■王翔宇 孫考仲 田 穎 崔 宇 張 磊 柏明娜 張玉科 牛淑玲

（1.吉林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，吉林長春 130062；2.吉林省永吉縣動物疫病預(yù)防控制中心，吉林永吉 132200；3.遼寧省農(nóng)機質(zhì)量監(jiān)督管理站，遼寧沈陽 110034；4.遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州 121001）

雞蛋在收集、分級、包裝、運輸、儲藏和加工等作業(yè)環(huán)節(jié)中都不可避免地受到載荷的作用，導(dǎo)致蛋殼產(chǎn)生裂紋和破裂，蛋殼破損所造成的損失率在6%～10%之間。尤其在蛋雞的產(chǎn)蛋后期，所產(chǎn)雞蛋的蛋殼變薄、破軟殼率增加。因此，研究如何提高產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋殼品質(zhì)具有重要的意義?？莶菅挎邨U菌是農(nóng)業(yè)部公布的12種可直接飼喂動物的飼料級微生物添加劑之一。吳俊鋒等(2012)試驗研究表明，枯草芽孢桿菌及其發(fā)酵豆粕能夠極顯著提高蛋黃顏色、降低蛋殼比例，使蛋殼厚度、蛋殼強度及蛋黃比例有所增加。李俊波等(2009)研究指出，在蛋雞日糧中添加枯草芽孢桿菌制劑具有顯著降低雞蛋破損率、提高蛋重和蛋殼厚度的趨勢。本試驗以產(chǎn)蛋后期海蘭褐商品蛋雞為研究對象，通過在基礎(chǔ)日糧中添加枯草芽孢桿菌，研究其對蛋品質(zhì)和蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響，旨在為改善產(chǎn)蛋后期蛋殼結(jié)構(gòu)、提高蛋殼品質(zhì)和降低雞蛋破損率提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

本試驗在長春市綠園區(qū)鵬宇養(yǎng)殖場內(nèi)進(jìn)行。選取380日齡健康、產(chǎn)蛋均勻的海蘭褐商品蛋雞480只，隨機分成2組，每組240只雞，組內(nèi)3個重復(fù)。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組在基礎(chǔ)日糧中添加500 mg/kg的枯草芽孢桿菌。預(yù)飼期為7 d，試驗期45 d。

1.2 試驗日糧

基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1?？莶菅挎邨U菌由沈陽博善英勝生物科技有限公司提供，其中枯草芽孢桿菌含量＞2.0×1010CFU/g，添加劑量按說明書，為500 mg/kg。

1.3 飼養(yǎng)管理

預(yù)飼期7 d，試驗期45 d，采用人工飼喂，每日喂料3次，喂料時間分別為6：00、11：00、16：00。每天15：00 收蛋。

1.4 測定指標(biāo)及方法

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4.1 蛋品質(zhì)的測定

分別于試驗的第1、3、5周，每周的前3 d，每天以每個重復(fù)為單位，隨機取蛋10枚，用于測定蛋品質(zhì)。雞蛋重量、蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位由蛋品質(zhì)測定儀EA-019（以色列奧卡品牌）自動地測量和計算；蛋殼強度用蛋殼強度測定儀EFR-01（以色列奧卡品牌）測定;蛋殼厚度由蛋殼厚度測試儀ESTG-1（以色列奧卡品牌）測試；蛋形指數(shù)用游標(biāo)卡尺進(jìn)行測定；蛋黃重的測定是將雞蛋小心打碎，仔細(xì)分離蛋黃蛋清，剪斷蛋黃上系帶，使其與蛋清完全分開，將蛋黃上的蛋清用濾紙吸干，然后稱重。蛋黃比例是蛋黃重占雞蛋總重的百分比。

1.4.2 蛋殼超微結(jié)構(gòu)的觀察

1.4.2.1 雞蛋殼樣品選取和處理

每組隨機選取6枚雞蛋，將雞蛋敲碎，去除蛋清、蛋黃等內(nèi)容物，先用自來水后用去離子水沖洗干凈，然后自然風(fēng)干后備用。

1.4.2.2 掃描電鏡制樣和觀察

本試驗用zeiss EVO18鎢絲燈掃描電鏡進(jìn)行觀察。將制備好的雞蛋殼小塊樣品，用導(dǎo)電膠帶黏于樣品臺上。黏好的樣品噴金之后，置于電鏡樣品倉中，在高真空下，對樣品各個部位，在不同倍率下分別進(jìn)行觀察拍照。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用LDS法進(jìn)行多重比較。試驗數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 枯草芽孢桿菌添加劑對蛋雞蛋品質(zhì)的影響(見表2)

表2 枯草芽孢桿菌添加劑對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

從表2可以看出，試驗組蛋重高于對照組5.28%，且差異極顯著（P＜0.01）；試驗組的蛋殼強度高于對照組22.21%，且差異顯著（P＜0.05）。同時，試驗組的蛋殼顏色、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)、蛋黃比例、哈氏單位相比于對照組均有提高的趨勢，但差異均不顯著（P＞0.05）。

2.2 枯草芽孢桿菌添加劑對雞蛋蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響

2.2.1 蛋殼外表面

通過電鏡觀察，兩組的蛋殼外表面如圖1～4所示。兩組的雞蛋殼外表面均有明顯的龜背狀裂紋，其上分布有大小不等的氣孔。在100×的顯微水平，對照組的蛋殼外表面的龜背狀裂紋較少且分布不均；試驗組的蛋殼外表面的龜背狀裂紋多且分布均勻，裂紋細(xì)而密。在1 000×的顯微水平，可以看到對照組蛋殼外表面的裂隙較寬，單位面積里裂隙較少；試驗組的裂隙較窄，單位面積里的裂隙較多。

圖1 對照組雞蛋殼外表面(100×)

圖2 試驗組雞蛋殼外表面(100×)

圖3 對照組雞蛋殼外表面(1 000×)

圖4 試驗組雞蛋殼外表面(1 000×)

2.2.2 蛋殼橫斷面(見圖5～圖6)

圖5 對照組雞蛋蛋殼橫斷面(250×)

圖6 試驗組雞蛋蛋殼橫斷面(250×)

電鏡觀察顯示，雞蛋殼的橫斷面由內(nèi)向外依次可分為：殼膜層、乳錐層、柱狀層、表面晶體層和表層。由圖5～6可看出，在250×的顯微水平，對照組的乳頭較少而且乳頭較寬；試驗組的乳錐層的突起結(jié)構(gòu)更加緊密，乳頭數(shù)較多而且乳頭較窄。柱狀層約占整個蛋殼厚度的二分之一，蛋殼的柱狀層由塊狀晶體單元組成,塊狀晶體單元相互連接增加了蛋殼的整體性,增強了蛋殼的耐壓強度。試驗組的柱狀層的晶體數(shù)明顯增多，排列更加復(fù)雜，為蛋殼強度的增強提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。表面晶體層約占整個蛋殼厚度的三分之一。該層由緊密排列的晶體組成，本試驗觀察到試驗組的表面晶體層結(jié)構(gòu)更加致密，進(jìn)一步增強了蛋殼的強度。

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌添加劑對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

本研究結(jié)果表明，試驗組的蛋重極顯著高于對照組（P＜0.01），試驗組的蛋殼顏色、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)、蛋黃比例、哈氏單位均優(yōu)于對照組,但差異均不顯著（P＞0.05）,這與李麗紅(2004)的試驗結(jié)果相一致。芽孢桿菌在腸道內(nèi)生長繁殖過程產(chǎn)生了乳酸或VFA,能使腸道內(nèi)pH值降低，而酸性環(huán)境促進(jìn)了Ca和P兩種礦物元素的電離，這是他們被吸收的必要條件。Ab?delqader A等(2013)發(fā)現(xiàn)，用1 g/kg的枯草芽孢桿菌飼喂產(chǎn)蛋后期的白殼蛋雞,其產(chǎn)蛋量、蛋重、蛋殼重量、蛋殼厚度、蛋殼密度相比于對照組都有所提高，這可能是添加枯草芽孢桿菌后，蛋雞的消化道環(huán)境更有利于Ca、P的吸收。本試驗發(fā)現(xiàn)：試驗組與對照組的蛋殼厚度雖無顯著差異,但試驗組的蛋殼強度顯著高于對照組（P＜0.05），關(guān)于枯草芽孢桿菌對蛋殼強度影響機理有待于進(jìn)一步探究。

3.2 枯草芽孢桿菌添加劑對雞蛋蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響

通過蛋殼外表面的照片看到，蛋殼在產(chǎn)出時就有裂紋區(qū),這些裂紋區(qū)很可能成為以后破裂的始點。通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)：試驗組蛋殼的外表面有明顯的程度不一的龜背狀裂紋,且裂紋細(xì)而密,對照組的裂紋稀而少。試驗組的乳錐層的突起結(jié)構(gòu)較緊密，乳頭數(shù)較多而且乳頭較窄，對照組的乳頭較少而且乳頭較寬；試驗組的柱狀層的晶體數(shù)明顯增多，排列更加復(fù)雜；而對照組的柱狀晶體數(shù)則較少；且試驗組的表面晶體層也更加致密。萬秋蓓等(2006)曾通過對海賽克斯雞蛋殼掃描電鏡的觀察來探索影響蛋殼強度的機理，試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)雞蛋殼強度的大小可能與殼膜層殼膜的厚度、殼膜纖維的粗細(xì),錐體層乳頭間空隙的大小以及覆蓋層上裂隙的深淺和數(shù)量有關(guān)。李琦章等(2011)對蛋殼超微結(jié)構(gòu)觀測記錄與蛋殼常規(guī)質(zhì)量指標(biāo)相關(guān)分析結(jié)果表明，蛋殼外表面的裂隙數(shù)、乳頭數(shù)均與蛋殼強度呈極顯著正相關(guān)；而裂隙寬、乳頭寬與蛋殼強度呈顯著負(fù)相關(guān)。本試驗也發(fā)現(xiàn)試驗組蛋殼超微結(jié)構(gòu)的變化對蛋殼強度有一定的影響，而關(guān)于枯草芽孢桿菌對蛋殼超微結(jié)構(gòu)影響的作用機制，也有待于進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

日糧中添加枯草芽孢桿菌可以提高雞蛋蛋殼厚度、改變蛋殼超微結(jié)構(gòu)、增強蛋殼強度。可見，日糧中添加適宜劑量的枯草芽孢桿菌對改善產(chǎn)蛋后期雞蛋的蛋品質(zhì)有一定的促進(jìn)作用。

（參考文獻(xiàn)11篇，刊略，需者可函索）