■郭 洋 劉敏躍 李 鵬 馬曉威 祝鑫一 張 燚 何劍斌 劉明春

（1.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽 100866；2.遼寧省農(nóng)牧業(yè)機(jī)械研究所有限公司，遼寧沈陽 110036；3.沈陽市蘇家屯區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督管理局，遼寧沈陽 110101；4.東北大學(xué)檔案館，遼寧沈陽 100014）

免疫增強(qiáng)劑也稱免疫佐劑，是一類通過非特異性途徑提高機(jī)體對抗原或微生物特異性反應(yīng)的物質(zhì)，該途徑包括增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活性，增強(qiáng)抗原物質(zhì)的免疫原性和穩(wěn)定性，促進(jìn)抗體的合成與分泌等。根據(jù)其來源可以將其分為如下幾類：微生物制劑類，如分枝桿菌及其他細(xì)菌制劑；生物制劑類，如胸腺因子及轉(zhuǎn)移因子等；中草藥類，如黃芪、黨參等；化學(xué)合成小分子類，如左旋咪唑。左旋咪唑(Levamisole)為咪唑衍生物，是獸醫(yī)臨床廣泛應(yīng)用的抗蠕蟲藥物，作為一種免疫增強(qiáng)劑，可使機(jī)體免疫功能由低下恢復(fù)正常，同時也能增強(qiáng)正常機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫，且具有改善增重和飼料轉(zhuǎn)化率的作用，并且具有廣譜、高效、藥源充足、性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。自Renoux等(1971)發(fā)現(xiàn)左旋咪唑能增強(qiáng)小鼠布氏桿菌菌苗免疫效果后，人們對左旋咪唑的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了廣泛的研究。為了研究左旋咪唑?qū)﹄r雞免疫功能及生長性能的影響，進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動物

海蘭褐雛雞，1日齡購入，雌、雄兼有，飼喂不含任何抗菌藥物的全價飼料，自由采食與飲水。

1.1.2 受試藥物

鹽酸左旋咪唑可溶性粉(規(guī)格：100 g∶25 g)，沈陽市獸藥廠生產(chǎn)；地塞米松：作為免疫抑制劑對照，江蘇中邦制藥有限公司生產(chǎn)；小牛胸腺肽注射液：作為免疫增強(qiáng)劑對照（規(guī)格：20 mg∶2 ml，0.9%生理鹽水稀釋20倍，每瓶稀釋40 ml），山東米歇爾生物制品有限公司生產(chǎn)；雞新城疫低毒力活疫苗（La Sota株）。規(guī)格：500羽份，吉林正業(yè)（原吉林省生物制品廠）生產(chǎn)。

1.1.3 試驗(yàn)試劑

PBS（pH值7.2、0.01 mol/l）；阿氏液；雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽性血清及陰性血清（兩者均系遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心惠贈）；1%雞紅細(xì)胞(Red Blood Cell,RBC)懸液：健康雞采血，每只采2 ml，共采4只，與等體積阿氏液混合，用pH值7.2的PBS洗滌3次（1 000 r/min、10 min離心），用PBS配成1%RBC懸液，4℃保存。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)動物分組及免疫

至30日齡時，選無臨床癥狀的健康雛雞180只，隨機(jī)分為6組，每組30只，雌、雄各半。其中1組為空白對照組，1組為免疫增強(qiáng)劑（胸腺肽）對照組，1組為免疫抑制劑（地塞米松）對照組，另3組為試驗(yàn)組（分別為左旋咪唑低、中、高劑量組）。

左旋咪唑可溶性粉：混飲，每千克體重4 mg（低劑量組）、8 mg（中劑量組）、12 mg（高劑量組），連用3 d；地塞米松：肌肉注射，2.5 mg/kg體重，連用3 d；小牛胸腺肽注射液：肌肉注射，0.4 ml/只，連用3 d。給藥后第3 d進(jìn)行免疫，將每瓶新城疫疫苗用0.9%生理鹽水稀釋至50 ml，肌肉注射，0.5 ml/只。

1.2.2 體液免疫檢測

免疫后第7、14、21 d，隨機(jī)從各組取10只雞心臟采血，采用微量法進(jìn)行血凝抑制（HI）試驗(yàn)檢測抗體效價，求出每組平均值，從而確定受試藥物對雞只體液免疫所產(chǎn)生的作用。

1.2.3 體重、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)測定

免疫后第7、14、21 d，每組隨機(jī)抽取10只雞，空腹稱重后，放血致死。小心取出脾臟和法氏囊，用吸水紙吸干血跡，分別稱取重量，計算脾臟指數(shù)[脾重量（mg）/體重（g）]及法氏囊指數(shù)[法氏囊重（mg）/體重（g）]。每組求出平均值。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及處理

結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，利用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析，比較各時間點(diǎn)抗體效價及其他相關(guān)指標(biāo)的差異性。

2 結(jié)果與分析

2.1 體液免疫檢測結(jié)果(見表1)

表1 各組雞血清ND抗體滴度HI檢測結(jié)果（log2）

從表1可知，除低劑量組外，左旋咪唑其他劑量組在各時間點(diǎn)上，雞血清ND抗體滴度均顯著或極顯著高于空白對照組（P＜0.05或 P＜0.01），其中中劑量組各時間點(diǎn)上血清抗體滴度最高，但是與免疫增強(qiáng)劑組相比仍有顯著差距(P＜0.05)。免疫抑制對照組在14 d和21 d兩個時間點(diǎn)上其ND抗體滴度均與空白對照組有極顯著差異（P＜0.01）。上述結(jié)果表明，適量的左旋咪唑可以在一定時間內(nèi)提高受試雞只的ND血清抗體水平。

2.2 體重、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)檢測結(jié)果（見表2～表4）

表2 各組雞平均體重檢測結(jié)果(g)

各組雞只的平均初始體重差異不顯著，從第14 d開始到試驗(yàn)結(jié)束，左旋咪唑中劑量組雞只體重高于空白對照組，且差異極顯著（P＜0.01），同時也高于左旋咪唑低劑量組和高劑量組。試驗(yàn)結(jié)果表明，相比高、低劑量組來說，中等劑量的左旋咪唑?qū)κ茉囯u只增重的促進(jìn)作用更為明顯。但是，與免疫增強(qiáng)劑組相比，各劑量組左旋咪唑的增重效果均有所不如，且差異顯著或極顯著（P＜0.05或 P＜0.01）。免疫抑制劑地塞米松則能影響試驗(yàn)中后期雞只體重的增長。

對于脾臟指數(shù)的影響方面，根據(jù)表3可知，左旋咪唑中劑量組雞只的脾臟指數(shù)在第7 d和第14 d時顯著或極顯著高于空白對照組（P＜0.05或P＜0.01），同時在所有時間點(diǎn)上均高于左旋咪唑低劑量組和高劑量組。表明相比高、低劑量組來說，中等劑量的左旋咪唑?qū)κ茉囯u只的脾臟發(fā)育有促進(jìn)作用。此外，胸腺肽和地塞米松分別作為免疫增強(qiáng)劑和免疫抑制劑能夠顯著或極顯著促進(jìn)或抑制雞只脾臟的發(fā)育（P＜0.05或P＜0.01）。

表3 各組雞平均脾臟指數(shù)檢測結(jié)果

表4 各組雞平均法氏囊指數(shù)檢測結(jié)果

根據(jù)表4可知，第14 d和第21 d時，左旋咪唑中劑量組雞的法氏囊指數(shù)均高于空白組、低劑量組和高劑量組，且差異顯著或極顯著(P＜0.05或 P＜0.01)。表明中等劑量的左旋咪唑?qū)κ茉囯u只的法氏囊的發(fā)育有促進(jìn)作用。但是，與免疫增強(qiáng)劑組相比，試驗(yàn)前期(第7 d)的法氏囊指數(shù)仍有顯著差異(P＜0.05)，而試驗(yàn)全期免疫抑制劑地塞米松則對法氏囊的試驗(yàn)全期生長發(fā)育并無顯著影響。

3 討論

3.1 左旋咪唑的免疫調(diào)節(jié)作用

左旋咪唑?qū)龠溥蝰夃邕蝾惪咕€蟲藥，后來人們又發(fā)現(xiàn)其具有免疫調(diào)節(jié)作用。左旋咪唑的免疫調(diào)節(jié)機(jī)理表現(xiàn)在以下幾個方面：①促進(jìn)免疫細(xì)胞的增殖、成熟,增強(qiáng)其吞噬、趨化功能,誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生各種細(xì)胞因子；②增加機(jī)體抗體的產(chǎn)生水平；③抗氧化和清除機(jī)體自由基；④增強(qiáng)巨噬細(xì)胞功能,激活、提高補(bǔ)體活性。此外，左旋咪唑還具有促進(jìn)動物生長發(fā)育等功效。

王書全等通過試驗(yàn)證明了左旋咪唑能明顯提高新城疫LaSota疫苗特異性免疫應(yīng)答抗體水平,免疫器官指數(shù)、血液中ANAE+T淋巴細(xì)胞百分率顯著提高。王新衛(wèi)等通過試驗(yàn)證明了左旋咪唑的添加能夠提高新城疫抗體滴度,并且與免疫后時間長短有關(guān)系。張傳津用鹽酸左旋咪唑-維生素E可溶性粉對疫苗免疫后的雞進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，鹽酸左旋咪唑-維生素E可溶性粉具有促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答反應(yīng)的作用,口服鹽酸左旋咪唑-維生素E可溶性粉后，雞對IBD疫苗及ND疫苗特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)明顯增強(qiáng),血清ND抗體及IBD抗體水平明顯升高,血液中ANAE+淋巴細(xì)胞百分率顯著提高。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，左旋咪唑可以增強(qiáng)雛雞的體液免疫水平，提高ND疫苗抗體滴度；試驗(yàn)中，中等劑量（8 mg/kg）的左旋咪唑較高劑量組（12 mg/kg）和低劑量組（4 mg/kg體重）的免疫增強(qiáng)作用更為明顯，說明左旋咪唑的免疫調(diào)節(jié)作用與使用劑量存在一定關(guān)系。此結(jié)果與上述報道和Gavkare等的報道相符合。

本試驗(yàn)還證明了左旋咪唑?qū)γ庖咂鞴俚陌l(fā)育也有積極影響，對于脾臟、法氏囊指數(shù)均有提高作用，同時其作用也與使用劑量呈一定關(guān)系。免疫器官重量的增加是器官生長發(fā)育快的表現(xiàn)，而指數(shù)的提高則意味著免疫系統(tǒng)成熟較快，說明左旋咪唑可促進(jìn)雛雞早期免疫器官的生長發(fā)育和迅速成熟，從而使雛雞的整體免疫機(jī)能加強(qiáng)，抵抗各種病原微生物感染的能力和抗各種應(yīng)激的能力得到一定程度的提高；平均體重的增加則顯示了左旋咪唑?qū)﹄r雞生長性能的正面影響。

3.2 關(guān)于免疫抑制劑與免疫增強(qiáng)劑對照組

地塞米松是本試驗(yàn)過程中作為對照使用的免疫抑制劑，試驗(yàn)過程中，地塞米松表現(xiàn)出了較強(qiáng)的免疫抑制作用，較好地實(shí)現(xiàn)了免疫抑制對照的作用，與操繼躍等的報道相符合。

此外，雖然左旋咪唑?qū)﹄r雞的免疫及生長性能具有正向調(diào)節(jié)作用，但與本試驗(yàn)中所應(yīng)用的對照免疫增強(qiáng)劑——小牛胸腺肽相比，其免疫增強(qiáng)水平還存在一定差距，這可能是由于小牛胸腺肽為胸腺提取物，其作用效果較化學(xué)合成的左旋咪唑更好；同時，也可能是由于不同的給藥方式（本試驗(yàn)中胸腺肽采用了肌肉注射，而左旋咪唑則采用了混飲）造成了兩者效果的差異，造成差異的具體原因?qū)⒃诤罄m(xù)試驗(yàn)中進(jìn)行探討。

通過本次試驗(yàn)對兩種免疫增強(qiáng)劑的免疫效果進(jìn)行了比較，有效地驗(yàn)證了左旋咪唑的免疫增強(qiáng)作用，可見左旋咪唑可以作為免疫增強(qiáng)劑用于雞只的飼養(yǎng)，具有較為廣闊的市場前景。

（參考文獻(xiàn)13篇，刊略，需者可函索）