張小芬 陶 春 強(qiáng) 欣 烏力吉白乙 張 娟 孫曉宇

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 028000)

吸煙和酗酒等因素都是促進(jìn)喉癌發(fā)展的重要因素。其他已被證明的危險(xiǎn)因素包括輻射暴露、人乳頭瘤病毒(HPV)感染、遺傳因素、空氣污染、慢性胃食道反流以及木材或金屬粉塵的職業(yè)暴露〔1〕。分化抗原簇70(CD70)、腫瘤壞死因子相關(guān)的細(xì)胞表面配體已被證實(shí)參與腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞免疫識(shí)別作用。在小鼠腫瘤模型中發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞與CD70轉(zhuǎn)染能夠增強(qiáng)小鼠抗腫瘤的免疫反應(yīng)〔2〕。已經(jīng)被證實(shí)表達(dá)于直腸癌細(xì)胞，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血T淋巴細(xì)胞。本研究將探討CD70在喉癌組織中的表達(dá)及其潛在的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取喉癌組織32例，其中男20，女12例，年齡52～75〔平均(64.3±7.4)〕歲。其中聲門型15，聲門上型17。對(duì)照組織采用喉返神經(jīng)損傷引起的喉麻痹病人的聲帶組織，男14例，女8例;年齡22～58歲。

1.2 免疫組織化學(xué)染色 CD70的抗體采用鼠抗人的IgG單克隆抗體，免疫組織化學(xué)試劑盒購置于武漢博士德生物公司，操作步驟按試劑盒說明進(jìn)行。將喉部分切除術(shù)手術(shù)取下的喉癌組織標(biāo)本及對(duì)照組織經(jīng)磷酸鹽緩沖液(PBS)反復(fù)沖洗，利用4% 的多聚甲醛固定，經(jīng)石蠟包埋后，用切片機(jī)以厚5 μm進(jìn)行切片。石蠟切片經(jīng)脫水后，以3%過氧化氫浸泡15 min消除內(nèi)源性過氧化酶活性。加熱修復(fù)抗原，冷卻后用山羊血清封閉抗原30 min后，加入鼠抗人的CD70單克隆抗體工作液，抗體濃度為1∶100，室溫孵育2 h后，緩沖液沖洗，并進(jìn)行鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(SABC)法免疫組織化學(xué)染色，經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色及蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片后進(jìn)行分析及

1.3 結(jié)果判定 至少隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野。依照陽性細(xì)胞數(shù)量，可分為:弱陽性(+，陽性細(xì)胞總數(shù)＜25%);中等陽性(，陽性細(xì)胞總數(shù)25%～49%);強(qiáng)陽性(，陽性細(xì)胞總數(shù)＞50%以上)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件行Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，喉癌組織32例中，CD70表達(dá)弱陽性為10例，中等陽性為15例，強(qiáng)陽性為7例，陽性率為100%。而對(duì)照聲帶組織中，僅有2例CD70表達(dá)為弱陽性，陽性率為9%。兩組有顯著差異(P＜0.05)。

3 討論

相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)，CD70是一個(gè)腫瘤壞死因子相關(guān)的細(xì)胞表面配體分子，參與抗腫瘤免疫反應(yīng)，是激活T細(xì)胞重要的協(xié)同刺激分子。CD40及CD70分子共同表達(dá)的腫瘤細(xì)胞生長速度放緩，凋亡率增加。吳晗等〔3〕利用RT-PCR檢測CD70在肝癌細(xì)胞系和肝癌組織的表達(dá)顯示CD70基因在肝癌中呈陽性表達(dá)，并可抑制Jurkat淋巴細(xì)胞的增殖活性，在肝癌細(xì)胞免疫逃逸中起了重要作用。類似的研究發(fā)現(xiàn) CD70基因在直腸癌中部分呈陽性表達(dá)，并同樣可以抑制淋巴細(xì)胞的增殖活性，可能也參與了直腸癌細(xì)胞免疫逃逸，可作為指導(dǎo)治療和預(yù)后判斷的參考指標(biāo)〔4〕。本研究證實(shí)了喉癌細(xì)胞可能通過表達(dá)CD70進(jìn)行免疫逃逸。該基因的表達(dá)可以作為潛在的生物標(biāo)志物用于喉癌的早期診斷和預(yù)測預(yù)后。此外，可以探討該基因的表達(dá)激活表達(dá)與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以便為部分喉癌患者量身定制免疫治療方案〔5〕。然而，CD70在喉鱗狀上皮細(xì)胞癌(LSCC)抗腫瘤免疫及轉(zhuǎn)歸相關(guān)性的研究還需要進(jìn)行長期隨訪，以便深入了解CD70的深入作用，為其應(yīng)用在喉癌的早期診斷及生物治療方面提供基礎(chǔ)。

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3 吳 晗，韓振龍，曹英林，等.CD70在肝癌中的表達(dá)及其對(duì)淋巴細(xì)胞增殖抑制作用的研究〔J〕.山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2008;46(1):27-35.

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