劉陶世+程建明+趙新慧+畢肖林+蔡寶昌

[摘要]目的 研究定喘緩釋片的制備方法及其體外釋藥規(guī)律。 方法 采用單因素試驗法優(yōu)選制劑成型工藝參數(shù)；采用體外釋放度測定法，以相似因子比較法、釋放模型擬合法以及Peppas方程研究定喘緩釋片中麻黃堿等4種代表性成分的釋放規(guī)律與機制。 結(jié)果 優(yōu)選的制劑處方為藥物64%，HPMC 30%，乳糖5%和硬脂酸鎂1%，采用濕顆粒壓片法。定喘緩釋片中的麻黃堿、甘草酸、黃芩苷和苦杏仁苷的體外釋放曲線相互之間的相似因子均大于80%，均以Higuchi釋放模型為最佳擬合模型，釋放機制均為擴散協(xié)同骨架溶蝕作用。 結(jié)論 定喘緩釋片的制備工藝科學(xué)可行，在體外具有明顯的緩釋特性和多成分均衡釋放特性。

[關(guān)鍵詞]緩釋片；麻黃堿；黃芩苷；甘草酸；苦杏仁苷

[中圖分類號] TQ461 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）23-09-05

定喘緩釋片處方來源于經(jīng)典名方“定喘湯”，由麻黃、白果、甘草、黃芩和杏仁等藥材組成，具有宣肺降氣、祛痰平喘功效，臨床常用于治療慢性支氣管炎和哮喘等病，療效顯著。由于本品所治疾病為慢性疾病，需要長期服藥，湯劑臨時煎煮不便，為提高患者服藥順應(yīng)性和提高臨床療效，擬將定喘湯研制成緩釋片。本研究重點開展定喘緩釋片的制劑成型工藝研究，并以麻黃堿、甘草酸、黃芩苷和苦杏仁苷4種代表性有效成分為指標，研究其體外多成分釋藥規(guī)律以初步評價其緩釋性能。

1 材料與方法

1.1 儀器

DP-30d單沖壓片機（北京國藥龍立科技有限公司），78X-2B型片劑四用測定儀（上海黃海藥檢儀器有限公司），PYS-20型片劑硬度計（上海黃海藥檢儀器有限公司），RC610型智能藥物溶出儀（天津醫(yī)療器械研究所），Waters 高效液相色譜儀（Waters 515泵，Waters 2487紫外-可見檢測器，Rheodyne 進樣器），KQ-500E型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

定喘湯精制浸膏（自制，批號20131018），乙腈（HPLC純，美國默克公司），甲醇（HPLC純，江蘇淮安市恒天工貿(mào)有限公司），其余試劑均為分析純。HPMC K 100M、HPMC K 15M 、HPMC K 4M（上海卡樂康公司），乳糖（上?；瘜W(xué)試劑公司），硬脂酸鎂（上?；瘜W(xué)試劑公司），微粉硅膠（上?；瘜W(xué)試劑公司）。鹽酸麻黃堿（171241-201107），甘草酸單銨鹽（110731-201308），黃芩苷（110715-201213），苦杏仁苷（110820-201302）對照品均為含量測定用，均購自中國藥品生物制品檢定所。

1.3 方法

1.3.1 定喘緩釋片的制備 取麻黃和黃芩等藥材，加水煎煮2次，第1次加水10倍量煎煮1.5h，第2次加水7倍量1.0h，合并濾液，濃縮至0.5g藥材/mL，高速離心。取上清液過預(yù)處理過的AB-8和 D101混合樹脂柱，蒸餾水5BV洗脫雜質(zhì)，50%乙醇和 70%乙醇各3BV洗脫活性成分，減壓回收乙醇，真空干燥，粉碎，即得定喘浸膏粉（中間體）。取浸膏粉，HPMC和乳糖等輔料混勻，用70%乙醇濕法制粒，60℃烘干，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片（0.5g/片），即得定喘緩釋片。本部分采用單因素試驗法篩選輔料種類與用量，并對制劑成型工藝參數(shù)進行優(yōu)選。

1.3.2 定喘緩釋片中4種活性成分的體外釋放度測定法 采用2010版中國藥典二部附錄釋放度測定第一法“轉(zhuǎn)籃法”。溶出介質(zhì)是脫氣的蒸餾水900mL，溫度（37.0±0.5）℃。取定喘緩釋片6片，精密稱定，投入6個干燥的轉(zhuǎn)籃內(nèi)，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速100r/min，待其平穩(wěn)后，將轉(zhuǎn)籃降入恒溫的溶出杯中，自樣品接觸溶出介質(zhì)起立即計時，至規(guī)定時間，直接取樣3mL（每次取樣后補充介質(zhì)3mL），用0.22μm微孔濾膜濾過，取濾液進行HPLC測定。

麻黃堿等指標成分的HPLC測定方法（方法學(xué)考察另文發(fā)表）：（1）麻黃堿：色譜柱為Kromasil 反相C18柱（5μm，4.6mm×250mm），柱溫30℃，測定波長210nm，流動相為乙腈-水-三乙胺-磷酸（5︰95︰0.05︰0.01），流速1.0mL/min。（2）黃芩苷：色譜柱和操作條件同上，測定波長276nm，流動相為甲醇-0.6%磷酸水（45︰55）。（3）甘草酸：色譜柱和操作條件同上，測定波長250nm，流動相為甲醇-0.2mol/L醋酸銨水溶液-冰醋酸（67︰33︰1）。（4）苦杏仁苷：色譜柱和操作條件同上，測定波長207nm，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（8︰92）。

1.3.3 定喘緩釋片的緩釋性能評價標準 本制劑每日服用2次，因此需考察12h內(nèi)的體外累積釋藥百分率。本制劑各成分體外釋藥需達到以下設(shè)計目標：2h累積釋放30%（Y2，評價是否存在突釋），6h累積釋放55%（Y6評價是否具緩釋性）和12h釋放90%以上（評價生物利用度是否符合要求）。以X值為綜合評價指標優(yōu)選處方和制劑成型工藝參數(shù)，X值越小說明釋放越接近設(shè)計目標，通常X<0.2即可。

（當Y12≥90%，K=0；當Y12<90%，K=1）

1.3.4 定喘緩釋片中4種活性成分的釋放模型擬合 將麻黃堿、甘草酸、黃芩苷和苦杏仁苷4種成分的體外累積釋放百分率（F）和時間（t）分別按 Higuchi方程、零級釋放模型和一級釋放模型進行擬合，求出釋放方程，以相關(guān)系數(shù)r最大者為最優(yōu)釋放模型。

1.3.5 定喘緩釋片中4種活性成分體外釋放均衡性的評價（體外釋放曲線的相似性評價） 采用Kok. K.P提出的相似因子判斷兩條釋藥曲線的相似性，見下式。f為相似因子，Xti和XTi分別表示兩條釋放曲線在同一時間的累積釋放率，如果f大于50，則認為兩條曲線是相似的。

1.3.6 定喘緩釋片中4種活性成分的釋放機制探討 采用Peppas方程Ft /F∞ = ktn探討釋放機制，式中 Ft / F∞是t時刻的累計釋放百分率，k為釋放速率常數(shù)，n為釋放參數(shù)，當0.450.89時，藥物釋放機制為骨架溶蝕作用。將Peppas方程兩邊取對數(shù)：lg Ft/F∞ = nlg t + lg k，釋放度數(shù)據(jù)以此方程進行擬合，由回歸方程斜率n可闡明藥物釋放機制[1]。

2 結(jié)果

2.1 定喘緩釋片制劑處方及其輔料篩選

本品藥材處方經(jīng)水提和大孔樹脂吸附分離工藝精制后得到浸膏粉2.56g（研究資料另文發(fā)表），共制成緩釋片8片；每次口服4片，每日2次；片重0.5g，每片含浸膏粉0.32g，輔料0.18g。由于浸膏粉劑量大，成分復(fù)雜，因此選擇工藝簡單、輔料用量少、緩釋可控性強、多成分釋藥均衡性好的水凝膠骨架型緩釋片為本品劑型。

高分子水凝膠材料是定喘緩釋片的關(guān)鍵緩釋輔料。表1結(jié)果表明，低粘度的羥丙基甲基纖維素（HPMC K4M）和中粘度的HPMC K15M制備的定喘緩釋片中麻黃堿的體外釋放均很快，而高粘度的HPMC K100M則釋放較慢，將HPMC K100M和HPMC K4M 以2︰1的比例混合使用，能使藥物的

釋放速度達到較滿意的緩釋效果。表2結(jié)果表明，以處方2（浸膏粉64%、HPMC 30%、乳糖用量5%、硬脂酸鎂1%）制備的定喘緩釋片體外釋藥性能最好。

經(jīng)過篩選，定喘緩釋片的制劑處方為（1000片量，0.5g/片）：藥物浸膏粉320g、HPMC 4M 50g、HPMC 100M 100g、乳糖25g、硬脂酸鎂5g。

2.2 制劑成型工藝研究

表3結(jié)果表明，濕法制粒壓片制得的片子質(zhì)量最好。經(jīng)篩選定喘緩釋片的制劑成型工藝為：稱取藥物浸膏粉、HPMC和乳糖，混勻，用70%乙醇濕法制粒，過20目篩，60℃烘干，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片。

2.3 定喘緩釋片中麻黃堿等4種指標成分體外釋放度曲線的測定

表4和圖1結(jié)果表明，定喘緩釋片（批號20131018）中4種代表性有效成分（麻黃堿、甘草酸、黃芩苷和苦杏仁苷）2h體外累積釋放率均在30%左右，6h體外累積釋放率均在55%左右，而12h體外累積釋放率均大于90%，符合設(shè)計要求，表明定喘緩釋片具有良好的緩釋特性。

2.4 麻黃堿等4種指標成分體外釋放均衡性的評價

表5結(jié)果表明，定喘緩釋片中麻黃堿等4種指標成分的體外釋放曲線兩兩比較相似因子均大于80，說明定喘緩釋片中各有效成分具有均衡釋放特性。

2.5 麻黃堿等4種指標成分的釋放模型擬合和釋放機制

表6和表7結(jié)果表明，定喘緩釋片中麻黃堿等4種指標成分的釋放規(guī)律均以Higuchi釋放模型為最佳擬合模型（r最大），釋放機制均為擴散協(xié)同骨架溶蝕作用。

3 討論

定喘緩釋片屬于中藥復(fù)方緩釋制劑，是當前中藥制劑現(xiàn)代化的研究熱點和難點，該復(fù)方由麻黃、甘草和黃芩等9味藥材組成，其中每味藥材均含有結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)各異的數(shù)百種成分，此外在提取分離過程中還可能產(chǎn)生新的成分，這些成分的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)（溶解性、極性、解離常數(shù)等）、藥動學(xué)（吸收、分布、代謝和排泄）和藥效學(xué)性質(zhì)（作用機制和量效關(guān)系）目前多數(shù)不清楚，且在復(fù)方中的主次地位不明。而化學(xué)藥物緩控釋制劑的研發(fā)理論僅適合于單個成分或數(shù)個成分組成的簡單復(fù)方，不適合成分復(fù)雜的中藥復(fù)方，因此中藥復(fù)方緩控釋制劑的設(shè)計需要全新的思路。在傳統(tǒng)中藥劑型中，丸劑（蜜丸、糊丸等）是一種緩釋劑型，“丸者緩也”，“丸藥以舒緩為治”，在丸劑中藥物成分的釋放多數(shù)具有多成分同步均衡釋放特性 [3-11]。因此根據(jù)處方中君藥和臣藥的已知的主要活性成分來做為指標成分對中藥復(fù)方緩控釋制劑進行設(shè)計，使其藥效成分滿足多成分同步均衡釋放，可以做為當前中藥緩控釋制劑研究的權(quán)宜思路。

水凝膠骨架片與中藥糊丸劑在輔料和釋藥機制具有相似性，是以親水性高分子材料為骨架材料制備的緩釋劑型，該類片劑口服后遇到消化液在片子表面發(fā)生水化作用生成凝膠，由于凝膠的屏障效應(yīng)而控制藥物的釋放速度。與膜控性和滲透泵緩控釋制劑相比，具有生產(chǎn)工藝簡單，釋藥速度調(diào)節(jié)方法多，不易發(fā)生崩釋，具有多成分均衡釋藥等有點，因此是目前對中藥復(fù)方復(fù)雜成分特點具有較好適宜性的緩控釋給藥系統(tǒng)[12-22]。

本研究以定喘緩釋片中君藥麻黃的主要活性成分麻黃堿為指標優(yōu)選制劑處方和制劑成型工藝參數(shù)，并結(jié)合復(fù)方中的其他代表性有效成分黃芩苷、甘草酸和苦杏仁苷，探討了定喘緩釋片的體外釋藥規(guī)律，結(jié)果表明具有不同結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)的四種成分的體外釋放具有同步性和均衡性，表現(xiàn)在四種成分的體外12h釋放曲線高度相似（兩兩之間的相似因子均大于80%），各個時間點的累計釋放百分率比較接近，各成分的釋放模型均以Higuchi方程為最佳擬合模型，釋放機制均為擴散協(xié)同骨架溶蝕作用，以上說明定喘緩釋片的劑型選擇與制備工藝是科學(xué)合理的。

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（收稿日期：2014-10-12）

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（收稿日期：2014-10-12）