癃開顆粒不同制備工藝的主要藥效學(xué)比較

謝家駿1， 喬正東2， 成 苗3
（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海200127；2.上海市浦東醫(yī)院，上海 201399；3.上海市中藥研究所，上海201401）

目的觀察比較癃開顆粒揮發(fā)油對其制劑主要藥效學(xué)活性的影響，為設(shè)計合適的制備工藝提供實驗依據(jù)。方法給丙睪誘發(fā)前列腺增生模型小鼠灌胃癃開顆粒含揮發(fā)油制劑 （癃開A）或癃開顆粒去揮發(fā)油制劑 （癃開B）10、20、40 g/kg，每天1次，連續(xù)14 d，末次給藥結(jié)束24 h后摘取小鼠前列腺，稱定質(zhì)量，并換算成前列腺指數(shù)作組間比較。結(jié)果癃開A和癃開B對丙睪模型小鼠前列腺濕質(zhì)量和指數(shù)均有一定的抑制作用，但兩者相應(yīng)劑量組之間均無顯著性差異 （P＞0.05）。結(jié)論癃開顆粒含揮發(fā)油制劑與去揮發(fā)油制劑比較，兩者對前列腺增生的抑制程度相當(dāng)，提示采用去揮發(fā)油制備工藝有藥效保障，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。

癃開顆粒；揮發(fā)油；制備工藝；前列腺增生；小鼠模型

良性前列腺增生癥（benign prostate hyperplasia，BPH）是一種以前列腺間質(zhì)和上皮細(xì)胞增生為特征，與年齡和性激素相關(guān)的中老年慢性疾?。?］，臨床主要表現(xiàn)為前列腺肥大，尿頻、尿急、夜尿增多及急迫性尿失禁，嚴(yán)重者出現(xiàn)尿潴留、血尿、腎積水。流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國＞60歲的常住城鄉(xiāng)老年人前列腺增生總患病率為43.68%［2］，國外更高達(dá)50%以上［3-4］。隨著全球人口老年化進(jìn)程的加快，其發(fā)病率逐年升高，已嚴(yán)重影響到人們?nèi)粘９ぷ骱蜕钯|(zhì)量［5］。目前，探索良性前列腺增生癥發(fā)病機(jī)理，以及尋找相關(guān)治療藥物已成為研究熱點(diǎn)［6-7］。癃開顆粒由淫羊藿、黃芪、牛膝等中藥組成，具有補(bǔ)腎益氣、活血化瘀之功效，可用于改善輕、中度中老年良性前列腺增生癥 （腎虛血瘀證）患者出現(xiàn)的夜尿頻數(shù)、排尿困難、腰膝酸軟、小腹脹痛等癥狀［8］。本實驗以丙睪所致小鼠前列腺增生為指標(biāo)［9］，觀察比較癃開顆粒含揮發(fā)油制劑與去揮發(fā)油制劑對前列腺增生活性的影響，為其有效部位的選定及制備工藝的設(shè)計提供科學(xué)依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 受試藥物 癃開顆粒含揮發(fā)油制劑 （癃開A），由淫羊藿、生黃芪、杜仲 （淡鹽水炒）、女貞子 （酒制）、懷牛膝、三棱、莪術(shù)、赤芍、當(dāng)歸尾、滑石等組成，按標(biāo)準(zhǔn)水提、濃縮、制粒工藝制備而成，每1 g制劑相當(dāng)于生藥2 g（中藥研究所藥學(xué)研究室，批號000801）；癃開顆粒去揮發(fā)油制劑 （癃開B，中藥研究所藥學(xué)研究室，批號000802）。

1.2 對照藥 保列治（finasteride，MSD），10片/盒，5 mg/片 （美國默沙東公司，批號200541）。

1.3 模型藥 丙酸睪酮注射液（testosterone propionate injection，TPI），10支/盒，25 mg/支（上海第九制藥廠，批號00105Ⅱ），使用時用液體石蠟稀釋至1mg/mL。

1.4 實驗動物 ICR小鼠，雄性，體質(zhì)量18～22 g（上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物生產(chǎn)許可證號SCXK［滬］2003-0002）。環(huán)境條件為溫度 （22±2）℃，相對濕度60%～70%，不銹鋼籠具分籠飼養(yǎng)，飼以鼠用固體高壓料。實驗前禁食12 h，不禁水。

2 實驗方法

ICR小鼠90只，雄性，按體質(zhì)量隨機(jī)分成空白組、模型組、癃開A（低、中、高）組、癃開B（低、中、高）組、陽性藥組，共9組，每組10只。除空白組皮下注射同容積液體石蠟外，其余各組小鼠分別皮下注射TPI 10mg/kg，每日1次，連續(xù)14 d。同時，癃開A和癃開B組小鼠分別灌服癃開A 10、20、40 g/kg和癃開B 10、20、40 g/kg，陽性藥組小鼠灌服保列治2 mg/kg，模型組和空白組小鼠則分別灌服蒸餾水，灌服容積均為20 mL/kg，每日1次，連續(xù)14 d。末次給藥后24 h，處死動物，摘取前列腺稱定質(zhì)量，并換算成前列腺指數(shù)作組間比較。前列腺指數(shù)計算方法如下。

前列腺指數(shù) （%） =前列腺質(zhì)量 （g）÷體質(zhì)量 （g）×100%

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （x±s）”表示，兩組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有顯著性。

3 實驗結(jié)果

3.1 對體質(zhì)量的影響 癃開A中、高劑量組和癃開B高劑量組均能減輕模型小鼠的體質(zhì)量。其中，癃開A中劑量組小鼠的體質(zhì)量降低程度與模型組和癃開B相應(yīng)劑量組比較，差異均具有顯著性意義 （P＜0.05）。

3.2 對前列腺質(zhì)量的影響 癃開A與癃開B的低、中、高劑量組，以及陽性藥組對丙睪模型小鼠前列腺濕質(zhì)量和指數(shù)均有一定的抑制作用。其中，癃開A低、中劑量組前列腺濕質(zhì)量和低劑量組前列腺指數(shù)、癃開B中、高劑量組以及陽性藥組前列腺濕質(zhì)量和指數(shù)與相應(yīng)模型組比較，均具有顯著性或非常顯著性差異 （P＜0.05或P＜0.01），而且癃開B還顯示出一定的量效關(guān)系。另外，癃開A與癃開B相應(yīng)劑量組之間比較，在抑制模型小鼠前列腺濕質(zhì)量和指數(shù)方面均無顯著性差異 （P＞0.05），見表1。

表1 癃開顆粒不同制備工藝對丙睪所致小鼠前列腺增生的影響 (n=10,x±s)

結(jié)果顯示，癃開A和癃開B對模型小鼠前列腺濕質(zhì)量和指數(shù)均有一定的抑制作用，但將兩者相應(yīng)劑量組比較，均無顯著性差異 （P＞0.05）。

4 討論

癃開顆粒源于國家級名老中醫(yī)王綿之教授幾十年的臨床驗方，是通過現(xiàn)代提取方法科學(xué)加工而成的純中藥制劑。藥效學(xué)實驗結(jié)果表明［9］，它可減輕正常幼年小鼠前列腺濕質(zhì)量及其DNA含有量，對由丙酸睪丸素或植入胎鼠尿生殖竇誘發(fā)的前列腺增生具有抑制作用；動物急性及長期毒性實驗結(jié)果［9-10］顯示，該藥最大給藥量為臨床擬用劑量的100倍。另外。以臨床擬用劑量50倍給藥，每日1次，連續(xù)3個月，發(fā)現(xiàn)除動物前列腺組織腺上皮輕度萎縮，細(xì)胞由柱狀向扁平或梭形移生，以及腺腔變小外，其他指標(biāo) （如一般行為變化、全血、血清生化、尿液檢測、以及組織病理學(xué)鏡檢）均未發(fā)現(xiàn)明顯異常，提示了癃開顆粒對良性前列腺增生癥有療效，且安全無明顯毒副作用。

前列腺是性激素的依賴性器官，其中雄性激素對前列腺的生長、結(jié)構(gòu)和功能起著重要的作用。在前列腺組織內(nèi)，雄性激素的主要作用形式是睪酮轉(zhuǎn)化為其代謝產(chǎn)物雙氫睪酮 （DHT）［11］。血漿中游離型睪酮進(jìn)入前列腺細(xì)胞內(nèi)，在5a-還原酶作用下首先不可逆地轉(zhuǎn)變?yōu)镈HT，并與雄性激素受體結(jié)合形成復(fù)合物，作用于其特異性的DNA位點(diǎn)上，誘導(dǎo)雄性激素依賴性基因的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄增加，蛋白合成增多。當(dāng)DHT異常升高時，其可促使前列腺組織廣泛增殖，導(dǎo)致良性前列腺增生癥的發(fā)生［12］。基于此雙氫睪酮學(xué)說，加上為了便于產(chǎn)業(yè)化，我們在對該藥工藝路線的研究過程中，制備了含揮發(fā)油部位的癃開顆粒制劑 （癃開A）和去揮發(fā)油部位的癃開顆粒制劑 （癃開B）。按照藥物的定義，癃開A與癃開B處方一致，劑量相同，提取溶媒均為水，故其提取物應(yīng)同屬一種藥物。然而，兩者也有區(qū)別，主要在于提取工藝模擬臨床使用方法程度的掌控。癃開A的制備工藝采用先萃取揮發(fā)油，后將其加入到水提浸膏中，故富集了處方藥材中的揮發(fā)油；癃開B的制備工藝采用直接煎煮提取，其中的揮發(fā)油在長時間沸騰狀態(tài)下大量揮發(fā)，從而基本消失。因此，評價該兩種制備工藝對其產(chǎn)物主要藥效學(xué)及強(qiáng)度的影響，對于制定含或去揮發(fā)油的工藝路線至關(guān)重要。遵照國家CFDA頒布的 《藥品注冊管理辦法》有關(guān)要求，參照臨床用藥實際情況，考慮到處方中揮發(fā)油成分對主要藥效學(xué)活性的潛在影響，課題組設(shè)計了富含或不含揮發(fā)油的兩條工藝路線，將所得到的提取物通過主要藥效學(xué)實驗進(jìn)行比較，用于指導(dǎo)合理的制備工藝路線［13］。

癃開顆粒主要治療腎虛瘀阻證型良性前列腺增生癥，即前列腺肥大，故課題組設(shè)定的用于臨床療效評價的客觀指標(biāo)是前列腺大小、最大尿流率 （Qmax）和殘余尿量［8］，其中前列腺大小是核心指標(biāo)。由于中成藥中未見有明確抗前列腺增生的藥物，故選用保列治作為陽性藥物。在受試藥物的劑量設(shè)定上，結(jié)合主要藥效學(xué)實驗結(jié)果，將受試藥物癃開A與癃開B的低、中、高組劑量均設(shè)置為10、20、40 g/kg，分別相當(dāng)于臨床劑量的5、10、20倍。為了便于產(chǎn)業(yè)化，我們制備了含和去揮發(fā)油部位的癃開顆粒制劑，并以丙睪誘發(fā)小鼠前列腺增生為指標(biāo)，觀察比較兩者對其活性的影響。結(jié)果顯示，癃開顆粒含和去揮發(fā)油部位制劑對丙睪誘發(fā)小鼠前列腺增生均有一定的抑制作用，但相應(yīng)的同劑量組之間無顯著性差異。由此可知，癃開顆粒含揮發(fā)油部位并非是防治良性前列腺增生癥的主要活性部位，這也為選用生產(chǎn)成本比較低的去揮發(fā)油制劑工藝路線和癃開顆粒產(chǎn)業(yè)化提供了科學(xué)依據(jù)。

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R285.6

：B

：1001-1528（2015）07-1568-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.07.038

2014-09-12

謝家駿 （1959—），男，研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向為藥理毒理學(xué)研究與中藥新藥開發(fā)。Tel： （021）51322395，E-mail：xiejj001@163.com