劉春樣，陳劼，李惠，王劍蓉

南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院江蘇省中醫(yī)院病理科，江蘇南京 210029

胃腸間質(zhì)瘤的免疫組化及基因突變分析

劉春樣，陳劼，李惠，王劍蓉

南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院江蘇省中醫(yī)院病理科，江蘇南京 210029

目的探討胃腸間質(zhì)瘤的免疫表型及c-kit和血小板源性生長(zhǎng)受體α（PDGFRA）基因突變狀態(tài)。方法應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)110例GIST中Dog-1、CD117、CD34、SMA和S100的表達(dá)情況，應(yīng)用直接測(cè)序法檢測(cè)8例 GIST中c-kit及PDGFRA基因的突變狀態(tài)。結(jié)果110例GIST中Dog-1、CD117、CD34、SMA、S100的陽(yáng)性率分別為92.7%、93.6%、79.1%、44.5%、8.2%。8例GIST中c-kit突變率75%，PDGFRA突變率100%。結(jié)論免疫組化可區(qū)分大部分GIST病例，c-kit及PDGFRA突變檢測(cè)對(duì)于Dog-1、CD117陰性病例有重要的鑒別診斷價(jià)值，并對(duì)靶向藥物的應(yīng)用有重要意義。

胃腸間質(zhì)瘤；免疫組化；c-kit；血小板源性生長(zhǎng)受體α基因

胃腸間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors，GISTs）是消化道最常見(jiàn)的間葉源性腫瘤，組織學(xué)上由梭形細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞、偶或多形性細(xì)胞排列成束狀或彌漫狀，由突變的c-kit或PDGFRA基因驅(qū)動(dòng)[1-2]，可見(jiàn)于消化道的任何位置。過(guò)去，多數(shù)GISTs被診斷為平滑肌或神經(jīng)源性腫瘤,1983年Mazur等首次提出GISTs的概念[3]。目前，GISTs的診斷依賴于結(jié)合組織形態(tài)學(xué)、CD117和DOG1免疫組化檢測(cè)以及c-kit和PDGFRA基因突變的檢測(cè)。該研究回顧性分析 2013年1月—2015年1月收集的南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院的110例GISTs的臨床病理特點(diǎn)，并運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)Dog-1、CD117、CD34、SMA、S100的表達(dá)，其中8例包含c-kit、PDGFRA基因突變檢測(cè)結(jié)果，探討免疫組化結(jié)合基因檢測(cè)對(duì)GISTs的診療價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院自2013年1月—2015年1月經(jīng)手術(shù)或內(nèi)鏡下切除的資料完整、診斷明確的原發(fā)性GISTs患者組織標(biāo)本110例。

1.2 免疫組化檢測(cè)

所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片。免疫組化采用SP兩步法，試劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。參照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，常規(guī)設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照。結(jié)果判定：陽(yáng)性表達(dá)部位定位準(zhǔn)確，Dog-1、CD117、CD34陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均≥10%為陽(yáng)性。

1.3 基因突變檢測(cè)

按照試劑盒（OMEGA，USA）說(shuō)明提取石蠟組織中的基因組DNA，運(yùn)用合適的引物PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增c-kit基因外顯子9、11、13、17和PDGFRA基因外顯子12、18。PCR產(chǎn)物經(jīng)3%瓊脂糖凝膠電泳確定后，用ABI 3500測(cè)序儀行序列分析。應(yīng)用SeqScape v2.7軟件判斷基因突變情況。

2 結(jié)果

2.1 臨床及病理特征

110例患者中，男56例，女54例。年齡22～89歲，中位年齡59歲。腫瘤發(fā)生部位：胃74例（67.3%），小腸21例（19.1%），結(jié)直腸6例（5.5%），食管6例（5.5%），胃腸外（腹膜后、盆腔）3例（2.7%）。根據(jù)文獻(xiàn)[4]將腫瘤行危險(xiǎn)度分級(jí)：極低組47例（42.7%），低組25例（22.7%），中等組10例（9.1%），高組28例（25.5%）。腫塊最大直徑范圍0.3～20 cm，平均直徑4.6 cm。110例患者中梭形細(xì)胞型92例（83.6%），上皮樣型7例（6.4%），混合細(xì)胞型11例（10%）。

2.2 免疫組化結(jié)果

110例中CD117、Dog-1、CD34、SMA、S100的陽(yáng)性例數(shù)分別為 102（92.7%）、103（93.6%）、87（79.1%）、49（44.5%）、9（8.2%）（表1）。CD117、Dog-1、CD34大部分為彌漫性表達(dá)。8例CD117陰性病例中，7例Dog-1陽(yáng)性。SMA、S100大部分為局部或局灶陽(yáng)性。

2.3 基因檢測(cè)結(jié)果

8例GIST（中等風(fēng)險(xiǎn)1例，高風(fēng)險(xiǎn)7例；胃4例，小腸3例，直腸1例）行c-kit、PDGFRA基因突變檢測(cè)，總體突變率100%（8/8）。其中c-kit突變率75%，PDGFRA突變率100%（表2）。c-kit突變結(jié)果提示4例應(yīng)用伊馬替尼可能有積極療效，2例可能產(chǎn)生耐藥或敏感性降低，2例療效不明確。PDGFRA檢測(cè)結(jié)果對(duì)伊馬替尼療效預(yù)測(cè)尚需要進(jìn)一步臨床觀察。8例GIST中，6例CD117陽(yáng)性。其中一例CD117、Dog-1雙陰性，c-kit第9外顯子插入突變。

表2 基因突變情況[n（%）]

表1 GISTs的免疫組化表達(dá)（%）

3 討論

GISTs是消化道最常見(jiàn)的間葉源性腫瘤，在中國(guó)，估計(jì)年發(fā)病率約為10-20/100萬(wàn)，其中10%～30%為惡性。本研究中，中高等風(fēng)險(xiǎn)組占34.6%。GIST可發(fā)生于消化道任何部位，部分患者可發(fā)生于消化道外[5]。該研究中，胃部發(fā)生率最高（67.3%），小腸其次（19.1%）。

GISTs具有非定向分化特征，因不同瘤體的組織分化程度存在差異，故其表現(xiàn)出的形態(tài)學(xué)以及組織學(xué)特征也不同。該研究中梭形細(xì)胞型占83.6%，上皮樣型占6.4%，混合細(xì)胞型占10%。在組織學(xué)上，GISTs與其他間葉源性腫瘤相似，難以與平滑肌腫瘤、神經(jīng)纖維瘤等鑒別。免疫組化診斷以往依賴CD117、CD34的表達(dá)。近年來(lái)，隨著研究的進(jìn)展，DOG1已成為GISTs診斷的重要分子標(biāo)記物[6]。在該研究的110個(gè)病例中，CD117、Dog-1、CD34的陽(yáng)性率分別為92.7%、93.6%、79.1%，在8例CD117陰性的病例中，7例Dog-1陽(yáng)性。CD117、Dog-1、CD34三者聯(lián)合應(yīng)用可區(qū)分出絕大部分的GISTs。

國(guó)內(nèi)學(xué)者研究[7-8]顯示，伊馬替尼輔助治療在中高危GIST患者中獲益。因此，中高風(fēng)險(xiǎn)病人應(yīng)常規(guī)行c-kit、PDGFRA基因檢測(cè)以篩選是否適用靶向治療。該組38例中高風(fēng)險(xiǎn)病例中有21.1%行基因檢測(cè)，c-kit突變率 75%，PDGFRA突變率100%。一例CD117、Dog-1雙陰性GIST存在c-kit第9外顯子突變。C-kit突變結(jié)果提示4例應(yīng)用靶向藥物可能有積極療效，1例可能產(chǎn)生耐藥，1例敏感性降低，2例野生型療效不明確。PDGFRA突變對(duì)伊馬替尼療效預(yù)測(cè)尚需要臨床進(jìn)一步觀察積累。

GISTs的發(fā)病機(jī)制、生物學(xué)行為復(fù)雜，臨床診療存在難點(diǎn)。常規(guī)染色聯(lián)合免疫組化可提高GISTs的診斷準(zhǔn)確率，在免疫組化無(wú)法確診的情況下，行c-kit、PDGFRA基因檢測(cè)有助于GISTs的診斷，并為靶向治療提供參考。

[1]Hirota S,IsozakiK，Moriyama Y，etal.Gain-of-functionmutationsof c-kit in human gastrointestinalstromal tumors[J].Science，1998，279(5350):577-80.

[2]Heinrich MC，Corless CL，Amette Duensing，et al.PDGFRA activatingmut ationsin gastrointestinalstromal tumors[J].Science，2003（299）:708-710.

[3]Mazur MT,Brent Clark H.Gastric stromal tumors：Reappraisal of hist ogenesis[J].Am JSurg Pathol，1983，7(6):507-520.

[4]CSCO胃腸間質(zhì)瘤專家委員會(huì).中國(guó)胃腸間質(zhì)瘤診斷治療專家共識(shí)：2011年版[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2011,16(9):836-844.

[5]陳吉添．胃腸道間質(zhì)瘤72例臨床病理及免疫組化分析[J].廣西醫(yī)學(xué)，2012，34(12):1687-1689．

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Immunohistochem istry Features and M utation Status of GISTs

LIU Chun-yang，CHEN Jie，LIHui，WANG Jian-rong
Department of pathology,Affiliated Hospital of Nanjing university of TCM,Jiangsu Province Hospital of TCM,Nanjing,Jiangsu Province,210029 China

ObjectiveTo investigate the immunohistochem istry (IHC)features and genemutation status of c-kit and PDGFRA of GIST.M ethodsThe expression of DOG1,CD117,CD34,SMA and S-100 was detected by immunohistochemicalmethod in 110 cases of GIST.Genemutation status of c-kit and PDGFRA were detected by direct sequencing in 8 cases of GIST.Resu ltsIn the patients of 110,the positive rates of DOG1,CD117,CD34,SMA and S-100 were 92.7%,93.6%,9.1%,44.5%and 8.2%respectively.Gene mutation rates of c-kit and PDGFRA was 75%and 100%respectively in 8 cases.ConclusionIHC can distinguish most GISTs cases,mutation test of c-kit and PDGFRA is important for differential diagnosis in DOG1 and CD117 negative patients,and have significance to guide the application of targeted drug.

Gastrointestinal stromal tumors;Immunohistochem istry;C-kit;PDGFRA

R735

A

1674-0742（2015）07（b）－0008-02

2015-04-17）

劉春樣（1985.10-），女，江蘇宿遷人，碩士，住院醫(yī)師，研究方向：腫瘤病理及分子病理。

王劍蓉（1974.6-），女，江蘇高郵人，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：消化道病理及分子病理。