閆海山

胸苷酸合成酶和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π在食管鱗癌中的臨床應(yīng)用

閆海山

目的 觀察食管鱗癌患者胸苷酸合成酶(TS)以及谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π(GST-π)表達(dá)情況, 總結(jié)此類表達(dá)的臨床意義。方法 48例食管鱗癌石蠟標(biāo)本作為研究組, 48例正常食管黏膜組織作為對(duì)照組, 以免疫組化法對(duì)兩組實(shí)施檢測(cè), 觀察TS與GST-π在兩組中的表達(dá)情況。結(jié)果 研究組的TS、GST-π陽(yáng)性表達(dá)率分別為43.75%、52.08%, 對(duì)照組則分別為18.75%、79.17%, 研究組的TS陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組(P<0.05), GST-π陽(yáng)性表達(dá)率則明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；研究組高分化鱗癌TS陽(yáng)性表達(dá)率低于中-低分化鱗癌(P<0.05)。結(jié)論 TS與GST-π可以有效判別是否發(fā)生食管鱗癌。

食管鱗癌；胸苷酸合成酶；谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π；臨床意義

目前, 臨床研究者主要通過(guò)免疫組化法對(duì)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè), 以掌握食管鱗癌的發(fā)作情況。本院此次對(duì)TS與GST-π進(jìn)行免疫組化分析, 比較其在食管鱗癌及正常食管黏膜組織中的差異, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年10月～2012年10月間在本院行手術(shù)切除治療的48例食管鱗癌患者的石蠟標(biāo)本作為研究組, 男41例, 女7例, 年齡36～75歲, 平均年齡(57.5±6.2)歲。腫瘤部位如下：5例為上段食管鱗癌, 27例為中段食管鱗癌, 16例為下段食管鱗癌；組織學(xué)分化為高分化鱗癌14例,中分化鱗癌24例, 低分化鱗癌10例；腫瘤分期如下：2例為Ⅰ期食管鱗癌, 24例為Ⅱ期食管鱗癌, 16例為Ⅲ期食管鱗癌, 6例為Ⅳ期食管鱗癌。另取48例正常食管黏膜組織標(biāo)本作為對(duì)照組, 均選自食管鱗癌5 cm以上部位, 男39例, 女9例；年齡38～72歲, 平均年齡(56.8±6.5)歲。兩組患者一般資料比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。

1.2 方法 選擇鼠抗人單克隆抗體, PV-9000試劑盒實(shí)施免疫組化法檢驗(yàn), 具體的步驟如下：①對(duì)臘片標(biāo)本進(jìn)行切割, 每片厚度為4～5 μm；采用多聚賴酸氨對(duì)玻片進(jìn)行處理, 將切割好的標(biāo)本固定于其上, 以二甲苯進(jìn)行脫蠟處理, 以梯度濃度乙醇實(shí)施水化處理；以3% H2O2對(duì)其進(jìn)行10 min的孵育, 然后將其取出, 置于TBS緩沖液, 進(jìn)行清洗(3次, 2 min/次)。②TS實(shí)施熱抗原修復(fù)：將玻片置于檸檬酸鈉溶液(濃度為10 mmol/L, pH值為6.0)之中, 并放在電飯煲中進(jìn)行30 min的加熱處理；處理完成后, 取出冷卻,冷卻至室溫, 再以TBS緩沖液對(duì)其加以清洗(3次, 2 min/次),滴加一抗。GST-π不進(jìn)行此番處理。③將滴加一抗后的玻片置于冰箱(4℃)中, 孵育1夜；取出玻片, 使其恢復(fù)到室溫, 再行TBS緩沖液清洗(3次, 2 min/次)。④依次將試劑1、試劑2滴加到玻片上, 分別進(jìn)行20 min的孵育及3次TBS沖洗；沖洗后, 置于DBA顯色試劑盒中, 5～10 min后, 在顯微鏡下對(duì)顯色結(jié)果進(jìn)行觀察。以蘇木素進(jìn)行復(fù)染, 鹽酸乙醇進(jìn)行分化, 并實(shí)施脫水、透明及封片處理, 之后, 將其放置在光鏡下進(jìn)行觀察。

1.3 臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 陽(yáng)性：胞漿、胞核二者中有其一或者全部呈現(xiàn)出棕褐色顆粒；強(qiáng)陽(yáng)性(計(jì)3分)：胞漿、胞核二者中有其一或者全部呈現(xiàn)出深棕色顆粒；弱陽(yáng)性(計(jì)1分)：胞漿、胞核二者中有其一或全部呈現(xiàn)出淡黃色顆粒；中度陽(yáng)性(計(jì)2分)：介于強(qiáng)陽(yáng)性與弱陽(yáng)性之間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TS表達(dá) 研究組48例中21例為陽(yáng)性, 表達(dá)率為43.75%；對(duì)照組48例中9例為陽(yáng)性, 表達(dá)率為18.75%；兩者陽(yáng)性表達(dá)率比較, 研究組顯著高于對(duì)照組(χ2=6.98, P<0.05)。高分化鱗癌陽(yáng)性表達(dá)率為21.43%(3/14), 中-低分化鱗癌為52.94%(18/34), 前者明顯低于后者, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.00, P<0.05)。

2.2 GST-π表達(dá) 研究組48例中25例為陽(yáng)性, 表達(dá)率為52.08%；對(duì)照組48例中38例為陽(yáng)性, 表達(dá)率為79.17%；研究組陽(yáng)性表達(dá)率明顯比對(duì)照組低(χ2=7.81, P<0.05)。高分化鱗癌陽(yáng)性表達(dá)率為64.29%(9/14), 中-低分化鱗癌為50.00% (17/34), 高分化鱗癌與中-低分化鱗癌之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.82, P>0.05)。

3 討論

當(dāng)前, 食管癌特效化療藥物主要包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇以及順鉑, 其中, 胸苷酸合成酶是5-氟尿嘧啶的主要分子靶點(diǎn), 而谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π是順鉑的介導(dǎo)。近年來(lái), 為掌握食管鱗癌特效治療方案, 國(guó)內(nèi)外研究者將研究的目光轉(zhuǎn)向TS與GST-π, 針對(duì)其表達(dá)結(jié)果以及預(yù)后效果開(kāi)展了諸多研究, 成為指導(dǎo)食管鱗癌治療的重要資料［1］。

研究發(fā)現(xiàn), 胸苷酸合成酶對(duì)于葉酸鹽的代謝功能具有重要價(jià)值, 它可以對(duì)脫氧尿苷酸進(jìn)行催化, 使其甲基化, 變?yōu)榫邆銬NA合成及修復(fù)功能的脫氧胸苷酸［2］。本院此次對(duì)48例食管鱗癌患者標(biāo)本及48例正常食管黏膜標(biāo)本進(jìn)行免疫組化分析, 結(jié)果顯示, 食管鱗癌標(biāo)本TS的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常組織的表達(dá)率(P<0.05), 且中-低分化鱗癌陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于高分化(P<0.05)。這一結(jié)果說(shuō)明, TS蛋白的具體表達(dá)狀況可以作為5-FU的敏感度篩選標(biāo)準(zhǔn), 以便于為高敏感者實(shí)現(xiàn)特效治療, 低敏感者實(shí)現(xiàn)其他藥物的治療。

GST是一類兼具解毒作用以及蛋白質(zhì)結(jié)合效能的同工酶, 包括α、μ、π等13種酶, 其中, GST-π和腫瘤之間的關(guān)系尤為密切, 受到相關(guān)研究者的大力關(guān)注。GST-π既可以順利地與抗癌癥藥物順鉑相互結(jié)合, 將其從患者細(xì)胞中移出, 還能夠?qū)⒀踝杂苫宄? 以便于降低放化療方案本身對(duì)癌癥患者的損害。食管鱗癌標(biāo)本GST-π的陽(yáng)性表達(dá)率低于正常食管黏膜組織(P<0.05)。證明GST-π的確具有重要的臨床表達(dá)意義。

就目前來(lái)看, 部分臨床研究者還針對(duì)食管鱗癌患者TS以及GST-π在年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況方面的表達(dá)差異實(shí)施了探究, 提出男性患者的TS陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于女性患者(P<0.05), 而不同的年齡、腫瘤部位、腫瘤T分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。GST-π在這幾方面的陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。此次研究因條件限制, 而未展開(kāi)對(duì)此方面的研究,以后還將逐步健全。

綜上所述, 食管鱗癌標(biāo)本的TS陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常食管鱗癌組織表達(dá)率, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), TS以及GST-π可作為醫(yī)師為食管鱗癌患者實(shí)施臨床診斷及用藥的參考指標(biāo)。

［1］ 唐悅,龔光明,柳璐璐,等.GST-π表達(dá)水平與人食管鱗癌耐順鉑的關(guān)系研究.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 24(8):30-34.

［2］ 吳慧,樊青霞,陳奎生.食管鱗癌組織GST-π和TOPO-Ⅱ表達(dá)及其相關(guān)性研究.中華腫瘤防治雜志, 2010, 17(9):669-672.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.12.026

2015-03-12］

458030 鶴壁市人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科