)于空白組大鼠，大鼠的胃黏膜及胃壁均有不同程度的增厚，微絨毛增大;桔紅色胃黏膜上下兩側(cè)分別被覆復(fù)層扁平上皮和單層柱狀上皮，黏膜交界處的組織致密，深方的環(huán)層肌增厚。黨參多糖各劑量組，十二指腸及空腸的腸絨毛平均面積均有不同程度增大。中、高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差異，見(jiàn)圖1～3。

表3 黨參多糖對(duì)食物利用率的影響(±s，n=10)

表3 黨參多糖對(duì)食物利用率的影響(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

1.99±4.6低劑量組(50 mg·kg-1) 32.00±6.99 46.02±13.2* 30.95±18.34 30.36±8.2 35.31±4.4中劑量組(100 mg·kg-1) 43.67±10.2* 33.93±17.4 32.85±12.65 31.39±3.9 35.41±5.4高劑量組(200 mg·kg-1) 49.67±9.5＊＊ 39.23±13.1 28.85±13.7 38.63±7.1＊＊ 38.76±4.5＊＊陽(yáng)性對(duì)照組(7.5 mL·kg-1) 48.16±4.5＊＊ 33.71±4.4 39.99±3.5 34.19±4.1＊＊ 38.85±1.8/%空白組 35.43±4.7 30.62±22.2 31.51±11.7 27.01±7.7 3組別 食物利用率/%第1周 第2周 第3周 期末 利用率＊＊

表4 黨參多糖對(duì)小鼠炭末推進(jìn)率的影響(±s，n=10)

表4 黨參多糖對(duì)小鼠炭末推進(jìn)率的影響(±s，n=10)

注:與模型組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01。

/%空白組 71.2±12.6## 0.98±0.28組別 炭末推進(jìn)比/% 炭末推進(jìn)率##模型對(duì)照組 52.6±0.17 0.81±0.16低劑量組(100 mg·kg-1) 68.4±10.3# 0.91±0.12#中劑量組(200 mg·kg-1) 91.5±7.8## 1.30±0.16##高劑量組(400 mg·kg-1) 77.8±23.6## 1.07±0.32##陽(yáng)性對(duì)照組(15 mL·kg-1) 76.9±14.1## 1.06±0.16##

表5 黨參多糖對(duì)大鼠消化酶的影響(±s，n=10)

表5 黨參多糖對(duì)大鼠消化酶的影響(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較，△△P ＜0.01。

白酶·h -1 3.7.05＊＊(100 mg·kg-1)0.71±0.23 17.07±4.42* 12.10±4.53*高劑量組(200 mg·kg-1)0.68±0.17*25.42±9.76＊＊△△ 17.38±7.81＊＊陽(yáng)性對(duì)照組(7.5 mL·kg-1)0.68±0.18* 18.30±6.04* 12.10±3.86*

圖1 大鼠胃黏膜病理切片(×40)

圖2 大鼠十二指腸黏膜病理切片(×40)

圖3 大鼠空腸黏膜病理切片(×40)

3 討論

消化不良是臨床常見(jiàn)癥狀，在我國(guó)城市人口中發(fā)生率高達(dá)20% ～54%，其發(fā)病率隨年齡的增長(zhǎng)而增加，50～59歲年齡段達(dá)到高峰。消化不良主要表現(xiàn)為脾虛，而脾是一個(gè)以消化系統(tǒng)為主的多臟器多系統(tǒng)的綜合功能單位，脾虛時(shí)大量器官會(huì)出現(xiàn)基因水平、分子水平、細(xì)胞水平的變化，從而引起組織結(jié)構(gòu)和功能的改變，其中消化酶的變化更顯突出［9］。

化學(xué)藥物治療消化不良，常利用增加胃動(dòng)力制劑或消化酶制劑，起效迅速，但不能從根源上解決問(wèn)題，往往引發(fā)如過(guò)敏反應(yīng)、口干等不良反應(yīng)，長(zhǎng)期服用還會(huì)產(chǎn)生耐藥性。一些補(bǔ)虛類(lèi)中藥具有健脾益胃功效，可以顯著改善消化不良癥狀，服用安全、無(wú)副作用。黨參中多糖含量高達(dá)10% ～20%，是黨參藥材健脾益胃的活性有效部位。動(dòng)物功效試驗(yàn)表明，黨參多糖具有促進(jìn)消化功能，即增進(jìn)動(dòng)物食欲和進(jìn)食量，提高胃蛋白酶活力及胃蛋白酶排出量，促進(jìn)小腸蠕動(dòng)。

20世紀(jì)90年代的研究認(rèn)為，口服多糖類(lèi)大分子不被腸道吸收，不具有藥理活性［7］。但近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，口服多糖可以通過(guò)改變胃腸道菌群代謝，從而發(fā)揮改善胃腸吸收的作用，這可能與黨參多糖含有高度分支結(jié)構(gòu)的糖鏈、糖鏈間形成大小不同的環(huán)有關(guān)［8-9］。如麥冬多糖MDG-1在腸道內(nèi)分解，主要代謝部位在大腸，腸道內(nèi)環(huán)境及細(xì)菌共同作用引起多糖降解，發(fā)揮降血糖的活性［10］。

［1］ 楊扶德，李成義.黨參歷代本草考證［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2007，14(2):100-102.

［2］ 時(shí) 軍，馬方勵(lì)，王小燕，等.黨參藥材中黨參炔苷與總多糖、總皂苷含量的相關(guān)性研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29(12):1245-1248.

［3］ Silva RO，Santana AP，Carvalho NS，et al.A sulfated-polysaccharide fraction from seaweed Gracilaria birdiae prevents naproxen-inducedgastrointestinal damage in rats［J］.Mar Drugs，2012，10(12):2618-2633.

［4］ Meka VS，Nali SR，Songa AS，et al.Characterization and in vitro drug release studies of a natural polysaccharide Terminalia catappa gum(Badam gum)［J］.AAPS Pharm Sci Tech，2012，13(4):1451-1464.

［5］ 王叔橋，張麗宏，劉 莉，等.健胃喜食寶片促進(jìn)消化功能動(dòng)物試驗(yàn)研究［J］.四川醫(yī)學(xué)，2012，33(1):28-30.

［6］ 吳經(jīng)耀，呂圭源.川、浙厚樸緩解小鼠便秘作用的藥效比較［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16(6):732-733.

［7］ Song X，Yin Z，Zhao X，et al.Antiviral activity of sulfated Chuanmingshen violaceum polysaccharide against Newcastle disease virus［J］.J Gen Virol，2013，94(10):2164-2174.

［8］ 任麗靖，張 靜，劉志存，等.黨參多糖的分離純化及其結(jié)構(gòu)研究［J］.中草藥，2008，39(7):986-989.

［9］ 宋克玉，江振友，嚴(yán)群超，等.黨參及茯苓對(duì)小鼠腸道菌群調(diào)節(jié)作用實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2011，27(2):142-144.

［10］謝華通，王 碩，阮克峰，等.凝膠色譜法測(cè)定麥冬多糖MDG-1在大鼠胃腸道含量變化［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(13):139-141.