蔡雨函,朱 玲,2,周遠(yuǎn)成,楊文宇,徐志文,2

抗流行性乙型腦炎病毒藥物的研究進(jìn)展

蔡雨函1,朱 玲1,2,周遠(yuǎn)成1,楊文宇1,徐志文1,2

流行性乙型腦炎(Japanese Encephalitis，JE)是由黃病毒科(Flaviridae)黃病毒屬(Flavivirus)流行性乙型腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus，JEV)引起的，在自然界中主要以豬為宿主，經(jīng)蚊傳播的一種蚊媒性人獸共患傳染病。該病主要流行于亞洲及西太平洋地區(qū)，嚴(yán)重威脅著人類健康，已成為人類腦炎疾病最主要的病因之一，并影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展，引起了世界性的廣泛關(guān)注，因此，流行性乙型腦炎的防治研究有著重要的實(shí)際應(yīng)用意義。到目前為止，尚無治療流行性乙型腦炎特效藥面市，但對抗流行性乙型腦炎病毒藥物的研究已有一定的進(jìn)展，而我國在這方面的系統(tǒng)介紹較少，本文就近10年來抗流行性乙型腦炎藥物及其作用機(jī)制的研究進(jìn)展做一綜述，旨在為流行性乙型腦炎的預(yù)防和治療提供參考。

流行性乙型腦炎；抗病毒；藥物

流行性乙型腦炎(Japanese Encephalitis，JE) 簡稱乙腦，是由黃病毒科(Flaviridae)黃病毒屬乙型腦炎病毒又稱日本腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus，JEV) 引起的一種嚴(yán)重威脅人畜健康的急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳染病[1]。該病主要分布于亞洲和西太平洋地區(qū)，以中國及東南亞地區(qū)流行最為嚴(yán)重。目前，JE已經(jīng)擴(kuò)散到西太平洋的一些島嶼，而我國除西藏、青海、新疆外，其他地區(qū)均有乙腦流行，約占世界60%的人口(近30億)生活在JEV流行地區(qū)[2]。據(jù)WHO估計(jì)，每年全世界JE發(fā)病人數(shù)為3～5萬人，其中造成1～1.5萬人死亡，但仍有大量乙腦病例沒有得到及時(shí)報(bào)道和列入統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，保守估計(jì)每年全世界 JE 發(fā)病人數(shù)達(dá)到7.5 萬[3]。JE 也是養(yǎng)豬業(yè)最重要的繁殖障礙性疾病之一，可引起母豬流產(chǎn)、木乃伊胎、弱仔，公豬則表現(xiàn)為睪丸炎，給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1]。因此，乙腦的防治研究有著重要的實(shí)際應(yīng)用意義。

當(dāng)前疫苗免疫預(yù)防仍是控制乙腦流行的主要措施，但疫苗本身具有一定的局限性，而且病毒的突變和種系的多樣性以及考慮到病毒與宿主的緊密關(guān)聯(lián)性等阻礙了疫苗的應(yīng)用。此外，養(yǎng)殖業(yè)中以疫苗預(yù)防為主，不提倡JE 的治療，但是對于已感染JE的人群，藥物治療才是根除乙腦病毒感染最有效的方法，因此，尋找具有預(yù)防和治療作用的抗乙腦藥物就顯得尤為重要和緊迫。從過去到現(xiàn)在病毒學(xué)家一直都在尋找可以有效防治JEV的藥物，雖然當(dāng)前還未有治療乙腦的特效藥面市，但是許多研究已經(jīng)有了一定進(jìn)展。目前我國在抗乙腦病毒藥物方面系統(tǒng)介紹的較少，本文就最近10年獲得的具有抗乙腦效果的藥物及其作用機(jī)制做一綜述，并按照藥物性質(zhì)進(jìn)行了簡單的分類，旨在為進(jìn)一步研究抗病毒途徑，研發(fā)出特效的治療藥物提供新的思路和方向。

1 人工合成的抗病毒藥

1.1 核酸靶向治療劑

1.1.1反義寡核苷酸 反義寡核苷酸技術(shù)是利用堿基互補(bǔ)原理，與靶mRNA或靶DNA互補(bǔ)配對，抑制或封閉該基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，或誘導(dǎo)RnaseH識別并切割mRNA，使其喪失功能。因此，通過反義分子定向針對病毒基因組來阻止病毒復(fù)制不失為一種有效治療JEV的方法。嗎啉反義寡核苷酸是一種不帶電的反義寡聚物，能抑制細(xì)胞內(nèi)mRNA的剪接過程，從而抑制基因的表達(dá)；同時(shí)具有良好的穩(wěn)定性、溶解度和細(xì)胞滲透性[4]。Anantpadma M 等[5]通過建立細(xì)胞模型及小鼠模型來評估肽共軛磷酸二胺嗎啉低聚物(PPMOs)抗病毒活性。結(jié)果顯示針對乙腦3′端環(huán)化序列(3′CSI)的PPMOs在Vero(上皮)、Neuro2A(神經(jīng)元)及J774E(巨噬細(xì)胞)中具有顯著的抗病毒活性。PPMOs的抗病毒效果在體內(nèi)也被證實(shí)。1周齡小鼠腦內(nèi)感染致死劑量的JEV后，連續(xù)5 d每12 h注射20 mg/kg的PPMOs，對小鼠有60%～80%的保護(hù)率，而且在用藥第2 d在小鼠腦組織中已經(jīng)檢測不到JEV。Nazmi A等[6]也通過小鼠試驗(yàn)證明嗎啉具有神經(jīng)保護(hù)作用，有效增加了動物的存活率。結(jié)果表明，嗎啉反義寡核苷酸具有顯著抗乙腦活性。

1.1.2 酶制劑 脫氧核酶(DNAzymes,Dzs)是一類具有催化活性的單鏈DNA分子，兼具反義寡核苷酸的反義抑制作用和核酶的靶向性剪切活性等雙重優(yōu)勢，而且穩(wěn)定性好。Appaiahgari M B等[7]針對JEV 3′-NCR合成Dz 3Dz，并在其3′端加上[poly-(G)10](3DzG)后證明具有顯著的抑制病毒在細(xì)胞及鼠腦中增殖的能力。這也是第一次在體內(nèi)試驗(yàn)中應(yīng)用Dzs治療病毒感染獲得成功，為Dzs在病毒感染治療中的應(yīng)用帶來了新的希望。

先前研究表明牛蛙核糖核酸酶(Rana catesbeiana ribonuclease，RC-RNase)具有抗腫瘤活性，Lee Y 等[8]報(bào)道其還具有抗乙腦活性，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)它是通過活化caspase-3、caspase-8及caspase-9 活性誘導(dǎo)被感染JEV BHK-21細(xì)胞凋亡，從而抑制病毒增殖。

1.1.3 SiRNA/ShRNA RNA 干擾是一種由雙鏈RNA介導(dǎo)的在轉(zhuǎn)錄后水平關(guān)閉相應(yīng)基因表達(dá)的序列特異性基因沉默機(jī)制，由Fire等于1998年在研究秀麗線蟲基因組計(jì)劃時(shí)首次闡明。目前已被廣泛用于傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領(lǐng)域，是一種有希望的抗病毒感染手段。許多研究已經(jīng)報(bào)道siRNA或shRNA能在體內(nèi)、體外抑制JEV 的復(fù)制[9-12]。目前JEV分有5個(gè)基因型，但之前研究的siRNA沉默機(jī)制主要是針對JEV 基因Ⅲ型發(fā)揮效應(yīng)，由于5種基因型病毒基因之間存在較高的遺傳變異，所以能抑制基因Ⅲ型的siRNA可能并不能抑制其它基因型病毒的復(fù)制。Wu Z 等[13]構(gòu)建了一個(gè)單一的microRNA-like 的多順反子，利用聚合酶Ⅱ啟動子同時(shí)表達(dá)9個(gè)針對JEV 保守序列設(shè)計(jì)的siRNA，結(jié)果顯示此多順反子能顯著降低所有基因型病毒含量。Kumar P等[14]報(bào)道針對JEV 和西尼羅病毒(West Nile Virus,WNV)共同保守的序列合成的siRNA能同時(shí)抑制這兩種病毒感染小鼠。這個(gè)結(jié)果清楚的表明，在設(shè)計(jì)藥物的靶位點(diǎn)時(shí)，一個(gè)單一的siRNA可以抑制多種病毒的混合感染，從而可以同時(shí)治療有共同癥狀的急性病毒感染。

1.2 核酸類似物 利巴韋林(ribavirin)是于1972年合成的核苷類廣譜抗病毒藥。最近研究表明，該藥的抗病毒機(jī)制除了抑制磷酸肌苷脫氫酶(IMPDH)和調(diào)節(jié)免疫外，它還可以通過RNA聚合酶結(jié)合于病毒基因組中，導(dǎo)致病毒基因組出現(xiàn)致命的基因突變，直接產(chǎn)生抗病毒效應(yīng)[15]。許多體外[16-17]及動物實(shí)驗(yàn)[18]證明利巴韋林對蟲媒病毒(包括JEV及WNV)的抗病毒效果是非常明顯的。在某些南亞國家，已經(jīng)有用利巴韋林治療乙腦的經(jīng)驗(yàn)[19-21]。不過，Kumar R等[21]報(bào)道當(dāng)兒童感染JEV后，口服利巴韋林并不能降低早期致死率?？诜邉┝康睦晚f林及利用其它給藥途徑治療乙腦的效果還需要進(jìn)一步研究。

1.3 細(xì)胞因子類 已有研究報(bào)道干擾素(interferon)的作用機(jī)制是通過作用于健康組織的細(xì)胞后產(chǎn)生抗病毒蛋白阻礙病毒復(fù)制，保護(hù)宿主不遭病毒破壞，從而抑制病毒播散，同時(shí)可調(diào)節(jié)免疫，增強(qiáng)T、B 細(xì)胞活性，促進(jìn)細(xì)胞的吞噬作用。近年研究表明乙腦的發(fā)病機(jī)制為病毒對神經(jīng)組織的直接侵襲作用和免疫損傷。因此, 用干擾素治療乙腦在理論上是可行的。目前，許多體外、動物實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明干擾素確有抗乙腦活性[16,18,22-23]。Yang T 等[24]報(bào)道I型干擾素是針對NS5蛋白阻礙JEV 復(fù)制。

JEV感染宿主后會快速產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，TNFa的增加會促進(jìn)病毒的增值，逃避宿主防御，從而引起病人的預(yù)后不良[25-26]。因此，能抑制TNFa的復(fù)合物可能會減少JEV感染的嚴(yán)重程度。己酮可可堿(Pentoxifylline)是已知的抗腫瘤壞死因子，多項(xiàng)調(diào)查研究表明，己酮可可堿對一系列的RNA和DNA病毒具有廣譜抗病毒活性。Sebastian L 等[27]通過體內(nèi)及體外試驗(yàn)研究顯示己酮可可堿以劑量依賴的方式抑制JEV在細(xì)胞中增殖，同時(shí)能保護(hù)小鼠免受致死性JEV的攻擊。其作用機(jī)制有可能是對病毒的組裝和/或釋放產(chǎn)生作用。

1.4 黃酮類化合物 最近研究表明NS1’蛋白在乙腦病毒神經(jīng)侵襲力方面發(fā)揮巨大的作用，而該蛋白是由位于NS1 C端，NS2基因下游的假結(jié)結(jié)構(gòu)(pseudoknot structure)引發(fā)的α-1核糖體讀碼框位移而產(chǎn)生。這個(gè)假結(jié)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性與核糖體移碼效率有關(guān)[28-29]，小分子緊密結(jié)合這一序列會干擾該假結(jié)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，從而影響NS1’蛋白的形成，因此此位點(diǎn)可能是潛在的設(shè)計(jì)抗乙腦病毒藥物的靶點(diǎn)。Zhang T 等[30]研究表明山奈酚和黃豆苷均能抑制乙腦病毒在BHK-21細(xì)胞中增值，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)其作用機(jī)制即是通過與fsRNA(frameshift site RNA)結(jié)合從而使病毒失活。

1.5 抗生素類 米洛環(huán)素(Minocycline)是廣譜抗生素-四環(huán)素成員，已報(bào)道其具有抗蟲媒病毒活性。Mishra M等[31]進(jìn)一步研究米洛環(huán)素在體外試驗(yàn)中抗乙腦病毒作用。結(jié)果顯示，米洛環(huán)素能降低神經(jīng)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞感染JEV 9 d后，病毒滴度大幅度降低。米洛環(huán)素還具有抗氧化作用，能顯著改善由乙腦感染引起的氧化應(yīng)激[32]；同時(shí)也能保護(hù)血腦屏障，阻止JEV的擴(kuò)散[33]。

1.6 其它 已有報(bào)道CSA(cyclosporin A)具有抗乙腦活性，Kambara H 等[34]研究表明CSA是通過抑制CypB與NS4A相互作用抑制病毒復(fù)制。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的葡萄糖苷酶抑制劑能夠?qū)σ恍﹥?nèi)質(zhì)網(wǎng)出芽病毒包括JEV發(fā)揮抗病毒效應(yīng)[35]。Sehgal N 等[36]發(fā)現(xiàn)用過氧化物酶體增殖物激活受體α激動劑-非諾貝特(Fenofibrate)預(yù)處理小鼠4 d，能保護(hù)80%小鼠免受JEV致死性病毒的攻擊，因此可以作為一種預(yù)防用藥。

2 天然藥物中獲得的抗病毒藥

天然產(chǎn)物特別是植物一直是新藥先導(dǎo)化合物和新藥發(fā)現(xiàn)的重要資源，目前大約有25%的新藥源于植物，從中篩選有效成分也成為當(dāng)前抗病毒新藥研究的熱點(diǎn)。

2.1 黃芪、連翹 洪文艷等[37-38]研究表明黃芩提取物及連翹濃縮煎劑在體外細(xì)胞模型中有一定的抗乙腦病毒感染作用，但對JEV無直接滅活作用，作用機(jī)理可能是通過干擾病毒對細(xì)胞的吸附及抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制增殖，且作用效果與用藥劑量呈正相關(guān)的劑量效應(yīng)依賴性。

2.2 板藍(lán)根提取物 Chang S等[39]通過體內(nèi)及體外試驗(yàn)分別研究了板藍(lán)根提取物(乙酸乙酯提取物和甲醇提取物)及其相關(guān)化學(xué)組成物(靛藍(lán)、靛玉紅、色胺酮、腺苷、白樺脂醇、羽扇豆醇及2-苯并惡醇)對乙腦的抑制作用。結(jié)果顯示板藍(lán)根提取物中有潛在的抗乙腦病毒作用的成分，其中，靛玉紅表現(xiàn)出更高的抗病毒活性，其作用機(jī)制可能是干擾病毒對細(xì)胞的吸附。

2.3 藻類提取物 近年研究表明硫酸多糖無論在體外還是體內(nèi)，都顯示了不同程度的抗病毒活性，尤其是與目前使用的其他抗病毒藥物相比，因其細(xì)胞毒作用較小而得到廣泛的關(guān)注。已有研究報(bào)道硫酸多糖具有抗乙腦活性。Chiu Y等[40]發(fā)現(xiàn)從石莼中提取的硫酸多糖(sulfated polysaccharide)能抑制JEV感染Vero細(xì)胞。在動物試驗(yàn)中，JEV感染 C3H/HeN小鼠后在第15 d會出現(xiàn)神經(jīng)行為的異常情況，于第17 d死亡。但是在感染JEV前用從石莼提取的硫酸多糖預(yù)處理能延遲發(fā)生的時(shí)間，因此能阻止小鼠死亡。其作用機(jī)制是通過阻止病毒吸附而發(fā)揮作用。Kazowski B等[41]報(bào)告從江蘺屬和海菜中提取的新的低程度聚合的硫酸糖(low-degree-polymerisation sulfated saccharides)比未消化的多糖(PS)抗病毒能力更強(qiáng)，其原因可能與低DP硫酸糖比PS更好吸收有關(guān)。

2.4 喜炎平注射液 喜炎平注射液是由穿心蓮總內(nèi)酯(穿心蓮甲素、乙素、丙素、丁素)、穿心蓮新苷、脫水穿心蓮內(nèi)酯等成分組成，經(jīng)過磺化工藝處理，提高了有效成分穿心蓮內(nèi)酯的純度，可減少臨床使用中藥注射劑的毒副作用。其對多種病毒有滅活作用，還具有抗病毒、抗菌、抗炎解熱，增強(qiáng)免疫，增加腎上腺皮質(zhì)功能等作用。涂晉文等[42]通過臨床觀察結(jié)果表明，喜炎平注射液治療能明顯縮短體溫下降時(shí)間和病程時(shí)間，改善昏迷和抽搐等癥狀。而且在治愈率和好轉(zhuǎn)率上都大于西藥對照組。喜炎平注射液因其安全有效，副作用少，有望成為新一代治療乙腦的藥物。

2.5 牛蒡子甙元 牛蒡子甙元(Arctigenin)具有抗氧化，抗炎，抗病毒作用。據(jù)報(bào)道，用牛蒡子甙元治療感染JEV的小鼠效果顯著，能明顯降低病毒誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡、小膠質(zhì)細(xì)胞的活化及活化的半胱天冬酶活性。報(bào)道還稱牛蒡子甙元能直接作用于大腦細(xì)胞，這樣更利于治療乙腦[43]。

2.6 酚類化合物 迷迭香素(rosmarinic acid)是發(fā)現(xiàn)于唇形科草本植物中的一種酚類化合物，具有抗炎及抗氧化功能。Swarup V等[44]報(bào)道在建立的小鼠模型中，迷迭香素能抑制JEV的復(fù)制，而且能改善由小膠質(zhì)細(xì)胞引發(fā)的繼發(fā)反應(yīng)。姜黃素(Curcumin)是從姜黃中提取的酚類化合物，已被證明在體外感染JEV研究中具有抗病毒效應(yīng)，它可能通過降低細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，減少促凋亡信號分子，恢復(fù)細(xì)胞膜完整性，調(diào)節(jié)相關(guān)應(yīng)激蛋白來發(fā)揮作用[45]。

3 展 望

目前臨床上針對感染乙腦的人群，還是以積極的對癥治療和細(xì)致的臨床護(hù)理為主，特別是對于重癥乙腦患者，高熱、抽搐、呼吸衰竭這三關(guān)的護(hù)理是降低病死率和減少后遺癥的關(guān)鍵。但是綜合的治療方法并不能有效治愈患者，目前全世界由乙腦引起的死亡率還是很高，通過特效藥治療加上適當(dāng)?shù)呐R床護(hù)理才是治療乙腦最有效的辦法。近年來有關(guān)抗乙腦藥物的研發(fā)是國際上生物學(xué)、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，經(jīng)過病毒學(xué)家的不懈努力，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種藥物具有抗乙腦活性，但是這些藥物作用效果評估主要停留在動物模型、細(xì)胞和分子水平上，臨床用藥的效果評價(jià)較少，因此，還需要進(jìn)一步進(jìn)行療效及相關(guān)藥理學(xué)研究，確證該藥物能夠治療感染乙腦的人群及動物，能夠?qū)⑵渫度氲脚R床應(yīng)用中。

總結(jié)以上抗乙腦藥物的作用機(jī)制顯示，其研究策略主要有以下3點(diǎn)：抑制病毒蛋白或基因功能、增強(qiáng)機(jī)體抗病毒免疫功能及作用于宿主細(xì)胞中參與病毒生命周期的“幫兇”分子。在臨床上，利用不同藥物的抗病毒機(jī)制及藥物間協(xié)同作用，將不同藥物聯(lián)合使用能夠提高藥物的治療效果，更有效地抑制病毒復(fù)制，降低藥物使用劑量，降低毒性和可能出現(xiàn)的藥物抗性。因此，聯(lián)合用藥將是乙腦臨床治療的發(fā)展方向。我國的植物資源極為豐富，具有應(yīng)用植物藥進(jìn)行疾病防治的悠久傳統(tǒng)。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多從植物中提取的產(chǎn)物具有抗乙腦的作用，應(yīng)該進(jìn)一步重視從植物源中尋找新的抗JEV藥物或先導(dǎo)化合物的開發(fā)研究。RNAi是近幾年新興起的研究熱點(diǎn)，由于其特異性高，安全性好，在抗病毒研究領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景，如果在理論和技術(shù)上加以完善，siRNA可能成為抗乙腦病毒特效藥物。MicroRNA( MiRNA)是 21 世紀(jì)生命科學(xué)研究的重大發(fā)現(xiàn)，其作用機(jī)制與siRNA相似，已有大量研究證明MiRNA可以對病毒起到調(diào)節(jié)作用，故可以發(fā)展成為一種新型的抗病毒藥物，而目前關(guān)于乙腦MiRNA的研究國內(nèi)外還是空白，因此這也是今后抗乙腦藥物研究的一個(gè)方向。隨著生物工程和制藥技術(shù)的飛速發(fā)展，乙腦的治療一定有很好的前景，安全、高效的抗JEV藥物將很快投入到臨床應(yīng)用。

[1]Solomon T. Recent advances in Japanese encephalitis[J]. J Neurovirol, 2003, 9(2): 274-283. DOI: 10.1080/13550280390194037

[2]Yu YX. Global distribution and reproduction of arbovirus disease[J]. Chin J Exp Clin Virol, 2005, 19(4): 401-407. (in Chinese) 俞永新. 蟲媒病毒病的全球分布和重現(xiàn)概況[J]. 中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志, 2005, 19(4):401-407.

[3]Ghosh D, Basu A. Japanese encephalitis-a pathological and clinical perspective[J]. PLoS Negl Trop Dis, 2009, 3(9): e437. DOI: 10.1371/journal.pntd.0000437

[4]He MM, Xue LY. The application of phosphorodiamidate morpholino oligomers in the research of gene function[J]. J Biol, 2012, 29(6): 77-83. DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2012.06.077 (in Chinese) 何萌萌, 薛良義. 嗎啉反義寡核苷酸在基因功能研究中的應(yīng)用[J]. 生物學(xué)雜志, 2012,29(6):77-83. DOI:10.3969/j.issn.2095-1736.2012.06.077

[5]Anantpadma M, Stein DA, Vrati S. Inhibition of Japanese encephalitis virus replication in cultured cells and mice by a peptide-conjugated morpholino oligomer[J]. J Antimicrobial Chemother, 2010, 65(5): 953-961. DOI: 10.1093/jac/dkq074

[6]Nazmi A, Dutta K, Basu A. Antiviral and neuroprotective role of octaguanidinium dendrimer-conjugated morpholino oligomers in Japanese encephalitis[J]. PLoS Neglected Trop Dis, 2010, 4(11): e892. DOI: 10.1371/journal.pntd.0000892

[7]Appaiahgari MB, Vrati S. DNAzyme-mediated inhibition of Japanese encephalitis virus replication in mouse brain[J]. Mol Ther, 2007, 15(9): 1593-1599. DOI: 10.1038/sj.mt.6300231

[8]Lee YH, Wei CW, Wang JJ, et al. Rana catesbeiana ribonuclease inhibits Japanese encephalitis virus (JEV) replication and enhances apoptosis of JEV-infected BHK-21 cells[J]. Antiviral Res, 2011, 89(3): 193-198. DOI: 10.1016/j.antiviral.2011.01.002

[9]Murakami M, Ota T, Nukuzuma S, et al. Inhibitory effect of RNAi on Japanese encephalitis virus replication in vitro and in vivo[J]. Microbiol Immunol, 2005, 49(12): 1047-1056. DOI: 10.1111/j.1348-0421.2005.tb03701.x

[10]Kumar P, Wu H, McBride JL, et al. Transvascular delivery of small interfering RNA to the central nervous system[J]. Nature, 2007, 448(7149): 39-43. DOI: 10.1038/nature05901

[11]Qi WB, Hua RH, Yan LP, et al. Effective inhibition of Japanese encephalitis virus replication by small interfering RNAs targeting the NS5 gene[J]. Virus Res, 2008, 132(1): 145-151. DOI: 10.1016/j.virusres.2007.11.014

[12〗Anantpadma M, Vrati S. siRNA-mediated suppression of Japanese encephalitis virus replication in cultured cells and mice[J]. J Antimicrobial Chemother, 2012, 67(2): 444-451. DOI: 10.1093/jac/dkr487

[13]Wu Z, Xue Y, Wang B, et al. Broad-spectrum antiviral activity of RNA interference against four genotypes of Japanese encephalitis virus based on single microRNA polycistrons[J]. PLoS One, 2011, 6(10): e26304. DOI: 10.1371/journal.pone.0026304

[14]Kumar P, Lee SK, Shankar P, et al. A single siRNA suppresses fatal encephalitis induced by two different flaviviruses[J]. PLoS Med, 2006, 3(4): e96. DOI: 10.1371/journal.pmed.0030096

[15]Crotty S, Andino R. Implications of high RNA virus mutation rates: lethal mutagenesis and the antiviral drug ribavirin[J]. Microbes Infect, 2002, 4(13): 1301-1307. DOI: 10.1016/S1286-4579(02)00008-4

[16]Crance JM, Scaramozzino N, Jouan A, et al. Interferon, ribavirin, 6-azauridine and glycyrrhizin: antiviral compounds active against pathogenic flaviviruses[J]. Antiviral Res, 2003, 58(1): 73-79. DOI: 10.1016/S0165-3542(02)00185-7

[17]Jordan I, Briese T, Fischer N, et al. Ribavirin inhibits West Nile virus replication and cytopathic effect in neural cells[J]. J Infect Dis, 2000, 182(4): 1214-1217. DOI: 10.1086/315847

[18]Leyssen P, Drosten C, Paning M, et al. Interferons, interferon inducers, and interferon-ribavirin in treatment of flavivirus-induced encephalitis in mice[J]. Antimicrobial Agents Chemother, 2003, 47(2): 777-782. DOI: 10.1128/AAC.47.2.777-782.2003

[19]Chong HT, Tan CT, Karim N, et al. Outbreak of Nipah encephalitis among pig-farm workers in Malaysia in 1998/1999:was there any role for Japanese encephalitis?[J]. Neurol J Southeast Asia, 2001, 6: 129-134.

[20]Chong HT, Kamarulzaman A, Tan CT, et al. Treatment of acute Nipah encephalitis with ribavirin[J]. Ann Neurol, 2001, 49(6): 810-813. DOI: 10.1002/ana.1062

[21]Kumar R, Tripathi P, Baranwal M, et al. Randomized, controlled trial of oral ribavirin for Japanese encephalitis in children in Uttar Pradesh, India[J]. Clin Infect Dis, 2009, 48(4): 400-406. DOI: 10.1086/596309

[22]Deng SY. Clinical observation on 52 cases of interferon in the treatment of Epidemic Encephalitis-B[J]. Infect Dis Inform, 2001, 14(2): 91. (in Chinese) 鄧思耀. 干擾素治療流行性乙型腦炎 52 例臨床觀察[J]. 傳染病信息, 2001,14(2):91.

[23]Shu Y, Xuan XJ. Clinical observation on 157 cases of interferon in the treatment of Epidemic Encephalitis-B[J]. Henan J Practical Nervous Dis, 2001, 4(1): 53-54. (in Chinese) 蘇英, 軒煦杰. 干擾素治療流行性乙型腦炎 157 例臨床觀察[J]. 河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志, 2001,4(1):53-54.

[24]Yang TC, Li SW, Lai CC, et al. Proteomic analysis for Type I interferon antagonism of Japanese encephalitis virus NS5 protein[J]. Proteomics, 2013, 13(23-24): 3442-3456. DOI: 10.1002/pmic.201300001

[25]Ravi V, Parida S, Desai A, et al. Correlation of tumor necrosis factor levels in the serum and cerebrospinal fluid with clinical outcome in Japanese encephalitis patients[J]. J Med Virol, 1997, 51(2): 132-136. DOI: 10.1002/(SICI)1096-9071(199702)51:2<132::AID-JMV8>3.0.CO;2-8

[26]Campbell IL. Cytokines in viral diseases[J]. Curr Opinion Immunol, 1991, 3(4): 486-491. DOI: 10.1016/0952-7915(91)90008-O

[27]Sebastian L, Desai A, Madhusudana SN, et al. Pentoxifylline inhibits replication of Japanese encephalitis virus: a comparative study with ribavirin[J]. Int J Antimicrobial Agents, 2009, 33(2): 168-173. DOI: 10.1016/j.ijantimicag.2008.07.013

[28]Melian EB, Hinzman E, Nagasaki T, et al. NS1′ of flaviviruses in the Japanese encephalitis virus serogroup is a product of ribosomal frameshifting and plays a role in viral neuroinvasiveness[J]. J Virol, 2010, 84(3): 1641-1647. DOI: 10.1128/JVI.01979-09

1986年，我在山東師范大學(xué)教育系讀研究生時(shí)，就系統(tǒng)地研究了捷克教育家喬治·洛扎諾夫（Georgi Lozanov）的暗示教學(xué)法及蘇聯(lián)教育家沙塔洛夫的綱要信號圖示教學(xué)法。1990年下半年，我與山東省鄒平縣教研室和淄博市臨淄區(qū)教研室合作，首先在初中生物、歷史、地理、數(shù)學(xué)教學(xué)中推廣綱要信號圖示教學(xué)法，在中小學(xué)的語文、英語、數(shù)學(xué)教學(xué)中推廣暗示教學(xué)法，簡稱“兩種愉快教學(xué)法實(shí)驗(yàn)”。

[29]Firth AE, Atkins JF. A conserved predicted pseudoknot in the NS2A-encoding sequence of West Nile and Japanese encephalitis flaviviruses suggests NS1’may derive from ribosomal frameshifting[J]. Virol J, 2009, 6: 14. DOI: 10.1186/1743-422X-6-14

[30]Zhang T, Wu Z, Du J, et al. Anti-Japanese-encephalitis-viral effects of kaempferol and daidzin and their RNA-binding characteristics[J]. PLoS One, 2012, 7(1): e30259. DOI: 10.1371/journal.pone.0030259

[31]Mishra MK, Basu A. Minocycline neuroprotects, reduces microglial activation, inhibits caspase 3 induction, and viral replication following Japanese encephalitis[J]. J Neurochem, 2008, 105(5): 1582-1595. DOI: 10.1111/j.1471-4159.2008.05238.x

[32]Mishra MK, Ghosh D, Duseja R, et al. Antioxidant potential of Minocycline in Japanese Encephalitis Virus virus infection in murine neuroblastoma cells: correlation with membrane fluidity and cell death[J]. Neurochem Int, 2009, 54(7): 464-470. DOI: 10.1016/j.neuint.2009.01.022

[33]Mishra MK, Dutta K, Saheb SK, et al. Understanding the molecular mechanism of blood-brain barrier damage in an experimental model of Japanese encephalitis: correlation with minocycline administration as a therapeutic agent[J]. Neurochem Int, 2009, 55(8): 717-723. DOI: 10.1016/j.neuint.2009.07.006

[34]Kambara H, Tani H, Mori Y, et al. Involvement of cyclophilin B in the replication of Japanese encephalitis virus[J]. Virology, 2011, 412(1): 211-219. DOI: 10.1016/j.virol.2011.01.011

[35]Wu SF, Lee CJ, Liao CL, et al. Antiviral effects of an iminosugar derivative on flavivirus infections[J]. J Virol, 2002, 76(8): 3596-3604. DOI: 10.1128/JVI.76.8.3596-3604.2002

[37]Hong WY, Tang BH, Liu JH, et al. Experimental study of Scutellaria baicalensis extract against Japanese encephalitis virus in vitro[J]. Med Inform, 2011, 24(01): 57-58. DOI: 10.3969/j.issn.1006-1959.2011.01.055 (in Chinese) 洪文艷, 唐博恒, 劉金華,等. 黃芩提取物抗乙型腦炎病毒的體外實(shí)驗(yàn)研究[J]. 醫(yī)學(xué)信息, 2011,24(01):57-58. DOI:10.3969/j.issn.1006-1959.2011.01.055

[38]Hong WY, Tang BH, Liu JH, et al. Experimental study of Fructus Forsythiae concentrated decoction against Japanese encephalitis virus in vitro[J]. Asia-Pacific Tradit Med, 2010, 6(12): 13-14. (in Chinese) 洪文艷, 唐博恒, 劉金華,等. 連翹濃縮煎劑抗乙型腦炎病毒的體外實(shí)驗(yàn)研究[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2010,6(12):13-14.

[39]Chang SJ, Chang YC, Lu KZ, et al. Antiviral activity of Isatis indigotica extract and its derived indirubin against Japanese encephalitis virus[J]. Evidence-Based Complementary Alternat Med, 2012, 2012: 925830. DOI: 10.1155/2012/925830

[40]Chiu YH, Chan YL, Li TL, et al. Inhibition of Japanese encephalitis virus infection by the sulfated polysaccharide extracts from Ulva lactuca[J]. Marine Biotechnol, 2012, 14(4): 468-478. DOI: 10.1007/s10126-011-9428-x

[41]Kazlowski B, Chiu YH, Kazlowska K, et al. Prevention of Japanese encephalitis virus infections by low-degree-polymerisation sulfated saccharides from Gracilaria sp. and Monostroma nitidum[J]. Food Chem, 2012, 133(3): 866-874. DOI: 10.1016/j.foodchem.2012.01.106

[42]Tu JW, Dong MJ, Liu ZY, et al. Clinical observation of Xiyanping injection and its effects on epidemic encephalitis-B[J]. J Nanjing Univ TCM, 2012, 28(5): 434-436. (in Chinese) 凃晉文, 董夢久, 劉志勇, 等. 喜炎平注射液治療流行性乙型腦炎臨床觀察[J]. 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2012,28(5):434-436.

[43]Swarup V, Ghosh J, Mishra MK, et al. Novel strategy for treatment of Japanese encephalitis using arctigenin, a plant lignan[J]. J Antimicrobial Chemother, 2008, 61(3): 679-688. DOI: 10.1093/jac/dkm503

[44]Swarup V, Ghosh J, Ghosh S, et al. Antiviral and anti-inflammatory effects of rosmarinic acid in an experimental murine model of Japanese encephalitis[J]. Antimicrobial Agents Chemother, 2007, 51(9): 3367-3370. DOI: 10.1128/AAC.00041-07

[45]Dutta K, Ghosh D, Basu A. Curcumin protects neuronal cells from Japanese encephalitis virus-mediated cell death and also inhibits infective viral particle formation by dysregulation of ubiquitin-proteasome system[J]. J Neuroimmune Pharmacol, 2009, 4(3): 328-337. DOI: 10.1007/s11481-009-9158-2

Research advances in antiviral drugs for Japanese encephalitis

CAI Yu-han1,ZHU Ling1,2,ZHOU Yuan-chen1,YANG Wen-yu1,XU Zhi-wen1,2

(1.AnimalBiotechnologyCenter,SichuanAgriculturalUniversity,Ya’an625014,China;2.KeyLaboratoryofAnimalDiseasesandHumanHealthofSichuanProvince,Ya’an625014,China)

Japanese encephalitis (JE), an insect-borne zoonotic infectious disease, is caused by Japanese Encephalitis Virus (JEV) that belongs to the genusFlaviviruswithin the familyFlaviviridae, and the most important hosts of which in nature is pigs. This disease occurs mainly in Asia and the Western Pacific region, and has become one of the most serious encephalitis diseases which threats to human and affects the development of pig farming industry. It causes great attention in global scale, therefore, it is of great actual significance to study the prevention and control of JE. So far, there is no specific antiviral drug available to treat JE, however, research in antiviral drugs for JE has some progress. The report on the antiviral drugs for JE is quite few in China. In this paper, we briefly review advances on the antiviral drugs for JE and its mechanism in the past 10 years, aiming at serving as a guide for prevention and control of this disease.

Japanese encephalitis; antiviral; drugs

Xu Zhi-wen, Email:abtcxzw@126.com

徐志文，Email: abtcxzw@126.com

1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物生物技術(shù)中心，雅安 625014； 2.動物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，雅安 625014

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.01.017

R978.7

A

1002-2694(2015)01-0077-06

2014-02-19；

2014-10-05

四川農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)秀碩士論文培育基金(YS2014006)；四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012NZ0001)

Supported by the Excellent Master Dissertation Fostering Foundation of Sichuan Agricultural University (No. YS2014006), and the Sichuan Provincial Science and Technology Support Program (No. 2012NZ0001)