■侍苗苗 秦粉菊，2 袁林喜 宋學(xué)宏 卜云璇 柳昭君 付監(jiān)貴

（1.蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇蘇州 215123；2.蘇州科技學(xué)院化學(xué)生物與材料工程學(xué)院，江蘇蘇州 215009；3.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)蘇州研究院，江蘇蘇州 215123）

硒（Se）及其化合物是一種較強(qiáng)的抗氧化劑，以硒代半胱氨酸為活性中心的谷胱甘肽過氧化物酶是生物有機(jī)體最強(qiáng)的抗氧化酶，硒制品在保健食品和醫(yī)藥品中占有重要地位。同時(shí)，硒也是甲殼動(dòng)物必需的微量元素，具有調(diào)節(jié)強(qiáng)化機(jī)體免疫力、解除體內(nèi)毒素、消除自由基的傷害和修復(fù)組織細(xì)胞等作用。納米硒是一種利用納米技術(shù)制備而成的新型研制品，因其具龐大的比表面積、高吸收效率和低毒性等優(yōu)點(diǎn)，在動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)中的使用范圍越來越廣泛。迄今為止有關(guān)納米硒在魚類上的應(yīng)用已有研究，而有關(guān)硒在蝦、蟹等甲殼類動(dòng)物上的報(bào)道限于無機(jī)硒和酵母硒，國內(nèi)未見納米硒在蝦蟹上的研究報(bào)道。本研究在飼料中添加納米硒，探討其對(duì)提高中華絨螯蟹生長、硒含量及營養(yǎng)組成等方面的作用，以期探索出納米硒在中華絨螯蟹飼料中適宜的添加量。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料制備

納米硒由中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)蘇州研究院提供，其硒的含量為1 000 mg/l。納米硒在飼料中添加量分別為0（陰性對(duì)照）、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/kg和1.6 mg/kg，另設(shè)一組酵母硒（陽性對(duì)照），添加量為1.0 mg/kg（為某企業(yè)在飼料中的正常添加量）。基礎(chǔ)飼料不添加任何形式的硒。實(shí)測(cè)飼料中粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量分別為38%和8%，基礎(chǔ)飼料配方見表1。各種原料經(jīng)粉碎后過80目的篩子，加入一定比例納米硒、其它礦物質(zhì)及維生素，充分混勻。制粒時(shí)加入食用油，在攪拌機(jī)中邊攪拌邊加水；再用絞肉機(jī)加工成直徑為2 mm的顆粒，于通風(fēng)處晾干后保存于-20℃冰箱中待用。

表1 基礎(chǔ)飼料組成（%）

1.2 中華絨螯蟹的養(yǎng)殖

實(shí)驗(yàn)所用的中華絨螯蟹購自蘇州市臨湖現(xiàn)代漁業(yè)產(chǎn)業(yè)園，體重為（4.5±0.4）g/只，選取個(gè)體活潑，四肢完整的蟹置于循環(huán)系統(tǒng)中暫養(yǎng)一周后，將所有的試驗(yàn)蟹平均分為7組，每組設(shè)置3個(gè)平行，每個(gè)平行40只蟹，隨機(jī)放入已編號(hào)的玻璃鋼水族箱（50 cm×60 cm×100 cm）中，分別飼喂本實(shí)驗(yàn)所配制的飼料，水溫（25±1）℃，溶氧（6.4±0.2）mg/l，每天早晚各投餌料1次，投喂量為中華絨螯蟹體質(zhì)量的2%，飼喂期間中華絨螯蟹取食正常，飼喂90 d后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3 硒含量的測(cè)定

按照GB 5009.93—2010的氫化物原子熒光光譜法測(cè)定飼料、肝胰腺和肌肉中硒含量，測(cè)定儀器為原子熒光光譜儀（型號(hào)：北分瑞利AFS-2200）。

1.4 生長性能的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)正式開始前和飼養(yǎng)結(jié)束后，測(cè)定各組蟹的體質(zhì)量和長度。將中華絨螯蟹擦干，用電子天平稱量其體質(zhì)量（精確到0.01 g），用游標(biāo)卡尺測(cè)量其體長（精確到0.01 cm）。計(jì)算存活率（SR）、特定生長率（SGR）、肥滿度（CF）和餌料系數(shù)（FC）。

SR（%）=Nt/N0×100；

SGR（%/d）=（LnWt-LnW0）/t×100；

CF（g/cm3）=Wt/L3；

FC=F/（Wt-W0）。

式中：N0——初始時(shí)蟹的數(shù)量（只）；

Nt——試驗(yàn)結(jié)束時(shí)蟹的數(shù)量（只）；

W0——初始平均體質(zhì)量（g）；

Wt——終末平均體質(zhì)量（g）；

t——養(yǎng)殖天數(shù)（d）；

F——消耗飼料質(zhì)量（g）；

L——蟹的體長（cm）。

1.5 全蟹營養(yǎng)成分的測(cè)定

飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)選取6只，擦干體表后全蟹放于粉碎機(jī)中攪碎，取出后放于105℃烘干，研磨成粉，過60目的篩子后用于粗蛋白、粗脂肪、灰分的測(cè)定。

全蟹營養(yǎng)組成的測(cè)定按照國標(biāo)法進(jìn)行，水分測(cè)定按照GB/T 6435—86，105℃烘干，失水法測(cè)定水分；粗蛋白測(cè)定按照GB/T 6432—94，凱氏定氮法測(cè)總氮；粗脂肪測(cè)定按照GB/T 6433—94，索氏抽提法測(cè)粗脂肪含量；灰分測(cè)定按照GB/T 6438—2007，用馬弗爐550℃灼燒法測(cè)灰分。

1.6 全蟹氨基酸與脂肪酸的測(cè)定

飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)選取4只，擦干體表后全蟹放于粉碎機(jī)中攪碎，冷凍干燥后用于氨基酸、脂肪酸的測(cè)定。

氨基酸測(cè)定：利用液相色譜法（HPLC）OPA FMOC柱前衍生法，于安捷倫液相色譜儀（型號(hào)：Ag-1100）上測(cè)定和分析氨基酸的種類和含量。

液相色譜條件：色譜柱為ODS HYPERSIL(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：40 ℃；流速：1.0 ml/min；載氣流量：2.5 L/min；進(jìn)樣量：10 μl。

脂肪酸測(cè)定：利用氣相色譜法于日本島津（型號(hào)：GC-2010）儀器上檢測(cè)，測(cè)定方法：GC/FID，按峰面積歸一化法確定各種脂肪酸占總含量的百分比。

氣相色譜條件：色譜柱為CP-WAX 30 M I.D.0.32 mm；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：250℃；程序升溫：100℃(3 min)→(10℃/min)→240℃(9 min)；載氣（N2）流量：3 ml/min；燃?xì)猓℉2）流量：47 ml/min；助燃?xì)猓ˋir）流量：400 ml/min；分流比：1∶15；進(jìn)樣量：0.5 μl。

1.7 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。所有數(shù)據(jù)均使用Excel和SPSS 18.0經(jīng)one-way ANOVA分析后進(jìn)行Duncan's多重比較法分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)的差異顯著性，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 納米硒對(duì)中華絨螯蟹生長性能的影響（見表2）

表2 飼料中納米硒添加量對(duì)中華絨螯蟹生長指標(biāo)的影響（n=30）

由表2可知，各納米硒添加量組中華絨螯蟹的特定生長率、存活率分別在1.41%～1.93%與41.33%～59.34%之間。隨著納米硒添加量的增加，中華絨螯蟹特定生長率、存活率均呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，其中0.2 mg/kg添加組的特定生長率為最高，顯著高于其他各納米硒添加組(P＜0.05)，與1.0 mg/kg酵母硒組相比差異不顯著(P＞0.05)；0.2 mg/kg添加組存活率顯著高于0對(duì)照組和1.6 mg/kg組(P＜0.05)，與其他組之間差異不顯著(P＞0.05)。0.2 mg/kg組的餌料系數(shù)最低，各組間差異不顯著(P＞0.05)。隨著納米硒含量的增加，肥滿度同樣呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，0.2 mg/kg組最大，各組間差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 納米硒對(duì)中華絨螯蟹肝胰腺和肌肉中硒含量的影響（見表3）

表3 飼料中納米硒添加量對(duì)中華絨螯蟹肝胰腺及肌肉中硒含量的影響（n=3，mg/kg）

由表3可知，添加硒飼料組的中華絨螯蟹肝胰腺中硒含量均顯著高于0對(duì)照組（P＜0.05）。其中0.1、0.2 mg/kg和0.4 mg/kg組間差異不顯著（P＞0.05），0.2、0.4、0.8、1.6 mg/kg納米硒和1.0 mg/kg（酵母硒）組組間差異不顯著（P＞0.05）。肌肉中的硒含量低于肝胰腺中硒的含量，且組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 納米硒對(duì)中華絨螯蟹全蟹營養(yǎng)成分組成的影響（見表4）

由表4可知，添加0.2 mg/kg納米硒組的全蟹粗蛋白含量顯著高于其他各組（P＜0.05），1.6 mg/kg組含量最低，顯著低于0.2、0.4、0.8 mg/kg納米硒組以及1.0 mg/kg酵母硒組（P＜0.05），其他各組間差異不顯著（P＞0.05）。粗脂肪含量各添加硒組間差異不顯著（P＞0.05），但均顯著高于0對(duì)照組（P＜0.05）。全蟹水分和灰分各組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 納米硒對(duì)中華絨螯蟹全蟹游離氨基酸組成的影響（見表5）

本研究共檢測(cè)到中華絨螯蟹的17種游離氨基酸，總含量在27.82～33.84 g/100 g（冷凍干燥后的物質(zhì)）之間，0.2 mg/kg組顯著高于0對(duì)照組（P＜0.05），但與1.0 mg/kg酵母硒組差異不顯著（P＞0.05）。必需氨基酸7種：賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、亮氨酸和纈氨酸，總量在10.15～12.15 g/100 g之間，占總游離氨基酸的35.61%～36.48%，其中0.2 mg/kg組最高，且顯著高于0對(duì)照組（P＜0.05）與其它組差異不顯著。鮮味氨基酸總量在10.15～16.81 g/100 g之間，占總游離氨基酸的36.48%～49.67%，添加納米硒后各組鮮味氨基酸均顯著高于0對(duì)照組（P＜0.05），其中0.2 mg/kg組最高，但與1.0 mg/kg酵母硒組差異不顯著（P＞0.05）。

表4 飼料中納米硒添加量對(duì)全蟹營養(yǎng)成分的影響(n=6，%)

表5 全蟹游離氨基酸組成（n=4，g/100 g）

2.5 納米硒對(duì)中華絨螯蟹全蟹脂肪酸組成的影響（見表6）

中華絨螯蟹全蟹脂肪酸組成中，飽和脂肪酸（C12∶0、C14∶0、C15∶0、C16∶0、C17∶0、C18∶0、C20∶0、C22∶0）所占比例為23.07%～25.29%，單不飽和脂肪酸（C16∶1、C18∶1、C20∶1、C22∶1）所占比例最高，占脂肪酸總和的一半以上，為58.02%～59.11%，0 mg/kg和1.6 mg/kg組顯著低于其他各組(P＜0.05)，多不飽和脂肪酸(C18∶2、C18∶3、C20∶4、C20∶5、C22∶5、C22∶6)所占比例為15.58%～16.43%，以0.2 mg/kg最大，與1.0 mg/kg酵母硒組相比差異不顯著(P＞0.05)，其中高不飽和脂肪酸（C20∶5、C22∶5、C22∶6）含量在2.87%～3.29%之間。

3 討論

3.1 納米硒飼料對(duì)中華絨螯蟹生長性能的影響

自1817年瑞典化學(xué)家Berzelus發(fā)現(xiàn)元素硒后，硒的生物學(xué)功能越來越深入地被人類所認(rèn)識(shí)。作為人體和動(dòng)物必需的微量元素，硒具有促進(jìn)生物體的生長發(fā)育、延緩衰老以及提高機(jī)體免疫力等作用，缺乏或過量均會(huì)對(duì)生物體產(chǎn)生影響，缺乏硒影響含硒酶的活性進(jìn)而影響機(jī)體穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致免疫力下降，誘發(fā)機(jī)體心肌壞死和大骨節(jié)病等疾病的發(fā)生；過量則會(huì)引起硒中毒，如呼吸窘迫、運(yùn)動(dòng)失調(diào)甚至死亡，且不同硒源吸收情況存在差異。郝小鳳在泥鰍飼料中添加0.2 mg/kg亞硒酸氫鈉對(duì)泥鰍粗蛋白含量沒有影響；鄧岳松等在飼料中分別添加0.3 mg/kg的亞硒酸鈉和蛋氨酸硒對(duì)尼羅羅非魚生長均無促進(jìn)作用，而0.3 mg/kg的納米硒可極顯著促進(jìn)羅非魚的生長；田文靜等在飼料中添加0.4～0.6 mg/kg酵母硒后才能顯著改善中華絨螯蟹的生長狀況和抗氧化能力。本研究發(fā)現(xiàn)在中華絨螯蟹飼料中添加0.2 mg/kg納米硒時(shí)，特定生長率、存活率顯著增加（P＜0.05），餌料系數(shù)達(dá)到最低，而且0.2 mg/kg納米硒組與1.0 mg/kg酵母硒組的養(yǎng)殖效果相近，這充分說明低劑量納米硒即可起到提高動(dòng)物生長性能的作用?？梢酝茰y(cè)，導(dǎo)致這一效果的原因可能為納米硒的比表面積大，中華絨螯蟹體對(duì)納米硒的吸收及利用效率高。

表6 全蟹脂肪酸組成（n=4，%）

3.2 納米硒飼料對(duì)中華絨螯蟹肝胰腺和肌肉中硒含量的影響

蘇傳福研究表明，草魚肝中硒含量隨著飼料中亞硒酸鈉濃度從0.04 mg/kg上升到1.29 mg/kg而顯著上升，但高于1.29 mg/kg后肝胰腺中硒含量差異不顯著。本研究結(jié)果表明，飼料中添加硒后蟹的肝胰腺中硒含量均顯著高于0對(duì)照組(P＜0.05)；在0～0.8 mg/kg之間，隨著硒添加量的提高，肝胰腺中硒含量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)；但添加到1.6 mg/kg時(shí)，肝胰腺中硒含量不再上升，說明肝胰腺對(duì)硒的吸收能力有限。肌肉中硒含量遠(yuǎn)低于肝胰腺，且各組間差異不顯著（P＞0.05），這與肝胰腺對(duì)硒的轉(zhuǎn)化生物硒的能力有關(guān)。這與Zhang Y X研究的飼料中硒含量與海洋魚肌肉中硒含量不呈線性關(guān)系的結(jié)論相一致。

3.3 納米硒飼料對(duì)中華絨螯蟹營養(yǎng)組成的影響

硒可以清除體內(nèi)過多的自由基，從而保護(hù)生物體免受自由基過多導(dǎo)致的核酸斷裂和不飽和脂肪酸的過氧化等危害，有利于機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)的積累。本研究結(jié)果顯示，飼料中添加一定量的納米硒后，有助于改善中華絨螯蟹的生長性能，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，增加了不飽和脂肪酸的積累量。與0對(duì)照組相比，添加0.2 mg/kg納米硒組能顯著提高中華絨螯蟹的粗蛋白含量及必需氨基酸含量，粗脂肪和不飽和脂肪酸含量也有所提高。

4 結(jié)論

納米硒能夠提高中華絨螯蟹的生長性能，促進(jìn)蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成和沉積，其生物學(xué)作用優(yōu)于有機(jī)酵母硒，在中華絨螯蟹飼料中最適宜添加量為0.2 mg/kg。

（參考文獻(xiàn)20篇，刊略，需者可函索）