■聶 琴 周小輝 楊 凡 易建華 胡駿鵬 李 彪 戴晉軍

（安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌 443003）

消化率是評(píng)價(jià)飼料原料的可利用性和動(dòng)物對(duì)飼料原料可利用能力的綜合性指標(biāo)，對(duì)魚類飼料消化率的研究很多，目前測(cè)定消化率主要包括體外消化率和體內(nèi)消化率兩種方法（涂永鋒，2004）。體內(nèi)消化率測(cè)定法能夠比較真實(shí)地反映動(dòng)物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化情況，但體內(nèi)消化率測(cè)定法存在養(yǎng)殖周期長(zhǎng)、檢測(cè)費(fèi)用高、操作復(fù)雜等問題，且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)外界環(huán)境的要求較高，季節(jié)、溫度、操作方式等都會(huì)影響消化率的測(cè)定（孫敏杰，2011）。體外消化率測(cè)定法即模擬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的消化生理?xiàng)l件，以動(dòng)物消化道內(nèi)酶液或人工酶液為消化酶，利用酶催化反應(yīng)作用原理，對(duì)飼料物質(zhì)進(jìn)行離體消化水解作用（孫永泰，2005）。該法可在比較短的時(shí)間內(nèi)了解飼料原料的消化率數(shù)值，并能模擬每種魚類的腸道環(huán)境，對(duì)單一飼料進(jìn)行消化率數(shù)據(jù)測(cè)定，能較為準(zhǔn)確的判斷出魚類對(duì)具體飼料原料的消化吸收情況，具有操作簡(jiǎn)單、快捷等特點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)通過體外消化率測(cè)定，評(píng)估異育銀鯽對(duì)5種常見飼料原料及4種酵母產(chǎn)品（1種啤酒酵母粉、3種酵母水解物）的干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)體外消化率，以期為異育銀鯽對(duì)飼料原料的選擇提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 實(shí)驗(yàn)原料

實(shí)驗(yàn)飼料原料為：秘魯蒸汽魚粉、阿根廷肉骨粉、豆粕、花生粕、玉米蛋白粉、啤酒酵母粉（由青島七好生物技術(shù)飼料公司提供）；酵母水解物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（酵母水解物Ⅰ由安琪酵母股份有限公司提供，原料來源于糖蜜純培養(yǎng)的釀酒酵母；酵母水解物Ⅱ?yàn)槭袌?chǎng)收集、原料來源于生產(chǎn)啤酒后的酵母廢棄物；酵母水解物Ⅲ為市場(chǎng)收集、原料來源于生產(chǎn)酒精后的釀酒酵母廢棄物）。實(shí)驗(yàn)操作參照葉元土方法（2005），并作適當(dāng)改進(jìn)。8種原料經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后過80目標(biāo)準(zhǔn)篩，采用常規(guī)方法測(cè)定各原料的干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)含量（見表1）。體外消化率實(shí)驗(yàn)前經(jīng)80℃烘干處理，置于干燥器中備用。

表1 待測(cè)原料的營養(yǎng)組成（%）

1.2 酶粗液提取

市場(chǎng)購買異育銀鯽12尾，平均體重(258.6±26.7)g。不投餌暫養(yǎng)24 h以排出其腸道內(nèi)容物。常規(guī)解剖得到腸道，用PBS（pH值為7.4、濃度為0.2 mol/l的磷酸緩沖液）沖洗，濾紙吸干后稱重，按照腸道重量10倍加入PBS，玻璃勻漿器勻漿后在冷凍離心機(jī)中以4℃、6 000 r/min離心20 min，取上清液置冰箱中4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 離體消化

體外消化率實(shí)驗(yàn)采用“一步法”，即只模擬腸道消化條件（異育銀鯽為無胃魚）。準(zhǔn)確稱量飼料原料樣品各0.5 g放入帶塞三角瓶中，加入PBS緩沖液15 ml（28℃預(yù)熱），加入異育銀鯽腸道粗酶液5 ml，于28℃恒溫振蕩水浴鍋中以80次/min進(jìn)行振蕩酶解。為防止微生物滋生，反應(yīng)液中加入雙抗（青霉素、鏈霉素合劑）150 IU/ml，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)平行。離體消化12 h后終止反應(yīng)，離心取上清液，濾渣在80℃下烘至恒重并準(zhǔn)確稱重。測(cè)定消化過濾后各實(shí)驗(yàn)組殘?jiān)懈晌镔|(zhì)、粗蛋白的含量。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

樣品體外消化率（%）=（飼料樣品重量-濾渣樣品重）×100/飼料樣品重量；

蛋白質(zhì)體外消化率（%）=[（飼料樣品重量×樣品粗蛋白質(zhì)含量）-（濾渣樣品重×濾渣粗蛋白質(zhì)含量）]×100/（飼料樣品重量×樣品粗蛋白質(zhì)含量）。

1.5 數(shù)據(jù)處理和分析

2 結(jié)果與分析

數(shù)據(jù)如表2所示。干物質(zhì)消化率和蛋白質(zhì)消化率均在酵母水解物Ⅰ最高。異育銀鯽對(duì)9種飼料原料干物質(zhì)體外消化率由高到低依次為：酵母水解物Ⅰ＞酵母水解物Ⅱ＞酵母水解物Ⅲ＞魚粉＞啤酒酵母粉＞豆粕、花生粕＞玉米蛋白粉 ＞肉骨粉 。其中，魚粉與酵母水解物Ⅲ、啤酒酵母粉之間差異不顯著（P＞0.05），豆粕與花生粕之間差異不顯著（P＞0.05），其他各原料間差異顯著（P＜0.05）。異育銀鯽對(duì)9種飼料原料蛋白體外消化率由高到低依次為：酵母水解物Ⅰ＞酵母水解物Ⅱ＞豆粕＞玉米蛋白粉＞魚粉 ＞啤酒酵母粉、酵母水解物Ⅲ＞肉骨粉＞花生粕。其中，豆粕與魚粉、玉米蛋白粉之間差異不顯著（P＞0.05），啤酒酵母粉與酵母水解物Ⅲ、肉骨粉之間差異不顯著（P＞0.05），其他各原料間差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選用2種類型的飼料原料，即常規(guī)動(dòng)植物飼料原料（魚粉、肉骨粉、豆粕、花生粕、玉米蛋白粉）及酵母類原料（啤酒酵母粉，3種不同原料來源的酵母水解物）。離體條件下，在5種常規(guī)動(dòng)植物飼料原料中，異育銀鯽腸道消化酶粗提液對(duì)玉米蛋白粉、魚粉、豆粕的消化率優(yōu)于花生粕和肉骨粉；同時(shí)，豆粕、玉米蛋白粉的消化率與魚粉的接近，表明異育銀鯽對(duì)豆粕、玉米蛋白粉有很好的利用效果。已有研究表明，玉米蛋白粉替代飼料中75%魚粉對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能、飼料利用、蛋白酶活性和表觀消化率均無顯著影響（陳然，2009）。姜光明等（2009）研究認(rèn)為，玉米蛋白粉在異育銀鯽腸道酶液中的蛋白消化率高于魚粉，豆粕的蛋白消化率與魚粉無差異。因此，在開發(fā)異育銀鯽配合飼料的過程中，可以適當(dāng)?shù)卦黾佣蛊?、玉米蛋白粉等植物蛋白原料的用量，減少魚粉、肉骨粉等動(dòng)物蛋白質(zhì)原料的用量。對(duì)比前人研究結(jié)果，飼料原料干物質(zhì)和粗蛋白消化率之間在不同魚類中存在明顯不同，這可能是由于不同種魚腸道粗酶液中各類酶的比例或活性不同所致（劉紅梅，2010；王友慧，2005；夏晶，2009）。

表2 異育銀鯽對(duì)飼料原料的干物質(zhì)和粗蛋白體外消化率(%)

酵母是一類蛋白含量高、營養(yǎng)豐富的優(yōu)質(zhì)單細(xì)胞蛋白。干燥酵母粉作為蛋白原料在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用已有多年歷史（NRC，2011）。然而，研究數(shù)據(jù)表明，酵母粉因存在酵母細(xì)胞壁厚、消化酶難以進(jìn)入胞內(nèi)、營養(yǎng)成分未充分釋放等問題，降低了其營養(yǎng)吸收效率和使用價(jià)值（錢國英，2001）。通過現(xiàn)代生物發(fā)酵和酶工程技術(shù)對(duì)酵母進(jìn)行自溶酶和外源酶催化水解處理、再經(jīng)濃縮或干燥獲得的酵母水解物富含蛋白質(zhì)、維生素、小肽、核酸、酵母細(xì)胞壁多糖等營養(yǎng)成分，在一定程度上提高了其消化吸收利用率（賀淼，2013）。2013年農(nóng)業(yè)部規(guī)定，已將酵母水解物新增至《飼料原料目錄》，其應(yīng)用前景廣闊。本實(shí)驗(yàn)條件下，異育銀鯽對(duì)酵母水解物Ⅰ和酵母水解物Ⅱ的干物質(zhì)和粗蛋白消化率都優(yōu)于啤酒酵母粉和酵母水解物Ⅲ，這表明，經(jīng)自溶或外源酶水解，可有效促進(jìn)酵母細(xì)胞破壁、提高營養(yǎng)物質(zhì)消化利用率。然而，不同自溶或酶解工藝、以及不同原料來源均會(huì)造成酵母水解物的破壁、營養(yǎng)成分存在差異，進(jìn)而對(duì)消化率存在一定影響。

飼料原料的體外消化率與體內(nèi)消化率結(jié)果相比，操作方式快速、便捷，但體外消化率不可能完全模擬體內(nèi)消化環(huán)境。故本實(shí)驗(yàn)所測(cè)值只是相對(duì)消化率值，與體內(nèi)消化率存在一定的差異。目前關(guān)于水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)新型飼用原料——酵母水解物的消化利用率如何，究竟在什么條件下所測(cè)得的消化率更接近魚體內(nèi)消化系統(tǒng)的真實(shí)值，還有待于進(jìn)一步的深入研究。