張文靜 ，李明麗 ，樊永慶 ，薛曉霞 ，闞淑玲 ，劉建平 *

1中國藥科大學(xué)藥劑學(xué)教研室，南京 210009；2辰欣藥業(yè)股份有限公司，山東濟(jì)寧 272000；3西藏海思科醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，四川成都 610000

埃索美拉唑鎂 [Esomeprazole Magnesium，（ESM）2-Mg]是奧美拉唑的 S-構(gòu)型旋光異構(gòu)體[1]，是通過特異性抑制胃壁細(xì)胞質(zhì)子泵減少胃酸分泌的質(zhì)子泵抑制劑（proton pump inhibitor，PPI）。 研究表明，（ESM）2-Mg對胃食管反流性疾病[2]、消化性潰瘍[3-4]和十二指腸潰瘍都有較好地療效，其作為新一代PPI，具有抑酸效果持久、不良反應(yīng)小的特點(diǎn)，是治療消化性潰瘍較理想的藥物。（ESM）2-Mg是埃索美拉唑的鎂鹽，性質(zhì)更穩(wěn)定，便于貯存和加工。埃索美拉唑鎂在酸性條件下不穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)采用流化床上藥包衣的方法制備 （ESM）2-Mg腸溶微丸，并用Box-Behnken效應(yīng)面法對其處方進(jìn)行優(yōu)化，處方工藝簡單可行，有望用于工業(yè)化生產(chǎn)。

1 材 料

1.1 儀器

JHQ-100型流化沸騰顆粒包衣機(jī)（沈陽遼寧醫(yī)聯(lián)新藥研究所）；ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀 （天津天大天發(fā)科技有限公司）；UV-2102 PC分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）；Aglient1260高效液相色譜儀 （Aglient公司）；Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，Sweden）；電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；S-3000N掃描電子顯微鏡 （日本，Hitachi）。

1.2 藥品和試劑

埃索美拉唑鎂三水合物（山東誠創(chuàng)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司，以無水物計(jì)含C34H36MgN6O6S2100.20%，含水量 7.19%）；蔗糖丸心（德國 JRS）；丙烯酸樹脂 （Eudragit L30D-55，上海德固賽輔料公司）；市售制劑（阿斯利康）；歐巴代03K19229（卡樂康）；羥丙纖維素LF（卡樂康）；檸檬酸三乙酯（阿拉丁）；其他試劑均為分析純。

2 方 法

2.1 載藥丸心的制備

以3.5%的羥丙纖維素LF（Hydroxypropyl cellulose，HPCLF）水溶液為黏合劑，將（ESM）2-Mg 分散于其中制成混懸液。將空白丸心置于料筒中，采用底噴法，制備載藥丸心。控制床溫30℃～31℃，霧化壓力0.1 MPa～0.12 MPa，鼓風(fēng)機(jī)頻率22.5 Hz～24.5 Hz，噴液流速 3 mL·min-1～4 mL·min-1，藥層增重 90%。上藥結(jié)束后，流化干燥30 min。

2.2 載藥微丸的包衣

實(shí)驗(yàn)使用的腸衣材料Eudragit L30D-55為酸性高分子材料，其pH值大約為4[5]。（ESM）2-Mg在酸性條件下不穩(wěn)定，故微丸在包腸溶層之前需要先包隔離層[6]以避免藥物與腸衣材料直接接觸。歐巴代03K19229為專用的中性隔離材料，采用流化床工藝進(jìn)行包衣。

2.2.1 隔離層包衣稱取適量歐巴代03K19229，以水為溶劑配制含量為8%的溶液，將所配包衣液在持續(xù)攪拌狀態(tài)下用噴槍噴灑至含藥微丸上?？刂拼矞?36℃～38℃，霧化壓力 0.1 MPa～0.12 MPa，鼓風(fēng)機(jī)頻率 22.5 Hz～24.5 Hz，噴液流速 3～4 mL·min-1，包衣結(jié)束后流化干燥30 min。

2.2.2 腸衣層包衣取水10 g，加熱至70℃。加入檸檬酸三乙酯0.9 g、吐溫-80 0.6 g，加入0.4 g單硬脂酸甘油酯攪拌至單硬脂酸甘油酯溶解完全，加入7 g水。用普通攪拌機(jī)持續(xù)攪拌至30℃以下，最后將此混懸液緩慢倒入30 g EudragitL30D-55水分散體中，同時低速攪拌。包衣控制床溫31℃～32℃，霧化壓力 0.1 MPa～0.12 MPa，鼓風(fēng)機(jī)頻率 22.5 Hz～24.5 Hz，噴液流速2～3 mL·min-1，包衣結(jié)束后流化干燥30 min。

2.3 耐酸力的測定

按照《中國藥典》2010版附錄XC第一法，以氯化鈉的鹽酸溶液500 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)籃速度為100 r·min-1，120 min 后，取下轉(zhuǎn)籃，用水沖洗轉(zhuǎn)籃內(nèi)顆粒，照“含量測定”項(xiàng)下方法制備樣品溶液。另取奧美拉唑?qū)φ掌愤m量，同法配制成對照品溶液，按高效液相色譜外標(biāo)法測定并計(jì)算剩余藥物含量。

2.4 釋放度的測定

按照 《中國藥典》2010版附錄XD第二法，以0.1 mol·L-1鹽酸溶液500 mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，2 h后，在鹽酸溶液中加入預(yù)熱至37℃的0.235 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液400 mL，轉(zhuǎn)速不變，繼續(xù)釋放。在45 min時取樣濾過，依法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算釋放量。

2.5 Box-Behnken效應(yīng)面法優(yōu)化埃索美拉唑鎂腸溶微丸處方

2.5.1 影響因素和考察指標(biāo)的確定通過預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)（ESM）2-Mg腸溶微丸的含藥溶液濃度、隔離層增重、腸衣層增重對微丸耐酸力和釋放度影響較大。根據(jù)初步考察結(jié)果，采用含藥層藥物濃度（X1）、隔離層增重（X2）及腸衣層增重（X3）作為考察因素。根據(jù)Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原理，每個因素設(shè)置低、中、高 3 水平，編碼分別為-1、0、1。以微丸耐酸力（Y1）、釋放度（Y2）作為考察指標(biāo)，其限度分別為 Y1＞90%、Y2＞80%。測定市售制劑耐酸力和釋放度作為自制制劑的最終目標(biāo)。以含藥溶液濃度、隔離層增重、腸衣層增重為可變因素，以耐酸力、釋放度為考察指標(biāo)進(jìn)行三因素三水平的優(yōu)化。因素水平見表1。

2.5.2 處方驗(yàn)證選擇最優(yōu)處方制備制劑，進(jìn)行耐酸力、釋放度研究。

2.5.3 溶出曲線比較按“2.5.1”優(yōu)化得到的處方制備腸溶微丸3批。采用溶出度測定法（2010版《中國藥典》附錄XC第一法）裝置，以pH 6.8的磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)籃速度為100 r·min-1，分別于5、10、15、45、60 min 取樣，濾過，測定溶出量，計(jì)算累積溶出百分?jǐn)?shù)，并繪制溶出曲線。

表1 Box-Behnken設(shè)計(jì)的因素和水平

2.5.4 電鏡表征對自制制劑的表面、橫切面進(jìn)行電鏡掃描，觀察成膜情況及各層包衣的均勻性。

3 結(jié)果與討論

3.1 模型擬合

本實(shí)驗(yàn)中不同處方的耐酸力和釋放度結(jié)果見表2。

表2 Box-Behnken設(shè)計(jì)及響應(yīng)值

從表2結(jié)果可以看出，當(dāng)X3水平為1時，耐酸力最好；釋放度最大的實(shí)驗(yàn)組為第5組，其釋放度大于市售制劑（93.19%）。

所得到的耐酸力和釋放度的擬合方程分別為：

效應(yīng)面響應(yīng)圖見圖1。

以市售制劑耐酸力和釋放度作為自制制劑的最終目標(biāo)，得到的最優(yōu)處方：含藥層藥物濃度19.16%，隔離層增重17.15%，腸衣層增重66.15%。由方程計(jì)算的耐酸力和釋放度分別為98.12%和95.97%。

圖1 各因素與響應(yīng)值的效應(yīng)面圖

從耐酸力和釋放度的擬合方程和效應(yīng)面響應(yīng)圖可以看出，腸衣厚度對微丸耐酸力的影響最大。隨著腸衣膜厚度的增加，微丸的耐酸力亦增加。這可能是由于腸衣材料Eudragit L30D-55在酸中不能溶解所致[7]。

從藥物釋放的影響結(jié)果可以看出，藥物濃度對微丸的釋放度影響最大。這是由于藥物濃度越大，粘合劑用量相對越小，藥物從含藥層溶出越快。腸衣材料尤特奇L30D-55在pH值5.5以上的介質(zhì)中溶解，因此腸衣層對微丸的釋放影響不大。隔離層對微丸的釋放度影響最小，這可能是由于隔離層是水溶性高分子材料，在釋放介質(zhì)中能迅速溶解，故對微丸釋放度影響較小。

3.2 處方驗(yàn)證

對最優(yōu)處方進(jìn)行耐酸力、釋放度考察，結(jié)果見表3。

表3 預(yù)測值與實(shí)測值的偏差（n=3）

篩選的最終處方的耐酸力和釋放度與預(yù)測結(jié)果較為接近，說明耐酸力和釋放度方程擬合效果較好。

3.3 溶出曲線比較

分別測定3批自制制劑在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出度，結(jié)果見圖2。

由圖2可以看出，3批制劑在PBS的pH 6.8的溶出介質(zhì)中溶出行為十分接近，說明本實(shí)驗(yàn)的處方工藝可行，重復(fù)性較好。

3.4 電鏡表征

圖2 （ESM）2-Mg腸溶微丸溶出曲線圖

由圖3-A中可以看出，微丸圓整度好，大小均勻，表面光滑，無空隙，表明衣膜形成良好；圖3-B為微丸橫切圖，可以明顯看出含藥層、隔離層、腸衣層厚度均一，各層衣膜質(zhì)量良好。

圖3 （ESM）2-Mg腸溶微丸表面（A）和橫切面（B）掃描電鏡圖

4 結(jié) 論

制備與市售制劑性質(zhì)接近的埃索美拉唑鎂腸溶微丸，須綜合考慮各因素的影響，腸溶微丸的耐酸力和釋放度是評價微丸性質(zhì)的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)測定市售制劑的耐酸力和釋放度，并以此為目標(biāo)，采用Box-Behnken效應(yīng)面法優(yōu)化埃索美拉唑鎂腸溶微丸的處方，得到最優(yōu)處方并進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明，腸衣層厚度對腸溶微丸耐酸力影響最大，含藥層藥物濃度對微丸釋放度影響最大。按優(yōu)化得到的處方制得的腸溶微丸其耐酸力和釋放度與預(yù)測值接近，表明Box-Behnken效應(yīng)面優(yōu)化可有效應(yīng)用于埃索美拉唑鎂腸溶微丸的制備。

[1]Hassan-Alin M,Niazi M,Rohss K,et al.Esomeprazole,the S-Isomer of omeprazole,is optically stable in humans[J].J Gastroenterology,2000,118(4):A1244-5.

[2]Szucs T,Thalmann C,Michetti P,et al.Cost analysis of long-term treatment of patients with symptomatic gastroesophageal reflux disease(GERD)with esomeprazole on-demand treatment or esomeprazole continuous treatment:an open,randomized,multicenter study in switzerland[J].J Value in Health,2009,12(2):273-81.

[3]Barkun AN,Sung JJ,Kuipers EJ,et al.225 Intravenous esomeprazole for prevention of peptic ulcer rebleeding in a predominantly caucasian population:results on clinical benefits and hospital resource use[J].J Gastroenterology,2009,136(5):A-43-A-49.

[4]Jiawu Song,Bo Guo,Lan Yao,et al.S1046 The clinical study of ilaprazole on duodenal ulcer,a randomize study compared with esomeprazole[J].J Gastroenterology,2010,138(5):S-166-7.

[5]胡海洋，宋華先，陳大為，等.奧美拉唑腸溶微丸的制備及其處方優(yōu)化[J]. 中國藥學(xué)雜志，2003，38（10）：780-1.

[6]周 欣，張 晶，王 娟.奧美拉唑腸溶微丸膠囊的制備[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報，2010，28（1）：32-5.

[7]白 靖，李 騫，王 靜，等.藥用丙烯酸樹脂在制劑中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 中國藥房，2011，22（17）：1613-6.