陳 琛， 徐華影

（天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院，天津300211）

[成分分析]

玉米須抗糖尿病活性成分的分離及其作用機制研究

陳 琛， 徐華影

（天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院，天津300211）

目的研究玉米須抗糖尿病的活性成分。方法65%乙醇玉米須提取物分別經(jīng)硅膠、凝膠及制備液相色譜進行分離，并根據(jù)理化性質(zhì)和波譜技術來鑒定所得化合物的結構。然后，對以上化合物進行3T3-L1成熟脂肪細胞葡萄糖消耗量測試，用以篩選活性化合物，Western blot法檢測AMPK蛋白，油紅O染色法檢測活性化合物對前脂肪細胞3T3-L1分化的影響，RT-PCR法檢測PPARγ、c/EBPα的相對表達量。結果從玉米須中分離鑒定了7個化合物，分別為柯伊利素-6-C-β-波伊文糖-7-O-β-葡萄糖苷 （1）、柯伊利素 （2）、香草酸 （3）、木犀草素 （4）、胡蘿卜苷 （5）、棕櫚酸 （6）、土槿戊酸 （7）。其中，化合物1能有效提高3T3-L1成熟脂肪細胞的葡萄糖消耗量和其AMPK的磷酸化水平，并且該作用能夠被AMPK特異性抑制劑化合物C所阻斷。另外，它還能顯著抑制前脂肪細胞3T3-L1分化及PPARγ、c/EBPα相對基因表達。結論化合物1顯示出較好的抗糖尿病活性，而且化合物4為首次從該植物中分離得到。

玉米須；柯伊利素-6-C-β-波伊文糖-7-O-β-葡萄糖苷；木犀草素；葡萄糖消耗；脂肪細胞；分化；抗糖尿病活性

玉米須是禾本科玉蜀黍植物玉米Zea mays L.的花柱和柱頭，為我國傳統(tǒng)中藥，分布廣泛，資源豐富，具有利尿、泄熱、平肝、利膽等功效［1］，目前在臨床上被廣泛用于治療高血壓、哮喘、鼻炎、肝炎及糖尿病等疾病。現(xiàn)代藥理研究表明，它有著降血壓、增強免疫功能、抗癌、利尿、抑菌及降血糖等作用［2-3］。

由于在我國大江南北均廣泛種植栽培玉米，故玉米須的資源十分豐富。目前，國內(nèi)外學者對其提取物的藥理活性報道較多，但關于具體化合物的生物活性研究較少。因此，為了進一步開發(fā)利用玉米須這一藥用植物資源，本實驗對其進行了系統(tǒng)的提取分離，運用多種色譜方法從玉米須乙醇浸膏中分離鑒定了7個化合物，同時對所得化合物進行抗糖尿病活性篩選。

1 儀器與材料

37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱 （力康生物醫(yī)療科技控股有限公司）；超凈工作臺 （蘇州凈化設備有限公司）；全自動酶標板分析儀（美國Bio-Rad公司）；ABI 7500 RT-PCR儀（美國ABI公司）；Bruker AV 400核磁共振儀，內(nèi)標為TMS（德國Bruker公司）；UV-3310型紫外-可見分光光度計（日本株式會社日立制作所）；倒置顯微鏡 （日本Olympus公司）；PU-2089、RI-2031、UV-2075 JASCO半制備高效液相色譜儀（Jasco日本分光株式會社）；YMC-Pack ODS-A SH-343-5色譜柱（20 mm ×250 mm，5μm，日本YMC公司）；H200142、H200143 Shodex A sahipak GS-20G色譜柱（20 mm×500 mm，5μm，日本Shodex公司）。

葡萄糖試劑盒 （北京中生北控生物技術股份有限公司）；熒光實時定量PCR試劑盒 （瑞士羅氏公司）；RNA提取試劑盒 （北京百泰克生物技術有限公司）；cDNA合成試劑盒（日本Takara公司）；胰島素（美國Sigma公司）；DMEM培養(yǎng)液（含或不含酚紅）、胎牛血清（FBS）、PBS（美國Gibco公司）；25%胰蛋白酶（含EDTA，以色列Bioind公司）；3T3-L1細胞 （中國科學院上海細胞庫）；AMPK抗體 （美國CST公司）；引物合成標記用試劑 （北京奧科生物技術有限責任公司）；柱色譜、薄層色譜用硅膠 （青島海洋化工有限公司）。

所用試劑均為分析純 （國藥集團化學試劑有限公司）；氘代試劑（美國Sigma-Aldrich公司）。

玉米須于2012年4月采自河北省唐山市，由蘭州大學生命科學學院及甘肅省食品藥品檢驗所共同鑒定為玉米Zea mays L.的花柱和柱頭，標本存放于天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院藥劑科中藥房 （標本號D20120412）。

2 方法與結果

2.1 提取分離 取自然陰干粉碎的玉米須10 kg，65%的乙醇加熱回流提取3次，每次6 h，提取液減壓濃縮，得到浸膏330 g，加水混懸后依次用水飽和的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚提取物142 g、乙酸乙酯提取物125 g、正丁醇提取物68 g。玉米須石油醚及乙酸乙酯提取物均經(jīng)硅膠柱層析 （400 g，100～200目）分離，依次用石油醚-乙酸乙酯 （8∶1、6∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、純乙酸乙酯）、乙酸乙酯-甲醇（95∶5、90∶10、80∶20）和純甲醇梯度洗脫，等量接收洗脫液，TLC檢測合并相似組分，分別得到10個 （A～J）和12個組分 （K～V）。

組分B經(jīng)Toyopeal HW-40凝膠柱層析分離，二氯甲烷-甲醇（2∶1）洗脫，得到BFr.1～BFr.5。BFr.2（859.6 mg）經(jīng)制備高效液相色譜分離純化，得到化合物5（16.5 mg）和化合物3（32.6 mg）。組分E經(jīng)Toyopeal HW-40凝膠柱層析分離純化，二氯甲烷-甲醇 （2∶1）洗脫，得到EFr.1～EFr.3。EFr.3（952.3 mg）經(jīng)制備高效液相色譜及薄層色譜分離純化，得到化合物7（14.5 mg）。組分L經(jīng)Toyopeal HW-40凝膠柱層析分離純化，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到LFr.1～LFr.4。LFr.2（621.3mg）經(jīng)制備高效液相色譜分離純化，得到化合物1（22.1 mg）和化合物4（26.8 mg）。組分S經(jīng)Toyopeal HW-40凝膠柱層析分離純化，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到SFr.1～SFr.4。SFr.3（523.1 mg）經(jīng)制備高效液相色譜及重結晶分離純化，得到化合物2（14.2 mg）和化合物6（21.1 mg）。

2.2 3T3-L1細胞培養(yǎng)及分化方法 3T3-L1前脂肪細胞常規(guī)培養(yǎng)，條件為37℃，5%CO2，置于含10%FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基中。待細胞長到70%～80%時，接種于6孔板上繼續(xù)培養(yǎng)，待其長滿并達到相互接觸抑制2 d后 （計為第0天），更換培養(yǎng)基（含10%FBS、0.5 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、1μmol/L地塞米松、10μg/mL胰島素的DMEM高糖培養(yǎng)基），3 d后換用只含10 μg/mL胰島素、10%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)3 d，然后以10%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，隔天換液。誘導分化10～12 d的3T3-L1細胞至85%以上，并呈脂肪細胞表型時，可用于實驗。測定葡萄糖消耗時，換上無血清的培養(yǎng)基，并加入待測樣品，37℃下孵育24 h后，葡萄糖臨床試劑盒檢測培養(yǎng)基的葡萄糖量。實驗時分別設置空白組、化合物處理組、空白對照組 （不鋪細胞的空白孔），計算24 h后各組細胞的葡萄糖消耗量。測定的數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行分析，并以x±s表示，組間差異的顯著性采用t檢驗方法。

2.3 AMPK磷酸化水平的檢測 本實驗采用免疫印跡法（Western blot法），方法為細胞加裂解液裂解后，取上清液，加入5X蛋白上樣緩沖液，95℃下沸煮5 min，10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠中電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%的脫脂牛奶封閉1 h，洗膜后分別加入AMPK和β-actin的抗體，按1∶1 000比例稀釋，4℃下過夜。再次洗膜后，加入第二抗體進行反應，室溫孵育1 h，洗膜后ECL顯色液熒光顯色和曝光，采用圖像分析系統(tǒng)確定X線光膠片上蛋白條帶的相對灰度。

2.4 油紅O法觀察3T3-L1前脂肪細胞的分化 油紅O是脂肪特異性染色劑，能與脂肪結合，使細胞中的脂滴著色，常用于染色分化成熟的脂肪細胞，以觀察3T3-L1前脂肪細胞的分化情況。

細胞分化過程中全程干預待測化合物，設置空白組和不同濃度化合物的處理組，取分化成熟的3T3-L1脂肪細胞，棄上清液，pH為7.4的PBS洗滌3次，2.7%的多聚甲醛固定液固定細胞1 h，然后PBS再洗滌3次，室溫下晾干細胞，加入油紅O染液，室溫下密閉染色15 min后棄除染液，60%異丙醇洗滌細胞2次，除去多余的染料，去離子水再震蕩洗滌3次，光鏡下觀察細胞形態(tài)并拍照，然后加入2 mL異丙醇于500 nm下測定吸光度。

2.5 RT-PCR檢測PPARγ、c/EBPα的mRNA表達

前脂肪細胞3T3-L分化過程中全程處理藥物，分化成熟后的細胞加入Trizol試劑裂解，按高純總RNA快速提取試劑盒說明來提取總RNA，核酸蛋白分析儀檢測其濃度，按照cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明來合成cDNA。PPARγ正向引物5′-GACCACTCGCATTCCTTT-3′，反向引物5′-CCACAGACTCGGCACTCA-3′；c/EBPα正向引物5′-GACGAGGACGAGGCGAAGCA-3′，反向引物5′-TCCAGCGACCCGAAACCA-3′；β-actin引物序列正向引物5′-CTAGAAGCATTTGCGGTGGA-3′，反向引物5′-GAAATCGTGCGTGACATTAAG-3′。反應條件為95℃下60 s（預變性），95℃下15 s（變性），60℃下1 h（退火和延伸），循環(huán)40次。每次延伸步驟結束后，SYBR Green與雙鏈DNA結合，發(fā)出熒光，通過檢測反應體系中SYBR Green的熒光強度來檢測PCR的產(chǎn)物擴增情況。本實驗以β-actin基因表達量為內(nèi)參，用于校正目的基因表達量，ABI 7500定量儀自帶軟件完成數(shù)據(jù)收集，并自動計算出所有樣本的Ct，以管家基因β-actin為內(nèi)參，用樣品待測基因的Ct值減去此樣品內(nèi)參的Ct值得到ΔCt，利用函數(shù)1/power（2，ΔCt）計算相對表達量，每組實驗設3個復孔，并至少重復3次。

2.6 結構鑒定

化合物1：黃色無定形粉末，分子式 C28H32O14，mp 196～198℃，ESI-MS m/z 593［M+ H］+。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：7.57（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′），7.56（1H，s，H-2′），7.45（1H，s，H-8），7.20（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），6.99（1H，s，H-3），6.39（1H，d，J=12.0 Hz，H-1″），5.52（1H，d，J=7.5 Hz，H-1?），3.85（3H，s，3′-OCH3），1.54（3H，d，J=6.5 Hz，H-6″）。13CNMR（C5D5N，120 MHz）δ：165.1（C-2），105.8（C-3），184.8（C-4），160.4（C-5），115.6（C-6），165.3（C-7），95.4（C-8），158.4（C-9），107.9（C-10），123.0（C-1′），111.3（C-2′），149.7（C-3′），153.0（C-4′），117.9（C-5′），121.5（C-6′），67.8（C-1″），32.7（C-2″），70.8（C-3″），72.7（C-4″），72.8（C-5″），18.9（C-6″），104.9（C-1?），76.7（C-2?），78.8（C-3?），72.9（C-4?），80.5（C-5?），63.5（C-6?），57.4（3′-OCH3）。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻 ［4］報道基本一致，因此鑒定化合物1為柯伊利素-6-C-β-波伊文糖-7-O-β-葡萄糖苷。

化合物2：黃色粉末，分子式C16H12O6，mp 281℃，ESI-MS m/z 301［M-H］-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：12.78（1H，brs，5-OH），6.87（1H，s，H-3），6.55（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），6.22（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），7.65（2H，m，H-2′，6′），6.94（1H，d，J=9.0 Hz，H-5′），3.89（3H，s，3′-OCH3）。13C-NMR（DMSO-d6，125MHz）δ：165.5（C-2），103.8（C-3），184.1（C-4），159.4（C-5），100.1（C-6），165.0（C-7），94.4（C-8），159.4（C-9），106.9（C-10），122.9（C-1′），111.9（C-2′），150.7（C-3′），149.1（C-4′），117.8（C-5′），120.5（C-6′），56.2（3′-OCH3）。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻 ［5］報道基本一致，因此鑒定化合物2為柯伊利素。

化合物3：黃色粉末，分子式 C8H8O4，mp 248～251℃，ESI-MS m/z 167［M-H］-。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz）δ：12.55（1H，s，-COOH），9.69（1H，s，4-OH），3.81（3H，s，3-OCH3），6.88（1H，d，J=6.3 Hz，H-5），7.69（1H，dd，J=6.3，2.5 Hz，H-6），7.53（1H，d，J=2.0 Hz，H-2）。13C-NMR（DMSO-d6，75 MHz）δ：167.1（-COOH），56.1（3-OCH3），122.1（C-1），112.0（C-2），148.3（C-3），151.0（C-4），114.5（C-5），123.1（C-6）。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻 ［6］報道基本一致，因此鑒定化合物3為香草酸。

化合物4：黃色粉末，分子式C15H10O6，mp＞300℃，ESI-MS m/z 285［M-H］-。1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：6.76（1H，s，H-3），6.29（1H，s，H-6），6.55（1H，s，H-8），7.45（1H，brs，H-2′），6.95（1H，d，J=8.3 Hz，H-5′），7.50（1H，dd，J=8.3，2.1 Hz，H-6′）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：165.4（C-2），104.2（C-3），183.5（C-4），162.9（C-5），100.1（C-6），165.7（C-7），95.3（C-8），157.9（C-9），104.6（C-10），121.9（C-1′），114.0（C-2′），147.2（C-3′），150.9（C-4′），117.5（C-5′），119.9（C-6′）。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻 ［7］報道基本一致，因此鑒定化合物4為木犀草素。

化合物5：白色無定形粉末，分子式C35H60O6，mp 296～298℃，ESI-MS m/z 575［MH］-。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：5.36（1H，brs，H-6），5.05（1H，d，J=7.4 Hz，H-1′），0.96（3H，d，J=5.4 Hz，H-21），0.92（3H，s，H-19），0.88（6H，d，J=6.6 Hz，H-26，27），0.65（3H，s，H-18）。13C-NMR（C5D5N，125MHz）δ：37.7（C-1），28.2（C-2），78.2（C-3），39.6（C-4），140.2（C-5），120.2（C-6），32.6（C-7），32.1（C-8），50.5（C-9），37.2（C-10），21.5（C-11），40.6（C-12），42.8（C-13），56.1（C-14），34.5（C-15），26.4（C-16），56.4（C-17），12.2（C-18），20.3（C-19），36.4（C-20），19.1（C-21），34.2（C-22），23.4（C-23），46.3（C-24），30.3（C-25），19.4（C-26），19.3（C-27），29.8（C-28），12.5（C-29），102.5（C-1′），75.9（C-2′），78.8（C-3′），71.9（C-4′），78.6（C-5′），62.2（C-6′）。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻 ［8］報道基本一致，因此鑒定化合物5為胡蘿卜苷。

化合物6：白色無定形粉末，分子式C16H32O2，mp 60～62℃，EI-MS m/z 256［M］+。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：2.35（2H，t，J=7.4 Hz，H-2），1.63（2H，m，H-3），1.29（2H，m，H-15），0.87（3H，t，J=7.4 Hz，H-16），1.33（20H，m，H-5～14）。13C-NMR（CDCl3，125 MHz）δ：179.8（C-1），33.2（C-2），31.6（C-4），29.6（C-6），29.4（C-7～12），29.5（C-13），29.3（C-5），29.0（C-14），22.6（C-15），14.3（C-16）。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻 ［9］報道基本一致，因此鑒定化合物6為棕櫚酸。

化合物7：無色針狀結晶 （三氯甲烷-甲醇），分子式C20H28O4，mp 288～290℃，ESI-MS m/z 331［M-H］-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：0.92（3H，s，H-20），1.13（3H，s，H-19），6.43（1H，s，H-15），2.77（1H，m，H-13），0.94（1H，brd，H-9），1.09（1H，brd，H-5）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：39.1（C-1），18.6（C-2），37.7（C-3），42.2（C-4），55.7（C-5），20.5（C-6），37.2（C-7），50.5（C-8），45.2（C-9），40.2（C-10），18.2（C-11），25.2（C-12），40.9（C-13），42.5（C-14），152.6（C-15），138.5（C-16），165.2（C-17），178.5（C-18），28.8（C-19），15.2（C-20）。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻 ［10］報道基本一致，因此鑒定化合物7為土槿戊酸。

2.7 各化合物對3T3-L1成熟脂肪細胞葡萄糖消耗量的影響 本實驗對分離得到的黃酮苷類化合物進行了活性測定，以3T3-L1成熟脂肪細胞為體外模型，測定化合物1～7在1、5、20、50、100μmol/L 5個濃度下對其葡萄糖消耗量的影響。結果發(fā)現(xiàn)，化合物1～4能劑量依存性地促進3T3-L1葡萄糖消耗，其EC50值見表1。

表1 化合物1～7對3T3-L1成熟脂肪細胞葡萄糖量的EC50值Tab.1 E ffects of constituents1～7 on glucose consum p tion of 3T3-L1 adipocyte and the EC50values

2.8 化合物1對3T3-L1成熟脂肪細胞AMPK磷酸化水平的影響 本實驗利用3T3-L1成熟脂肪細胞模型，測定化合物1對其AMPK磷酸化水平的影響，實驗結果見圖1。由圖可知，化合物1能顯著提高3T3-L1 AMPK磷酸化水平，并呈現(xiàn)出劑量依賴性。

圖1 化合物1對3T3-L1成熟脂肪細胞AM PK磷酸化水平的影響Fig.1 Effect of com pound 1 on phosphorylation level of AMPK of 3T3-L1 adipocyte

根據(jù)蛋白實驗結果，進一步考察化合物1對AMPK的靶點作用，將AMPK特異性抑制劑化合物C與其共同作用于細胞后，測定葡萄糖消耗量，實驗結果見圖2。由圖可知，化合物C能阻斷化合物1對3T3-L1葡萄糖消耗的提高作用。

圖2 化合物1和化合物C疊加對3T3-L1成熟脂肪細胞葡萄糖消耗量的影響Fig.2 Effect of compound 1 plus com pound C on glucose consum ption of 3T3-L1 adipocyte

2.9 化合物1對前脂肪細胞3T3-L1分化的影響本實驗在分化過程中連續(xù)加藥，之后取分化第10天的細胞進行油紅染色，觀察其分化程度，實驗結果見圖3。由圖可知，化合物1在濃度為5、10、20μmol/L時均能夠抑制前脂肪細胞3T3-L1的分化，分化率分別為68.2%、33.2%、2.6%。

圖3 化合物1對前脂肪細胞3T3-L1分化的影響Fig.3 Effect of compound 1 on the differentiation of 3T3-L1 cells

2.10 化合物1對3T3-L1成熟脂肪細胞PPARγ、c/EBPα的mRNA相對表達量的影響 本實驗對分化第10天的PPARγ、c/EBPα的mRNA水平進行了測定，實驗結果見圖4。由圖可知，其水平均比分化第0天 （未分化的3T3-L1細胞）顯著升高，表明化合物1能顯著抑制PPARγ、c/EBPα的mRNA水平，并有劑量依賴性。

圖4 化合物1對3T3-L1成熟脂肪細胞PPARγ、c/EBPα的m RNA相對表達量的影響Fig.4 Effects of com pound 1 on them RNA level of PPARγ、c/EBPαof 3T3-L1 adipocyte

3 討論

玉米須是 《中華人民共和國衛(wèi)生部藥材標準》1985版一部收錄的常用藥材品種，含有多種化學成分，其藥理作用豐富，臨床應用廣泛。據(jù)記載［11］，民間應用玉米須治療糖尿病取得了較好的療效，其發(fā)酵制劑對家兔有非常顯著的降血糖作用。此外，文獻 ［12-13］報道，其水提物對鏈脲佐菌素或四氧嘧啶所致的糖尿病小鼠有較顯著的治療效果。本實驗從玉米須石油醚和乙酸乙酯部位提取分離得到7個化合物 （1～7），并以3T3-L1脂肪細胞為體外細胞模型，對所得化合物進行抗糖尿病活性的初步篩選。結果顯示，化合物1～4能有效提高3T3-L1成熟脂肪細胞的葡萄糖消耗量，EC50值分別為4.16、9.35、39.98、8.55μmol/L，其中黃酮苷類化合物1可顯著提高3T3-L1 AMPK的磷酸化水平。另外，進一步研究證實，AMPK特異性抑制劑化合物C能阻斷化合物1對3T3-L1葡萄糖消耗的影響，推測可能是通過影響AMPK的磷酸化水平所致。而且，化合物1能顯著抑制前脂肪細胞3T3-L1的分化，并可劑量依賴性抑制分化過程中的重要轉(zhuǎn)錄因子PPARγ及c/EBPα的mRNA相對表達量，顯示了確切的體外抗糖尿病作用。同時，以上實驗研究為玉米須的現(xiàn)代臨床應用也提供了實驗依據(jù)。

［1］《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：166.

［2］Wang Y P，Li X G.Progress in study on chemical constituent and pharmacological activity of corn silk［J］.SpecialWild Fcon Animal Plant Res，2004，26（2）：42-46.

［3］Neucere H，Joseph N.Inhibition of Aspergillus flavus growth by silk extracts of resistant a susceptible corn［J］.J Agric Food Chem，1996，44（8）：1982-1983.

［4］劉傳水，太志剛，李愛梅，等.云南產(chǎn)玉米須的化學成分研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2011，23（6）：1041-1044.

［5］渠桂榮，劉 健，李新新，等.裂葉苣荬菜黃酮成分的研究［J］.中草藥，1995，26（5）：233-235.

［6］陳 泉，吳立軍，阮儷軍.中藥淡竹葉的化學成分研究（II）［J］.沈陽藥科大學學報，2002，19（4）：257-259.

［7］姜洪芳，張 玖，單承鶯.亳菊花中黃酮類化合物的分離鑒定［J］.中國野生植物資源，2008，27（5）：50-52.

［8］張正付，邊寶林，楊 健，等.茉莉根化學成分的研究［J］.中國中藥雜志，2004，29（3）：237-239.

［9］袁永亮，葉丹丹，梁會娟，等.河南狹苞橐吾化學成分研究［J］.中草藥，2012，43（7）：1270-1272.

［10］徐 燕，鄒忠梅，梁敬鈺.玉米須的化學成分［J］.中國天然藥物，2008，6（3）：237-238.

［11］江蘇新醫(yī)學院.中藥大詞典：上冊［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1980：555.

［12］李 偉，陳穎莉，楊 銘，等.玉米須降血糖的實驗研究［J］.中草藥，1995，26（6）：305-306，311，335.

［13］劉 強.玉米須對正常及糖尿病模型小鼠的降血糖作用［J］.中草藥，1997，28（6）：379.

Separation of anti-diabetic constituents from corn stigma and their mechanism of action

CHEN Chen， XU Hua-ying
（The Second Hospital of Tianjin Medical University，Tianjin 300211，China）

AIMTo study the chemical constituents from corn stigma and their anti-diabetic activity.METHODSExtracted with 65%ethyl alcohol，the constituents from corn stigmawere isolated by chromatography of silica gel，gel and preparative HPLC，and their structures were identified on the basis of the physical and chemical properties and spectral analysis.Glucose consumption assays and Western blotwere used to assay their anti-diabetic activity，while Oil red O and RT-PCR were used to assay theireffects on 3T3-L1 differentiation.RESULTSSeven compoundswere isolated from corn stigma and identified as chrysoeriol-6-C-β-boivinopyranosyl-7-O-β-glucopyranoside（1），chrysoeriol（2），vanillic acid（3），luteolin（4），daucosterol（5），palmitic acid（6），pesudolario acid（7）.Among them，compound1significantly stimulated glucose consumption and phosphorylation of AMPK in 3T3-L1 adipocytes，and this function was blocked by compound C.Furthermore，it could still inhibit3T3-L1 differentiation and themRNA level of PPARγ，c/EBPα.CONCLUSIONCompound1significantly exhibits antidiabetic activity，and compound4is isolated from this plant for the first time.

corn stigma；chrysoeriol-6-C-β-boivinopyranosyl-7-O-β-glucopyranoside；luteolin；glucose consumption；adipocyte；differentiation；anti-diabetic activity

R284.1

：A

：1001-1528（2015）07-1492-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.07.021

2014-09-23

陳 ?。?985—），女，藥師，從事藥房工作。Tel：13512204353，E-mail：chenchenjieji@126.com