田立華

（山東省蒙陰縣人民醫(yī)院，山東 蒙陰 276200）

艾滋病的檢驗(yàn)技術(shù)現(xiàn)狀及應(yīng)用

田立華

（山東省蒙陰縣人民醫(yī)院，山東 蒙陰 276200）

艾滋?。ˋIDS）早期發(fā)現(xiàn)和診斷，是重要的防控其流行的手段，為重要的預(yù)防控制裁AIDS的組成部分。HIV檢測，對特異度及靈敏度均有較高的要求，這對早期診斷艾滋病病，使檢驗(yàn)準(zhǔn)確性提高意義重大，另外，檢驗(yàn)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，對抗艾滋病藥物療效的評價有促進(jìn)作用，可用于病程和病情變化的監(jiān)測，故如何使檢測靈敏性提高，對感染的情況及早發(fā)現(xiàn)，是主要的檢驗(yàn)診斷HIV的方向，高特異性、敏感性檢查，對促進(jìn)艾滋病診治有推動作用，臨床意義顯著。

艾滋?。粰z驗(yàn)技術(shù)；現(xiàn)狀；應(yīng)用

AIDS由人類免疫缺陷病毒（HIV）感染導(dǎo)致，為獲得性免疫缺陷綜合征，可引發(fā)免疫系統(tǒng)損害，對人類健康造成嚴(yán)重危害。HIV檢測，以AIDS病原體的診斷，檢出HIV攜帶者，指導(dǎo)抗病毒藥物的治療為主要目的，早期發(fā)現(xiàn)，并采取有效措施積極干預(yù)，對傳播途徑的阻斷意義重大［1］。目前，針對HIV病毒核酸、抗原和抗體的檢測，在高危人群檢測及流行病學(xué)調(diào)查中廣泛應(yīng)用，人體免疫細(xì)胞檢測，可為患者病情進(jìn)展的評估提供依據(jù)。檢測HIV耐藥性，有助于調(diào)整治療方案。隨著實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的進(jìn)步及分子生物學(xué)的進(jìn)展，病毒核酸檢測等診斷方法敏感性較好，極大的提高了疾病診療水平，現(xiàn)就艾滋病檢驗(yàn)技術(shù)概況總結(jié)如下。

1　HIV抗體檢測

通常在感染病毒2～12周，有HIV抗體出現(xiàn)，病毒抗感染至檢出抗體的階段定義為窗口期，雖隨醫(yī)療科技取得的巨大成就，檢測技術(shù)發(fā)展迅速，HIV血清學(xué)診斷目前仍為早期診斷艾滋病的主要依據(jù)。在血清學(xué)中，作用重要的檢測指標(biāo)，HIV抗體檢測，需具備可靠、準(zhǔn)確特點(diǎn)，此疾病的診斷可按確證、復(fù)檢、初篩試驗(yàn)劃分。因檢測目的存有差異，常應(yīng)用不同檢測方法行初篩試驗(yàn)及確證試驗(yàn)，如初篩者多應(yīng)用明膠顆粒凝集實(shí)驗(yàn)（PA）、酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）等，多采用免疫熒光試驗(yàn)（IFA）、免疫印跡試驗(yàn)（WB）等，現(xiàn)總結(jié)下不同檢驗(yàn)方法的特點(diǎn)［2］。

1.1HIV初篩試驗(yàn)分析：臨床目前檢測HIV抗體的方法多為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），1985年第一代HIV抗體檢測試劑研出，至今已為第四代。ELISA第一代檢測試劑有諸多缺陷存在，如因反應(yīng)板，多由病毒抗原或病毒裂解物包被，而樣品有程度不等的雜蛋白和宿主細(xì)胞成分感染存在，假陽性率居較高水平，影響了HIV感染情況的判斷?；蚬こ碳夹g(shù)的進(jìn)步，對HIV診斷技術(shù)的進(jìn)展有促進(jìn)作用，上世紀(jì)末，第二代試劑基于基因技術(shù)工程，有g(shù)p36、gp42等抗原涵蓋，目的基因可避免多種抗原混合，具單一性特點(diǎn)，故相較第一代試劑，特異性居較高水平，且使檢出時間提高。第三代檢測方法，代表技術(shù)為雙抗原夾心法，可對IgM抗體同時檢出，相較第二代，HIV抗體可提前在4～5 d檢出，在我國，目前已成為重要的初篩HIV方法。第四代試劑可對p24抗原及HIV抗體同時檢測，使檢測特異度和敏感度進(jìn)一步提高，窗口期確診率提高。但HIV病毒采用第四代試劑檢測，窗口期仍有2～3周［3］。雖ELISA法檢測效果明顯提高，但受技術(shù)本身的影響，無法對相互干擾的可能性排除，相較單獨(dú)抗原抗體分析，其靈敏度較差。而隨著其他選擇進(jìn)技術(shù)如時間分辨熒光免疫分析和化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的出現(xiàn)及成熟，對HIV患者綜合檢測，意義重大。

1.2確證HIV試驗(yàn)：因HIV初篩試驗(yàn)有一定程度的假陽性存在，故在初篩試驗(yàn)陽性的基礎(chǔ)上，需行確認(rèn)試驗(yàn)，復(fù)核患者的感染狀況，以對誤診排除。①免疫印跡試驗(yàn)（WB）：《艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》中，免疫印跡試驗(yàn)是唯一的確證HIV的方法，被認(rèn)為是對其他檢測方法效能檢驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)，WB相較ELISA法，針對不同HIV抗原組分，檢測，故特異度和靈敏度均居較高水平，但相較ELISA法，檢測WB的步驟有較高的復(fù)雜性，醫(yī)療費(fèi)用較高，多因誤判和操作不當(dāng)，引發(fā)假陽性。此外，HIV初篩復(fù)檢采用此技術(shù)，陽性樣本有4%～20%不確定率存在，同p24結(jié)合非特異性抗體相關(guān)，故判斷最終結(jié)果，需有經(jīng)驗(yàn)醫(yī)師操作［4］。②細(xì)胞免疫熒光檢測（IFA）：原理特異性一抗結(jié)合HIV感染細(xì)胞基礎(chǔ)上，將熒光標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗，染色陽性，即安陽性確定。操作簡單，特異性及敏感性比ELISA法更為理想，但此技術(shù)還需參考熒光顯微鏡的檢查特點(diǎn)對結(jié)果判斷，對個別患者標(biāo)本進(jìn)行分析，可能有非特異性熒光存在，故干擾了結(jié)果的評估。③放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）：采用此技術(shù)，是依據(jù)患者血清中的HIV抗體與同位素標(biāo)記的HIV蛋白結(jié)合，與葡萄球菌蛋白A反應(yīng)后，有免疫沉淀物產(chǎn)生，電泳所產(chǎn)生免疫沉淀物，應(yīng)用放射自顯影技術(shù)，對有無同位素標(biāo)記蛋白條帶進(jìn)行觀察，即可對感染切口明確。雖此檢驗(yàn)方法有較好的特異度和靈敏度度，但操作過程中試劑復(fù)雜，另外，因同位素放射性，接觸者需嚴(yán)格防護(hù)，使其廣泛應(yīng)用和推廣進(jìn)程在一定程度上受到阻礙。

2　HIV病原學(xué)檢測方法

HIV病原學(xué)檢測國內(nèi)常用的包括p24抗原檢測，病毒分離及培養(yǎng)，病毒核酸檢測等［5］。

2.1病毒分離培養(yǎng)特點(diǎn)：此檢驗(yàn)方法多在抗病毒藥物篩選、原始臨床毒種獲得中應(yīng)用，并可明確半數(shù)抑制藥物濃度及細(xì)胞半數(shù)感染單位等。病毒分離培養(yǎng)，是對有無感染HIV評估的最精確方案，但常規(guī)診斷中不應(yīng)用。HIV-1分離培養(yǎng)，以HIV-1感染者的靶細(xì)胞與PBMCS共培養(yǎng)方法最為常用。但HIV-1分離成功率在我國目前并不高。靶細(xì)胞類型、病程進(jìn)展、靶細(xì)胞活化狀態(tài)、病毒載量、CD4T淋巴細(xì)胞、輔助受體表達(dá)水平均對HIV-1分離產(chǎn)生影響，應(yīng)用多人份PBMCS共培養(yǎng)，將多種方法如PBMCS中CD8等剔除，使病毒分離成功率提高。在分離過程中，病毒本身內(nèi)在因素如細(xì)胞嗜性、感染力等可能起重要作用。AIDS相關(guān)研究中，HIV分離培養(yǎng)是關(guān)鍵基礎(chǔ)技術(shù)。對HIV生物學(xué)表型、藥物篩選、表型耐藥性、中和抗體親合特性等進(jìn)行研究，分離培養(yǎng)也為對HIV感染確診的手段。分析對分離培養(yǎng)造成影響的因素，靶細(xì)胞狀態(tài)為決定分離是否有效的關(guān)鍵，其活化狀態(tài)、敏感性，均會對病毒分離的效率造成影響。對充分活化的、新鮮的正常人PBMC進(jìn)行選擇，可使病毒分離率提高。另外，感染者含有的病毒載量高低，較大的影響了病毒分離的難易。再次，共培養(yǎng)中細(xì)胞體積和濃度對分離有一定影響。

2.2檢測HIV-1 p24抗原：HIV感染后，病毒RNA可最先檢出，后為p24抗原，抗體居最后［6］。p24抗原檢測多在窗口期及HIV-1抗體不確定期輔助診斷中應(yīng)用，并可參與病情進(jìn)展的判斷和抗病毒治療效果的平估，對嬰兒是否存在早期母嬰傳播進(jìn)行確定等。HIV急性感染期時，p24抗原即可出現(xiàn)，可對病毒復(fù)制情況間接反映。在確診HIV感染后，應(yīng)評估每位感染者的臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，以對HIV感染階段確定。目前應(yīng)用ELISA雙抗體夾心法檢驗(yàn)，但有較差的靈敏度，僅為備選輔助診斷方案，需隨訪和再行RNA檢測確證。目前超敏感酶免疫測定法（UEI）、免疫復(fù)合物裂解檢測法（ICD）、線性免疫酶測定（LIA）等技術(shù)，使p24蛋白檢出水平極大提高。

2.3核酸檢測：核酸檢測是HIV目前最為敏感的檢測方法，分析其檢測原理，是在聚合酶鏈反應(yīng)基礎(chǔ)上，測定RNA拷貝數(shù)，對HIV病情發(fā)展和波動評估。拷貝數(shù)越高，病情進(jìn)展越迅速。

3　小　結(jié)

綜上，AIDS早期發(fā)現(xiàn)和診斷，是重要的防控其流行的手段，為重要的預(yù)防控制裁AIDS的組成部分。HIV檢測，對特異度及靈敏度均有較高的要求，這對早期診斷艾滋病病，使檢驗(yàn)準(zhǔn)確性提高意義重大，另外，檢驗(yàn)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，對抗艾滋病藥物療效的評價有促進(jìn)作用，可用于病程和病情變化的監(jiān)測，故如何使檢測靈敏性提高，對感染的情況及早發(fā)現(xiàn)，是主要的檢驗(yàn)診斷HIV的方向，高特異性、敏感性檢查，對促進(jìn)艾滋病診治有推動作用，臨床意義顯著。

［1］赫恕.探析檢驗(yàn)人員在艾滋病檢驗(yàn)中的自我安全防護(hù)［J］.求醫(yī)問藥:下半月刊，2012，10（5）:88.

［2］李繁，廖存章，李遠(yuǎn)，等.艾滋病抗病毒治療療效檢驗(yàn)指標(biāo)的研究及應(yīng)用［J］.河北醫(yī)學(xué)，2013，19（9）:1371-1374.

［3］鄭培華，管廷武.醫(yī)院檢驗(yàn)科在艾滋病防治工作中的作用［J］.中國醫(yī)藥指南，2012，10（13）:397-398.

［4］陳玲，徐雯雯，韓妙君，等.CD3/CD28協(xié)同刺激誘導(dǎo)抵抗和清除HIV-1感染的檢驗(yàn)研究與細(xì)胞亞群分析［J］.國際免疫學(xué)雜志，2011，34（5）:297-301.

［5］張霞.HIV抗體檢驗(yàn)影響因素分析及對策［J］.疾病監(jiān)測與控制雜志，2011，5（6）:362-363.

［6］黃雁，陳興智.HIV實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)及效果分析進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥指南，2012，10（3）:51-53.

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1671-8194（2015）19-0279-02