王文心 崔紅彬

（1 河南省商丘市第一高級中學，商丘 476000；2河南省商丘市食品藥品檢驗所，商丘 476000）

HPLC法測定銀杏芪血通膠囊中丹參酮ⅡA的含量

王文心1崔紅彬2

（1 河南省商丘市第一高級中學，商丘 476000；2河南省商丘市食品藥品檢驗所，商丘 476000）

目的 建立HPLC法測定銀杏芪血通膠囊中丹參酮ⅡA含量的方法。方法采用Eclipse XDB-C18色譜柱，甲醇—水（75∶25） 為流動相；流速1.0ml·min-1；檢測波長270 nm。結(jié)果 丹參酮ⅡA在0.022~0.154μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為97.86%，RSD=1.02%（n=6）。結(jié)論 本方法簡便、準確度高、重復(fù)性好可作為銀杏芪血通膠囊的質(zhì)量控制方法。

銀杏芪血通膠囊；高效液相色譜法；含量測定

銀杏芪血通膠囊是某醫(yī)院長期使用的協(xié)定處方制劑，該制劑由丹參、香附、桂枝、川牛膝等多味藥組成。具有活血行氣，溫經(jīng)通絡(luò)，消腫止痛之功效，用于骨質(zhì)增生引起的關(guān)節(jié)疼痛腫脹，活動受限，椎間盤突出，近關(guān)節(jié)損傷后遺癥。療效顯著，廣泛應(yīng)用于臨床。該制劑服用方便、經(jīng)濟實惠，為眾多患者所接受。為確保用藥的安全有效，本實驗根據(jù)處方中所含藥物成分及其理化性質(zhì)，采用HPLC法對處方中丹參所含的有效成分丹參酮ⅡA進行了含量測定，以對銀杏芪血通膠囊的質(zhì)量進行有效控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，AUW-220D電子分析天平，5210DT超聲處理器。銀杏芪血通膠囊 (由某醫(yī)院提供，批號：A、B、C)。丹參酮ⅡA對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110766-200518）；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Eclipse XDB-C18色譜柱 (4.6×150 mm)。流動相：甲醇—水（75∶25） 為流動相；流速1.0 ml·min-1；檢測波長270 nm；進樣量10 μl；柱溫：30℃；理論板數(shù)按丹參酮ⅡA計算不低于2000[1]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 丹參酮ⅡA對照品溶液的制備 精密稱定丹參酮ⅡA對照品約10 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為丹參酮ⅡA對照品儲備液，精密量取10 ml置另一100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，作為丹參酮ⅡA對照品溶液。

2.2.2 銀杏芪血通膠囊樣品溶液的制備 取銀杏芪血通膠囊約3.0 g，研細，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇35ml，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液。

2.2.3 銀杏芪血通膠囊陰性對照溶液的制備 取缺少丹參的其他味藥按處方工藝制成的銀杏芪血通膠囊陰性制劑3 g，置50 ml量瓶中，加甲醇35m l，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為銀杏芪血通膠囊陰性對照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 取2.2.1項下丹參酮ⅡA對照品溶液，以甲醇—水 （75∶25） 為流動相；流速1.0ml·min-1；檢測波長270 nm；分別進樣2、4、6、8、10、14 μl，以丹參酮ⅡA峰面積（Y） 對對照品進樣量（X）進行線性回歸，得回歸方程：Y=1.02×104X+9.63 r=0.9999。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA對照品進樣量在0.022~0.154μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 干擾試驗 分別取2.2項下制備的3種溶液，按照2.1項下的色譜條件進樣，得到3種溶液的色譜圖，結(jié)果在該色譜條件下丹參酮ⅡA對照品溶液、銀杏芪血通膠囊樣品溶液在17分鐘附近均出現(xiàn)了丹參酮ⅡA的色譜峰，而銀杏芪血通膠囊陰性對照溶液在相同的時間無色譜圖出現(xiàn)，說明制劑中的其他成分對丹參酮ⅡA的測定無干擾。見圖1。

2.5 精密度試驗 取上述丹參酮ⅡA對照品溶液，以甲醇—水 （75∶25） 為流動相；流速1.0m l·min-1；檢測波長270nm；每次10μl，重復(fù)進樣5次，測定丹參酮ⅡA的峰面積，計算5次峰面積值的RSD=0.96%(n=5)，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取上述銀杏芪血通膠囊樣品溶液，以甲醇—水 （75∶25） 為流動相；流速1.0 ml·min-1；檢測波長270 nm；分別在0、1、2、3、4、5、6、8、10h進樣測定，測定丹參酮ⅡA的峰面積，根據(jù)峰面積值，計算9次峰面積值的RSD=0.95%，說明在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 樣品含量測定 分別稱取不同批號的3批銀杏芪血通膠囊約3.0 g，研細，精密稱定，分別置50 ml量瓶中，加甲醇35ml，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液。以甲醇—水 （75∶25） 為流動相；流速1.0m l·min-1；檢測波長270 nm；各進樣10μl，按外標法計算丹參酮ⅡA的含量，結(jié)果見表1。

表1 3批銀杏芪血通膠囊中丹參酮ⅡA的含量

2.8 重復(fù)性實驗 稱取同一批號（A）的銀杏芪血通膠囊6份，按照樣品含量測定方法測定丹參酮ⅡA的含量為0.1377mg/g，RSD=0.98%（n=6）

2.9 加樣回收率試驗 分別取6份已知含量為0.1377 mg/g的銀杏芪血通膠囊約1.5 g，精密稱定，各置50 ml量瓶中，分別精密加入對照品儲備液2.00 ml，加甲醇35 m l，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液。以甲醇—水 （75∶25） 為流動相；流速1.0 ml·min-1；檢測波長270 nm；進樣量10 ul；分別進樣測定，結(jié)果見表2。從表2可以看出：6分加樣回收結(jié)果良好，平均回收率達到97.86%，且6分加樣回收率的RSD為1.02%。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果

3 討論

銀杏芪血通膠囊質(zhì)量標準[2]中只有對部分成分的理化及纖維鑒別，沒有對有效成分含量的測定，不利于控制該制劑的質(zhì)量，為了更進一步地控制銀杏芪血通膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定保證臨床療效，本方法選定了其中一味主藥丹參所含的有效成分丹參酮ⅡA作為檢測目標，參考有關(guān)文獻[3-6]，針對銀杏芪血通膠囊的制備工藝特性，以及丹參酮ⅡA在甲醇中有較好的溶解性的特點，為了確定可靠的提取方法，通過試驗比較了回流、超聲、索式提取等提取方法，結(jié)果測得三種方法結(jié)果基本一致，因為超聲處理30分鐘提取過程簡便、快速、準確可靠，所以最終選定了超聲處理30分鐘為本文提取方法，本文建立的高效液相色譜法測定丹參酮ⅡA含量的方法操作簡便，準確度高，雜質(zhì)對測定無干擾，重復(fù)性好，對控制銀杏芪血通膠囊的內(nèi)在質(zhì)量具有重要意義。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.2010年版.一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：70-71.

[2]河南省醫(yī)療機構(gòu)制劑標準.

[3]王湛.HPLC測定調(diào)經(jīng)活血片中丹參的含量[J].中外醫(yī)學研究，2010，8（22）：68-69.

[4]嚴紅，高楊，郭偉，等.不同產(chǎn)地丹參藥材中丹參酮ⅡA及丹參素的含量比較[J].天津藥學，2003，15（3）：10-12.

[5]郭志鵬，郭迎霞.HPLC法測定通神復(fù)腦丸中丹參酮ⅡA的含量[J].中國藥師，2009，12（11）：1666-1667.

[6]于百青，楊敏，孫鵬云.高效液相色譜法測定心舒丸中丹參酮Ⅱ_A含量[J].中國藥業(yè)，2012，21（13）：36-37.

Con ten t Determ ination of TanshinoneⅡA in Yinxing Qixuetong Capsu les by HPLC

WANGWenxin1,CUIHongbin2
(1.Shangqiu FirstSeniorHigh School,Henan Province,Shangqiu476000,China;2.Shangqiu InstituteforDrugControl,HenanProvince,Shangqiu476000,China)

Objective To establish a HPLCmethod to determine the content of Tanshinone Ⅱ A in Yinxing Qixuetong capsules.M ethods The chromatographic system consisted of C18 column,usingmethanol,waters(75∶25)asmobile phase.The contentwas detected at a wavelength of 270 nm,the flow rate was 1.0mlmin-1.Results The Tanshinone Ⅱ A had a good linearity in the range of 0.022～0.154 μg（r=0.9999） ,and the average recovery was 97.86%and RSD=1.02%（n=6）.Conolusion The established method was accuracy,sensitive and simple.It can be used for quality control of Yinxing Qixuetong capsules.

Yinxing Qixuetong capsules;HPLC;content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.21.079

1672-2779（2015）-21-0152-02

張文娟 本文校對：張文娟

2015-08-26）