張志輝，紀(jì) 波，穆玉恕

(泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胸外科，山東泰安，271000)

食管癌是中國(guó)最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率和死亡率，如何早期發(fā)現(xiàn)食管癌并及時(shí)控制食管癌的進(jìn)展，是醫(yī)療工作者高度關(guān)注的課題之一。上皮細(xì)胞黏附分子(Ep-CAM)是一類具有細(xì)胞黏附、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多功能的上皮細(xì)胞跨膜糖蛋白，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，因此被視為癌前病變或惡性腫瘤的早期標(biāo)志物［1］。本研究觀察了60例食管癌患者的癌組織中Ep-CAM的表達(dá)水平，探討其與食管癌病理特征之間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年6月—2011年1月在本院行手術(shù)治療的60例食管癌患者為研究對(duì)象，其中男27例，女33例，年齡38 ～70歲，平均(55.27 ±4.16)歲;根據(jù)國(guó)際 TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期13例，Ⅱ期25例，Ⅲ期14例，Ⅳ期8例。取所有患者癌組織標(biāo)本60例，設(shè)為A組，同一腫瘤標(biāo)本上殘端的正常食管黏膜組織35例，設(shè)為B組;同時(shí)取同期手術(shù)治療的食管黏膜不典型增生的組織標(biāo)本35例，設(shè)為C組。3組人群一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑:RM2135型切片機(jī)購(gòu)自德國(guó)LEICA公司，BX41顯微鏡購(gòu)自日本OLYMPUS公司，鼠抗人Ep-CAM單克隆抗體及SP試劑盒購(gòu)自深圳科潤(rùn)達(dá)生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 測(cè)定方法:組織標(biāo)本固定于4%多聚甲醛溶液中，用石蠟包埋，常規(guī)4μm切片，置入60℃烤箱4h后，脫蠟10 min，以不同濃度酒精浸泡后自來(lái)水沖洗后蒸餾水浸泡3 min。經(jīng)3%過(guò)氧化氫室溫孵育25 min，蒸餾水沖洗，磷酸緩沖液浸泡5 min，再以0.01 M枸櫞酸鹽修復(fù)緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)后，PBS沖洗2次，5 min/次。血清封閉后，室溫孵育45 min，加一抗過(guò)夜;PBS沖洗3次，5 min/次，加二抗，室溫孵育30 min;PBS沖洗3次，5 min/次，加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫孵育25 min，PBS沖洗3次，每次為5 min;二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木精染色，常規(guī)脫水、透明、封片。2名病理科醫(yī)生采用雙盲法判定染色結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察3組組織標(biāo)本中Ep-CAM的表達(dá)水平，同時(shí)收集患者相關(guān)臨床資料，包括患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、腫瘤分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移狀況等。此外，患者術(shù)后隨訪至2014年1月，記錄患者生存情況。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)染色的細(xì)胞數(shù)及染色程度分為－、+、2+、3+共4個(gè)等級(jí)。其中，－:不顯色或＜10%的細(xì)胞呈現(xiàn)任何水平的染色;+:10%～25%的細(xì)胞膜呈現(xiàn)弱染色，或＞10%的細(xì)胞膜強(qiáng)染色;2+:25% ～50%的細(xì)胞膜強(qiáng)染色;3+:＞50%的腫瘤細(xì)胞膜全部呈現(xiàn)強(qiáng)染色。

2 結(jié)果

2.1 Ep-CAM在3組組織中的表達(dá)水平比較

Ep-CAM在正常食管黏膜組織中無(wú)陽(yáng)性表達(dá);在增生黏膜組織中判定為+者6例，2+者4例，總陽(yáng)性率為28.57%(10/35);癌組織中，判定為+者13例，2+者25例，3+者16例，總陽(yáng)性率為90.00%(54/60)。Ep-CAM養(yǎng)性表達(dá)組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 Ep-CAM的表達(dá)與食管癌病理特征的關(guān)系

根據(jù)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)結(jié)果，Ep-CAM的表達(dá)在患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度間比較無(wú)顯著差異(P＞0.05);不同腫瘤分化程度、是否存在淋巴轉(zhuǎn)移之間的Ep-CAM的表達(dá)，比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或 P＜0.05)，見(jiàn)表1。隨訪期內(nèi)，根據(jù)患者食管癌組織的EP-CAM表達(dá)程度，其3年生存率隨分別為:－，100%(0/6);+，77%(3/13);2+，24%(6/25);3+，12.5%(2/16)，隨著Ep-CAM表達(dá)水平升高，患者3年期生存率降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 Ep-CAM的表達(dá)與食管癌病理特征的關(guān)系(n)

3 討論

食管癌發(fā)病率占世界范圍內(nèi)惡性腫瘤發(fā)病率第九位，目前食管癌主要通過(guò)外科手術(shù)結(jié)合放、化療等方案進(jìn)行治療，但臨床療效并不理想，5年生存率偏低［2］，因此如何及早發(fā)現(xiàn)食管癌、控制癌前病變的發(fā)展對(duì)改善患者生存質(zhì)量、提高生存率至關(guān)重要。

Ep-CAM是一種由腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白基因(TACSTD1)編碼的Ⅰ型跨膜糖蛋白，屬于Ca2+非依賴性黏附分子［3－5］。Ep-CAM 作為部分惡性腫瘤的標(biāo)志物，在正常食管上皮組織中表達(dá)為陰性，而在Barret食管上皮中通常為散在分布的低表達(dá)，且不同區(qū)域的食管腸化生柱狀上皮細(xì)胞的 Ep-CAM 表達(dá)水平也有所差異［6－7］。Ep-CAM在惡性腫瘤中的確切作用機(jī)制目前尚無(wú)定論，有研究［8－9］表明，Ep-CAM信號(hào)系統(tǒng)可以通過(guò)上調(diào)原癌基因(c-myc)來(lái)影響腫瘤細(xì)胞的分化與增殖。相關(guān)學(xué)者研究了Ep-CAM在正常胃上皮黏膜組織、胃腸化生組織、胃上皮異常增生組織和胃腺癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)了相似的表達(dá)規(guī)律，即其表達(dá)水平在這些組織中呈逐步升高趨勢(shì)［10］。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Ep-CAM與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)周期呈顯著相關(guān)，其表達(dá)可降低腫瘤細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子的需要數(shù)量，增強(qiáng)細(xì)胞的代謝活力［11］。Deschoolmeester等［12］研究發(fā)現(xiàn)，Ep-CAM 可抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫能力，使T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫機(jī)制失去作用。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究［13－14］結(jié)果也表明，Ep-CAM在食管病變的不同階段，其表達(dá)水平會(huì)發(fā)生相應(yīng)的改變，在食管癌組織中，表達(dá)水平隨著腫瘤的進(jìn)展程度而增加。

本研究結(jié)果顯示，Ep-CAM在正常食管黏膜組織中無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，而在食管癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)水平特異性增高，這可能與提示編碼Ep-CAM的TACSTD1基因在正常食管上皮組織中處于靜默狀態(tài)，當(dāng)在各種致癌因素的激發(fā)下，被特異性激活發(fā)生異常表達(dá)有關(guān)［15－16］。同時(shí)，研究結(jié)果還顯示了Ep-CAM表達(dá)水平與腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的狀況存在潛在關(guān)聯(lián)，這可能解釋了Ep-CAM在患者腫瘤細(xì)胞增殖分化及轉(zhuǎn)移過(guò)程中起了重要作用［17－18］。此外，不同 Ep-CAM 表達(dá)水平下患者的3年生存率之間存在顯著差異，這預(yù)示著隨著惡性腫瘤細(xì)胞的增加，其表達(dá)水平也逐漸增強(qiáng)，患者預(yù)后越不佳。

綜上所述，Ep-CAM在食管癌的癌組織中呈現(xiàn)特異性高表達(dá)。針對(duì)食管病變患者檢測(cè)其Ep-CAM表達(dá)水平將有助于食管癌前病變及惡性腫瘤的診斷，同時(shí)，Ep-CAM可作為靶向因子之一，為臨床上治療食管癌提供新途徑。

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