遼寧衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院衛(wèi)檢教研室(110101)范 穎 董 瑤 徐國鋒 馬月嬌

在缺血性疾病搶救和治療過程中，目前發(fā)現(xiàn)對組織造成損傷的主要因素不是缺血本身，而是恢復(fù)血液供應(yīng)后出現(xiàn)了更加嚴重的腦機能障礙。腦缺血再灌注損傷發(fā)生機制十分復(fù)雜，與自由基的生成、細胞內(nèi)鈣超載、興奮性氨基酸毒性、白細胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有關(guān)。多項實驗研究證明，這種病理生理變化存在一定的藥物干預(yù)性［1，2］。本實驗從硒與川芎嗪配伍對腦缺血再灌注損傷保護機制的研究，探討中藥復(fù)方制劑對其防治作用的可行性。

1 材料與方法

1.1 動物 SD大鼠50只，雌雄各半，體重(200±20)g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 藥物與試劑 亞硒酸鈉由沈陽市第五試劑廠生產(chǎn)，批號1304151，臨用時用生理鹽水配制。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 大鼠腦缺血再灌注損傷模型 參考文獻方法［3］，取健康大鼠腹腔注射3%戊巴比妥后固定于手術(shù)臺上。沿頸中線剪開頸部皮膚，分離雙側(cè)頸總動脈。用小動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈30分鐘后，松開雙側(cè)小動脈夾再灌注60分鐘，縫合頸部皮膚。其他組麻醉后頸部切開，分離雙側(cè)頸總動脈，不夾閉。

1.3.2 分組及給藥 50只大鼠隨機分成5組。即假手術(shù)組、缺血再灌注組、硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組。1)假手術(shù)組:只繞頸總動脈穿線，不結(jié)扎。2)缺血再灌注組:術(shù)后4周生理鹽水灌胃處理。3)硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組:術(shù)后4周分別以亞硒酸鈉生理鹽水溶液0.625mL/100g、川芎嗪注射液1.25mL/100g、硒與川芎嗪配伍液1.875mL/100g灌胃處理。

1.3.3 指標(biāo)檢測 抗凝頸總動脈血以3000r/min離心10分鐘，取上清液分別測定GSH-Px、MDA和SOD含量。測定時按照試劑盒說明書嚴格操作。

2 結(jié)果

缺血再灌注組與假手術(shù)組相比，MDA含量明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量明顯低于假手術(shù)組(P＜0.05)。硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組與缺血再灌注組相比，MDA含量明顯低于缺血再灌注組(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量明顯高于缺血再灌注組(P＜0.05)。硒加川芎嗪組分別與硒組、川芎嗪組相比，MDA含量低于硒組、川芎嗪組(P＜0.05)，SOD、GSH-Px含量高于硒組、川芎嗪組(P＜0.05)。見表1。

表1 硒與川芎嗪配伍對大鼠腦缺血再灌注損傷血漿中SOD、GSH-Px、MDA含量()

表1 硒與川芎嗪配伍對大鼠腦缺血再灌注損傷血漿中SOD、GSH-Px、MDA含量()

注:缺血再灌注組與假手術(shù)組比較，*P＜0.05;硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組與缺血再灌注組比較，#P＜0.05。硒加川芎嗪組分別與硒組、川芎嗪組比較，△P＜0.05。

3 討論

大量自由基產(chǎn)生及其導(dǎo)致的質(zhì)膜、細胞器膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是腦缺血再灌注損傷的重要致病機制［4］。有效地自由基清除對腦缺血再灌注損傷可以起到重要的保護作用［5］。

MDA是體內(nèi)重要的氧自由基代謝產(chǎn)物，能較好地反應(yīng)組織過氧化程度。其含量是反映機體抗氧化潛在能力的重要參數(shù)，可以反應(yīng)機體脂質(zhì)過氧化速率和強度，也能間接反映組織過氧化損傷程度。缺氧可使腦組織生成大量氧自由基，氧自由基作用于細胞膜上的不飽和脂肪酸使膜脂質(zhì)產(chǎn)生過氧化反應(yīng)，進而導(dǎo)致細胞的損傷，并形成脂質(zhì)過氧化物。本實驗中，硒與川芎嗪配伍能顯著降低大鼠腦缺血再灌注損傷時MDA含量，從而減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。

SOD能專一性清除體內(nèi)有害自由基，解除因自由基氧化體內(nèi)某些組成成分而造成的機體損害。正常細胞內(nèi)有自由基清除劑SOD，使氧自由基轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫，后者又通過觸酶及GSH-Px的作用還原為水和分子氧，故小量氧自由基并不造成損傷。再灌注時產(chǎn)生了大量的氧自由基，造成內(nèi)源性自由基清除系統(tǒng)活性降低［6］。GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映機體硒水平。硒是GSH-Px酶系的組成成分，它能催化GSH變?yōu)镚SSG，使有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物，從而保護細胞膜的結(jié)構(gòu)及功能不受過氧化物的干擾及損害。本實驗中，硒組、川芎嗪組、硒加川芎嗪組均能能明顯增加缺血再灌注組血漿中SOD和GSH-Px的含量，而硒加川芎嗪組比硒組、川芎嗪組增加血漿中SOD和GSH-Px的含量更為明顯。

實驗結(jié)果表明，硒與川芎嗪配伍能明顯抑制腦缺血組織中SoD、GSH的降低以及MDA的增高。硒與川芎嗪聯(lián)合用藥比單獨用藥更能增強缺血腦組織清除氧自由基的能力。

［1］學(xué)海，楊永舉，曹奕豐，等.干預(yù)前后腦血管血液動力學(xué)指標(biāo)對比分析［J］.中國公共衛(wèi)生，2003，19(6):664

［2］孟慶年.川芎嗪注射液加補陽還五湯治療急性腦梗塞38例［J］.中西醫(yī)結(jié)合實用臨床急救，1999，6(1):12.

［3］汪遠金，申國明，王欽茂.川芎嗪對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，19(1):44

［4］陳玉敏，陳濤平，馮浩樓.腦缺血再灌注損傷機制與治療現(xiàn)狀［J］.醫(yī)學(xué)研究與教育，2012，29(6):47

［5］劉忠民，李向群，何麗婭，等.自由基在大鼠腦缺血再灌注損傷時的作用及藥物防護［J］.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，1997，10(4):347

［6］Dimagl U，Lindauer U，Them A.Global cerebral ischemiain the rat:online monitoring of oxygen free radical productionusing chemiluminescence in vivo［J］.J Cereb Blood Flow Metab，1995，15(6):925