崔慧玲,陳安均,羅嬋,夏姣,董維,孫夢遠(yuǎn)
(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,四川雅安,625014)
鮮切蔬菜(fresh-cut vegetables)是以新鮮蔬菜為原料,經(jīng)過嚴(yán)格的挑選、分級(jí)、清洗、修整、去皮、切分、修整、包裝等工序處理,再經(jīng)過低溫運(yùn)輸進(jìn)入冷柜銷售的即食或即用蔬菜制品,也稱為“最小加工”(minimally processed)、“輕度加工”(lightly processed)等,具有品質(zhì)新鮮、食用方便、營養(yǎng)衛(wèi)生和經(jīng)濟(jì)價(jià)值等優(yōu)點(diǎn)。由于鮮切蔬菜人為地使蔬菜組織結(jié)構(gòu)受到機(jī)械性損傷,容易造成微生物污染[1],引發(fā)一些不良的生理反應(yīng),破壞正常的組織代謝,加速組織衰老與腐敗,影響食用安全性,降低鮮切蔬菜的商品價(jià)值[2]。
目前,生活節(jié)奏的加快和消費(fèi)者購買力的增強(qiáng),鮮切蔬菜的消費(fèi)市場需求促進(jìn)了鮮切蔬菜產(chǎn)品行業(yè)的迅速發(fā)展。其中,鮮切蔬菜的微生物污染是直接限制產(chǎn)品流通和貨架期的重要因素之一,可能直接影響到消費(fèi)者的購買欲望。在生產(chǎn)、運(yùn)輸和貯藏過程中因?yàn)槲⑸锏纳L繁殖導(dǎo)致鮮切產(chǎn)品的腐敗,一直是困擾生產(chǎn)者的一個(gè)重要問題。
鮮切果蔬大都是從生理生化[3]、品質(zhì)[4]、清洗方式[5]、清洗(殺菌)劑[6]、褐變[7]和保鮮[8]等方面進(jìn)行研究,對(duì)微生物,尤其是腐敗菌的研究較少[9]。目前人們主要針對(duì)引起食源性疾病的一些致病菌,如沙門氏菌(Salmonella)[10]、大腸埃希氏菌(E.coil O157∶H7)[10-11]和單增李斯特菌(L.monocytogenes)[10,12]做了相關(guān)的控菌技術(shù)研究。但是一般情況下無條件致病菌的存在,大都是腐敗菌,因此進(jìn)行腐敗菌相關(guān)的研究是很有必要的。
關(guān)于鮮切生菜中優(yōu)勢腐敗菌的分離鑒定,國內(nèi)外報(bào)道較少且結(jié)論不一,仍需要繼續(xù)深入研究:Randazzo等[13]研究報(bào)道生菜原料表面存在大量的假單胞菌、腸桿菌和歐文氏菌,鮮切生菜的優(yōu)勢腐敗細(xì)菌是熒光假單胞桿菌、成團(tuán)泛菌和水生拉恩氏菌。Jacxsens等[14]從腐敗的鮮切生菜中分離鑒定得到成團(tuán)泛菌、水生拉恩氏菌和熒光假單胞菌均是革蘭氏陰性菌,但是沒有對(duì)原料表面的細(xì)菌作相關(guān)分析研究;Oliveira等[15]分析了西班牙18個(gè)農(nóng)場的新鮮生菜原料表面的細(xì)菌,主要是假單胞菌、腸桿菌和一些嗜冷細(xì)菌。Eni等[16]發(fā)現(xiàn)新鮮生菜表面存在大量的微球菌和克雷伯氏菌,初始細(xì)菌總數(shù)為7.23 CFU/g。采用分子生物學(xué)的方法進(jìn)行分析研究,對(duì)鮮切生菜中的優(yōu)勢腐敗細(xì)菌予以識(shí)別,這將為下一步進(jìn)行腐敗細(xì)菌的溯源分析提供依據(jù),從而進(jìn)行加工過程中的重點(diǎn)工藝及過程控制,為研究防腐保鮮技術(shù)奠定基礎(chǔ),從而延長鮮切生菜的貨架期。
新鮮生菜 購買于當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場,迅速運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后置于4℃冰箱備用。
營養(yǎng)肉湯:營養(yǎng)肉湯:蛋白胨10 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,蒸餾水1 000 mL,pH(7.2 ±0.2),供菌株活化用。
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基:蛋白胨10 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,瓊脂 15 g,蒸餾水 1000 mL,pH(7.0 ±0.2)。菌株編號(hào)以N1、N2……計(jì)。
MRS(乳酸菌瓊脂培養(yǎng)基):蛋白胨10g,酵母粉4 g,葡萄糖20 g,吐溫80 1.0 mL,K2HPO42 g,乙酸鈉5 g,檸檬酸三銨 2 g,MgSO40.2 g,牛肉粉 5 g,MnSO40.05 g,瓊脂 15 g,蒸餾水 1 000 mL,pH6.2 左右。菌株編號(hào)以M1、M2……計(jì)。
VRBDA(腸桿菌科瓊脂培養(yǎng)基):酵母粉10 g,蛋白胨 7 g,NaCl 5 g,葡萄糖 10 g,3 號(hào)膽鹽 1.5 g,結(jié)晶紫0.002 g,中性紅0.03 g,瓊脂15 g,蒸餾水1 000 mL,pH(7.3±0.2)。菌株編號(hào)以V1、V2……計(jì)。
PSA(假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基):蛋白胨16 g,酸水解酪蛋白 10 g,K2SO410 g,MgCl214 g,瓊脂 11 g,甘油10 mL,蒸餾水1 000 mL,pH(7.1±0.2)。菌株編號(hào)以P1、P2……計(jì)。
MSA(葡萄球菌瓊脂培養(yǎng)基):牛肉浸膏1 g,多價(jià)胨 10 g,D-甘露醇 10 g,NaCl 15 g,瓊脂 15 g,酚紅0.025 g,蒸餾水 1 000 mL,pH(7.4 ±0.2)。菌株編號(hào)以M1-1、M1-2……計(jì)。
上述培養(yǎng)基均在121℃滅菌15 min,供實(shí)驗(yàn)所用。
BT124S型電子天平,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;V-1200型可見分光光度計(jì),上海美譜達(dá)儀器有限公司;SYQ-DSX-280B型手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌鍋,上海申安醫(yī)療器械廠;BCD-216TXN型海爾冰箱,青島海爾股份有限公司;SW-CJ-1F型單人雙面凈化工作臺(tái),浙江蘇凈凈化設(shè)備有限公司;BPC-250F型生化培養(yǎng)箱,上海一恒科科學(xué)儀器有限公司;DNP-9162型電熱型恒溫鼓風(fēng)干燥箱,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;PTC-200型PCR儀,BIO-RAD公司;DY-A型電泳儀,上??颠_(dá)儀器廠;Gel Doc XR型凝膠成像儀,BIO-RAD公司;SORVALL型離心機(jī),美國科駿儀器有限公司。
1.4.1 鮮切生菜的制作工藝流程
原料→挑選、整理→沖洗(除去生菜表面的泥土等雜質(zhì))→人工切割(塊、絲、丁等)→清洗→瀝干→包裝→貯藏。
分裝50 g/袋,標(biāo)號(hào)1~10,平行3組,置于4℃貯藏。
1.4.2 感官變化與微生物分析
感官變化:判斷鮮切生菜的顏色、氣味與質(zhì)地,進(jìn)而評(píng)價(jià)鮮切生菜的腐敗程度,腐敗程度用無異味和無軟腐現(xiàn)象、略有腐臭味和軟腐現(xiàn)象、強(qiáng)烈的腐臭味和軟腐現(xiàn)象來衡量。緊密飽滿,色澤鮮亮,無褐變和菜斑。鮮切生菜呼吸和蒸騰作用均較強(qiáng),由于各種生化反應(yīng)速率較快,褐變和萎縮現(xiàn)象明顯,松散,成褐黃色,菜斑點(diǎn),外觀纖維感強(qiáng),達(dá)到感官拒絕點(diǎn)。
目前,鮮切生菜還沒有相應(yīng)的食用品評(píng)標(biāo)準(zhǔn),參照李會(huì)合等[17]的品評(píng)指標(biāo),采用系統(tǒng)評(píng)分法對(duì)樣品品質(zhì)的諸方面進(jìn)行鑒別,根據(jù)各自的經(jīng)驗(yàn)評(píng)分,對(duì)各因素在品質(zhì)評(píng)價(jià)中所起的作用給予不同的加權(quán)系數(shù),經(jīng)評(píng)定后使結(jié)果數(shù)量化,再經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,使結(jié)果比較客觀地反映樣品間的差異。鮮切生菜的品質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)有脆度、多汁度、色澤、氣味及質(zhì)地5項(xiàng),其中脆度、氣味的加權(quán)系數(shù)為0.2,多汁度和色澤的加權(quán)系數(shù)為0.25,質(zhì)地的加權(quán)系數(shù)為0.1,參考標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)指標(biāo)均為10分,通過數(shù)學(xué)處理制定量化標(biāo)準(zhǔn),5項(xiàng)指標(biāo)總分為20分定為合格,40分以上者為優(yōu)。
從食品專業(yè)老師和研究生中選出10人組成評(píng)委,分別對(duì)產(chǎn)品的脆度、多汁度、色澤、氣味及質(zhì)地5項(xiàng)進(jìn)行評(píng)定,進(jìn)而評(píng)價(jià)鮮切生菜的腐敗程度,感官評(píng)定指標(biāo)見表1。
在已經(jīng)滅菌20 min的超凈工作臺(tái)中,將剪刀用75%的酒精作表面消毒后,無菌操作從鮮切生菜的不同組織剪取10 g,放入90 mL的無菌生理鹽水的三角瓶中,充分振蕩,制成1∶10的菌懸液。
取1 mL上述稀釋的菌懸液,10倍梯度稀釋,加至9 mL的無菌生理鹽水中,選取合適的稀釋梯度,吸取0.1 mL的菌液,置于5種備用固體培養(yǎng)基平板中,涂布平板,重復(fù)3組,均在37℃下培養(yǎng)48 h,觀察并記錄結(jié)果。計(jì)數(shù)方法參照GB/T4789.2-2010[18]。
表1 鮮切生菜的感官評(píng)定指標(biāo)Table 1 Sensory indicators of fresh-cut lettuce during storage
1.4.3 腐敗菌的分離純化
從營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基中選取典型生長的單一菌落,平板劃線法反復(fù)分離純化,鏡檢,得到純菌株。把純菌株轉(zhuǎn)移接種至斜面培養(yǎng)基,作為鑒定用菌株。
1.5.1 形態(tài)學(xué)觀察
菌落形態(tài)觀察:觀察單菌落的大小、形狀、質(zhì)地、顏色、透明度、邊緣結(jié)構(gòu)、表面狀態(tài)等。
菌體形態(tài)觀察:挑取細(xì)菌18h培養(yǎng)物制成載片標(biāo)本,觀察細(xì)胞形態(tài)、排列方式等。
1.5.2 回接實(shí)驗(yàn)
新鮮生菜棄去外層受損葉片,用流動(dòng)自來水沖洗表面的泥土,用95%的酒精滅菌的小刀把生菜分割成約5 cm×1 cm(長×寬)的組織條,置于50 mg/L的ClO2溶液中殺菌2 min,無菌蒸餾水漂洗,撈出后于無菌超凈工作臺(tái)中自然晾干。
在37℃條件下活化菌株,搖床培養(yǎng)18~24 h,得到菌懸液。無菌操作使接種菌液的OD600nm約為0.2,取10 mL溶于990 mL的生理鹽水中,按照料液比1∶10,把處理的鮮切生菜組織條懸浮于其中15 s接種,使初始接種量為 104~105CFU/g[19]。常溫靜置15 min以去掉多余的水分,然后放置于4℃的冰箱中貯藏。
綜合感官指標(biāo),判斷感官拒絕點(diǎn),初步確定可能的優(yōu)勢腐敗菌。
1.5.3 生理生化鑒定
生理生化實(shí)驗(yàn)主要包括氧化酶實(shí)驗(yàn)、淀粉水解實(shí)驗(yàn)、明膠液化實(shí)驗(yàn)、糖類發(fā)酵實(shí)驗(yàn)等,實(shí)驗(yàn)方法參考《伯杰細(xì)菌簡單手冊(cè)》[20]。
1.5.4 分子生物學(xué)鑒定
菌株總DNA的提取:將菌株在培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)后,收集菌體。按照TIANGEN細(xì)菌DNA提取試劑盒說明書進(jìn)行總DNA的提取。PCR擴(kuò)增:16S rRNA的擴(kuò)增引物采用細(xì)菌通用引物,27f:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3';1492r:5'-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3',由北京六合華大基因科技股份有限公司合成。PCR反應(yīng)體系(25 μL),其中:上下游引物各 1 μL(10 pmol/μL),模板 DNA(100 ng/μL)1 μL,dNTP MIX 12.5 μL,超純水9.5 μL。PCR 擴(kuò)增程序:95℃預(yù)變性5 min;94℃變性45 s,56℃退火45 s,72℃延伸1 min 30 s,循環(huán)30次;72℃延伸10 min,4℃保藏。PCR產(chǎn)物檢測及測序:PCR產(chǎn)物檢測后,片段長度約為1 500 bp后的陽性產(chǎn)物直接送北京華大技術(shù)有限公司進(jìn)行測序。瓊脂糖凝膠電泳,采用凝膠成像系統(tǒng)拍照保存。
分別對(duì)新鮮狀態(tài)和4℃貯藏1~10 d的試驗(yàn)樣品進(jìn)行感官評(píng)定和微生物計(jì)數(shù),結(jié)果如圖1和表2所示。
圖1 鮮切生菜在不同貯藏條件下1~10 d的感官評(píng)定分值和微生物計(jì)數(shù)Fig.1 Sensory evaluation and microbial counts at different temperature about 1~10 d of the fresh-cut lettuce sample
新鮮狀態(tài)的樣品作為對(duì)照,感官指標(biāo)在45分以上,微生物計(jì)數(shù)結(jié)果在4.27 CFU以下,均處于較好的水平,達(dá)到優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn)。4℃貯藏條件下的感官評(píng)定分值和微生物計(jì)數(shù)結(jié)果表明:隨著貯藏時(shí)間的延長,兩者呈負(fù)相關(guān);4℃貯藏條件下的試驗(yàn)樣品在第9天之后感官評(píng)定分值在20分以下,即不合格,菌落總數(shù)在7 CFU/g左右。由表2可得:新鮮狀態(tài)下的感官分值與4℃貯藏條件下的感官分值標(biāo)準(zhǔn)偏差S分別為0.824、9.618,新鮮狀態(tài)下的微生物數(shù)量與4℃貯藏條件下的微生物數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)偏差 S分別為0.009、1.004,很明顯看出新鮮狀態(tài)下的數(shù)據(jù)離散程度遠(yuǎn)低于4℃貯藏條件。
表2 鮮切生菜樣品部分感官評(píng)定和微生物計(jì)數(shù)結(jié)果匯總Table 2 Sensory evaluation and microbial count results summary of fresh-cut lettuce sample
將鮮切生菜感官評(píng)定部分指標(biāo)與微生物計(jì)數(shù)指標(biāo)作為獨(dú)立因素進(jìn)行相關(guān)性分析,感官評(píng)定部分指標(biāo)與微生物計(jì)數(shù)指標(biāo)相關(guān)性分析如圖2所示。感官評(píng)定指標(biāo)與微生物計(jì)數(shù)測定結(jié)果的相關(guān)性分析呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān),相關(guān)性系數(shù)R為0.918;試驗(yàn)樣品感官評(píng)定分值越高,菌落總數(shù)越處于較低的水平,反之,則處于較高水平,感官評(píng)定不合格,試驗(yàn)樣品腐敗嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)確定20分為產(chǎn)品不能接收的感官分值,根據(jù)回歸方程可以推出:4℃貯藏條件下,菌落總數(shù)為7.663 CFU/g,此時(shí)達(dá)到感官不可接受。
圖2 鮮切生菜感官評(píng)定指標(biāo)與微生物計(jì)數(shù)測定結(jié)果的相關(guān)性分析Fig.2 Correlation analysis between sensory evaluation and microbial count results of fresh-cut lettuce sample
2.2.1 菌株的形態(tài)學(xué)觀察
新鮮生菜初始細(xì)菌總數(shù)為4.27 CFU/g,取樣涂布平板,待培養(yǎng)48 h后從5種不同的固體培養(yǎng)基表面初步挑取了18株,分離純化后結(jié)合菌落特征和個(gè)體形態(tài),篩選了5株為 P1、M1-1、M1-4、M3和 V4。以新鮮生菜為原料,實(shí)驗(yàn)室自制鮮切生菜,分裝后置于4℃貯藏,第10天時(shí)細(xì)菌總數(shù)為7.224 CFU/g。取樣涂布平板,待培養(yǎng)48h后從5種不同的固體培養(yǎng)基表面初步挑取了15株菌,分離純化后進(jìn)行回接實(shí)驗(yàn),初始接種量為4.24 CFU/g,置于4℃下貯藏,每天觀察并記錄結(jié)果,結(jié)合菌落特征和個(gè)體形態(tài),篩選出7株腐敗細(xì)菌為 P2、M1-1、M1-2、M1-3、V2、V3 和 N1。菌株的形態(tài)學(xué)特征如表3。
表3 菌株的形態(tài)學(xué)特征Table 3 Morphological characteristics of strains
2.2.2 菌株的生理生化實(shí)驗(yàn) 菌株的部分生理生化實(shí)驗(yàn)如表4。
表4 菌株的部分生理生化實(shí)驗(yàn)Table 4 A part of physiological and biochemical experiments of strains
2.2.3 分子生物學(xué)鑒定
將篩選得到的12個(gè)菌株以總DNA為模板,PCR擴(kuò)增后經(jīng)電泳檢測,均得到了1 500 bp左右的條帶,如圖3所示。圖中1為2 000 bp的Marker,鮮切生菜優(yōu)勢腐敗細(xì)菌2~8,對(duì)應(yīng)菌株編號(hào)為:P2、M1-1、M1-2、M1-3、V2、V3 和 N1,生菜原料表面細(xì)菌 9 ~13,對(duì)應(yīng)的菌株編號(hào)為:P1、M1-1、M1-4、M3 和 V4。
圖3 菌株的PCR產(chǎn)物電泳圖Fig.3 Electrophoresis profiles of PCR produces of strains
將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至北京華大技術(shù)有限公司進(jìn)行測序,測得它們的16S rRNA序列(0M1-1與4M1-1的基因序列完全相同,是同一種菌,文中全部以0M1-1表示)并與GenBank數(shù)據(jù)庫已有的序列比對(duì),選取同源性在99%以上的模式菌株序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,如圖4所示,菌株編號(hào)前面的0和4分別表示生菜原料和貯藏在4℃下的鮮切生菜。4N1是泛菌屬(Pantoea)的一個(gè)亞種,同源性為57%,鑒定結(jié)果為菠蘿泛菌(Pantoea ananatis);0M1-1與 Exiguobacterium sp.F30的同源性為59%,可知0M1-1是微小桿菌屬(Exiguobacterium)的一個(gè)亞種,0P1鑒定結(jié)果為乙酰微小桿菌(Exiguobacterium acetylicum),與0M1-1和Exiguobacterium sp.F30的同源性為55%,同為微小桿菌屬(Exiguobacterium);其他編號(hào)菌株均與模式菌株同源性在100%,鑒定結(jié)果可靠。另外,0V4和4V2親緣關(guān)系最近,由近到遠(yuǎn)為 4V3、0M1-4、4N1、4P2、4M1-2和4M1-3,4V3和4N1親緣關(guān)系較近,它們均與0M1-1的親緣關(guān)系最遠(yuǎn),其次為0P1和0M3。
圖4 生菜表面細(xì)菌和貯藏在4℃的鮮切生菜優(yōu)勢腐敗細(xì)菌用鄰接法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Neighbor-joining phylogenetic tree showing the relationship between sequences of bacteria on the surface of lettuce and dominant spoilage bacteria of fresh-cut lettuce storage at 4℃
用節(jié)點(diǎn)和樹枝來表示菌株不同種群之間的親緣關(guān)系,分支離根部越遠(yuǎn),說明親緣關(guān)系越遠(yuǎn),且越是近種,做UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹,如圖5所示。4V3和4N1親緣關(guān)系最近,且與0V4和4P2比較近,0P1和0M1-1親緣關(guān)系最近,均與0M1-4和4V2親緣關(guān)系最遠(yuǎn),其次為0M3。
(1)鮮切卷心菜中貯藏過程中感官指標(biāo)及微生物計(jì)數(shù)測定的相關(guān)性分析結(jié)果表明:感官指標(biāo)在45分以上,微生物計(jì)數(shù)結(jié)果在4.24CFU以下,均處于較好的水平,達(dá)到優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn);隨著貯藏時(shí)間的延長,兩者呈顯著負(fù)相關(guān),感官評(píng)定分值在20分以下為不及格,即產(chǎn)品腐敗,此時(shí)菌落總數(shù)達(dá)到7.224 CFU。
圖5 生菜表面細(xì)菌和貯藏在4℃的鮮切生菜優(yōu)勢腐敗細(xì)菌的UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.5 UPGMA dendrogram generated from of bacteria on the surface of lettuce and dominant spoilage bacteria of fresh-cut lettuce storage at 4℃
(2)從生菜原料和鮮切生菜中分別得到5個(gè)和7個(gè)菌株,通過生理生化特性、形態(tài)學(xué)觀察等傳統(tǒng)檢測方法結(jié)合16S rRNA序列分析,結(jié)果表明:生菜原料中M1-1是微小桿菌的某一種(Exiguobacterium sp.M1-1)、P1是乙酰微小桿菌(Exiguobacterium acetylicum),V4是腸埃希氏菌(E.coli)、M1-4阿斯布腸桿菌(Enterobacter asburiae),M3枯草芽孢桿菌(Bacillus tequilensis)。
(3)在4℃下的鮮切生菜的優(yōu)勢腐敗細(xì)菌為M1-1微小桿菌屬的某一種(Exiguobacterium sp.M1-1),M1-2約氏不動(dòng)桿菌(Acinetobacter johnsonii)、P2不動(dòng)桿菌屬的某一種(Acinetobacter sp.P2),M1-3單胞菌的某一種(Stenotrophomonas sp.M1-3),N1菠蘿泛菌(Pantoea ananatis)、V3泛菌屬的某一種(Pantoea sp.V3),V2腸桿菌屬的某一種(Enterobacter sp.V2)。
(4)生菜原料中的M1-1與鮮切生菜中的腐敗菌M1-1是同一種,說明該菌是鮮切生菜特有的優(yōu)勢腐敗細(xì)菌,貯藏鮮切生菜中枯草芽孢桿菌沒有檢測到,腸桿菌與生菜原料中為不同種,另外,還鑒定得到不動(dòng)桿菌、單胞菌和泛菌。已有大量研究表明:假單胞菌是引起鮮切生菜腐敗的特定腐敗菌,但是生菜原料表面細(xì)菌并沒有發(fā)現(xiàn)假單胞菌、微球菌、克雷伯氏菌和歐文氏菌,腐敗細(xì)菌也未檢測到水生拉恩氏菌和熒光假單胞菌,可能是由于貯存條件及生產(chǎn)環(huán)境的不同導(dǎo)致鮮切生菜中腐敗細(xì)菌有所不同,對(duì)于鮮切生菜中腐敗細(xì)菌的來源,目前還沒有一致的定論。除微小桿菌外,初步推斷出其他優(yōu)勢腐敗細(xì)菌來源于加工操作,因此下一步將從加工操作過程中取樣驗(yàn)證這些腐敗細(xì)菌的來源,以期為提高鮮切生菜生產(chǎn)安全性提供指導(dǎo)。
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