馬曉慧

尖銳濕疣患者HPV感染類型和細(xì)胞免疫功能的分析

馬曉慧

【摘要】目的 研究尖銳濕疣（Condyloma Acuminatum，CA）患者感染的人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）基因型的狀況和分布特點(diǎn)，以及HPV亞型和外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的表達(dá)情況，分析尖銳濕疣患者感染人乳頭瘤病毒亞型與細(xì)胞免疫功能的關(guān)聯(lián)性，為臨床治療CA提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)，選擇81例明確診斷CA患者，治療前取患者皮疹皮屑通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）方法檢測HPV亞型；在治療和隨訪3個(gè)月的截止點(diǎn)采血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析淋巴細(xì)胞免疫功能，并與正常人群對照組進(jìn)行比較。結(jié)果單一亞型感染40例（49.38%），混合亞型感染41例（50.62%）。感染患者外周血T細(xì)胞與正常人群對照組比較，CD 4+細(xì)胞百分比降低，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD 8+細(xì)胞百分比升高，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD 4+/CD 8+比值低于正常人群，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 HPV亞型混合感染和細(xì)胞免疫功能異常是促使尖銳濕疣患者感染人乳頭瘤病毒的重要因素。

【關(guān)鍵詞】尖銳濕疣；人乳頭瘤病毒；細(xì)胞免疫

作者單位：450003鄭州，河南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

Analysis of HPV Infection Types and Cellular Immune Function in Patients With Condyloma

MA Xiaohui He’nan Province The People's Hospital Department of Laboratory, 450003 Zhengzhou, China

[Abstract]Objective To investigate condyloma acuminatum(common sexually transmitted disease, CA)in patients with human papilloma virus(human papillomavirus, HPV)genotype infection status and the characteristics of distribution and HPV subtypes, and peripheral blood T lymphocyte subsets and NK cell expression and clinical treatment of ca provide experimental basis. Methods According to the inclusion criteria, the choice of 81 cases of diagnosed patients with Ca, before treatment take rash dander by polymerase chain reaction(PCR)method for detection of HPV subtype; in treatment and followed up for 3 months to cut-off point of blood by flow cytometry analysis of lymphocyte immune function and with the normal population control groups were compared. Results 40 cases(49.38%)were infected by single subtype and 41 cases(50.62%)were mixed subtype. Infection in patients with peripheral blood T cells and

normal control group comparison, the percentage of CD 4+cells decreased, P<0.05, had difference statistically significance, CD 8+cell percentage increased, P<0.05, had difference statistically significance, ratio of CD 4+/CD 8+decreased, P<0.05, had difference statistically significance. Conclusion HPV subtype mixed infection and immune cell function anomaly is prompted condyloma acuminatum patients Infected with human papilloma virus is an important factor.

[Key words]Condyloma, Human papillomavirus, Cellular immunity

尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒（HPV）感染所致的，以肛門生殖器部位增生性損害為主要表現(xiàn)的性傳播疾病。其發(fā)病率逐漸增高，在我國居性傳播疾病第2位[1]。尖銳濕疣的發(fā)病原因與HPV基因型的感染狀況和分布特點(diǎn)及HPV型別、細(xì)胞免疫功能異常等有關(guān)。本研究通過檢測81例尖銳濕疣初診患者人乳頭瘤病毒 （HPV）基因型的狀況和分布特點(diǎn)及HPV亞型和外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的表達(dá)情況，探討尖銳濕疣患者HPV亞型感染與細(xì)胞免疫功能異常的關(guān)系，為臨床治療CA提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料

所有81例尖銳濕疣初診患者均來自2013年1月～2014年1月我院皮膚科門診，診斷符合衛(wèi)生部防疫司制定的CA標(biāo)準(zhǔn)。入選的81例CA患者為感染組，其中男48例，女33例，平均年齡（31±9.2）歲；對照組20例，均為本院健康志愿者，男12例，女8例，兩組之間在性別、年齡等方面對比，P＞0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2儀器和試劑

DA 7 600型擴(kuò)增儀（廣州中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司），流式細(xì)胞儀（FACS Canto II，美國BD公司）；HPV基因分型檢測試劑盒（廣州中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司），T/B/NK四色淋巴細(xì)胞免疫分型檢測試劑盒（美國BD公司）。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 治療前用拭子在贅生物表面稍用力刮拭少量組織液滲出或者剪切少量贅生物，取出后放入裝有2 ml細(xì)胞保存液的保存管中，沿刷柄折痕折斷，旋緊管蓋，-20℃保存待測HPV亞型。兩組均在入選后采集靜脈血2 ml，經(jīng)EDTA-K 2抗凝后待檢T淋巴細(xì)胞亞群。

1.3.2CA的治療方法 使用微波或電離子將肉眼可見生殖器贅生物清除，治療過程中盡可能保護(hù)正常皮膚，減少創(chuàng)面，局部糜爛創(chuàng)面外搽復(fù)方黃柏液或我院制劑3%聚維酮碘溶液。待7～10天皮損創(chuàng)面愈合后減少疣體復(fù)發(fā)，外涂干擾素凝膠或3%咪喹莫特乳膏。1.3.3實(shí)驗(yàn)方法 HPV亞型檢測參照試劑盒規(guī)定采用行PCR法檢測標(biāo)本。共檢測19種HPV基因亞型，包括16個(gè)高危型：16、18、3l、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、亞型CP 8 304型，和3個(gè)低危型：6，ll，43型。淋巴細(xì)胞（T/B/NK）免疫分型參照試劑說明書制作細(xì)胞懸液，用FACS Canto II檢測CD 3+總T細(xì)胞、CD 3+CD 4+輔助性T細(xì)胞、CD 3+CD 8+細(xì)胞毒T細(xì)胞、CD 16+56+NK細(xì)胞百分率等，計(jì)算CD 4/CD 8比值。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用單方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1CA的HPV基因亞型檢測

人乳頭瘤病毒（HPV）亞型感染構(gòu)成中，單一亞型感染40例（49.38%），混合亞型感染41例（50.62%），其中高危亞型＋低危亞型的類型占混合感染的73.17%（30/41），其余為單純高危亞型（4/41）和單純低危亞型（7/41）的混合感染；以低危型HPV 6/11感染為主，而單一或混合感染的高危亞型除HPV 16/18外，還出現(xiàn)51、52、53、31、33、39和CP 8 304。

2.2感染組和正常對照組外周血T淋巴細(xì)胞（百分率）比較

對比兩組外周血T淋巴細(xì)胞（百分率）檢測均值結(jié)果，見表2。感染組與正常對照組比較，CD 4+細(xì)胞百分率降低，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD 8+細(xì)胞百分率升高，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD 4+/CD 8+比值降低，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2感染組和正常對照組外周血T淋巴細(xì)胞（百分率）比較

對比兩組外周血T淋巴細(xì)胞（百分率）檢測均值結(jié)果，正常人群對照組CD 3+（%）、CD 4+（%）、CD 8+（%）、CD 4+/CD 8+分別為（70.64±9.32）、（39.80±5.63）、（30.63±3.99）、（1.40±0.25）；HPV感染組分別為（68.10±8.02）、（32.41±4.89）、（38.61±4.18、（0.93±0.31）。感染組與正常對照組比較，CD 4+細(xì)胞百分率降低，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD 8+細(xì)胞百分率升高，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD 4+/CD 8+比值降低，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　討論

尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒（HPV）引起的一種常見性傳播疾病。該病復(fù)發(fā)率高，HPV有不同的亞型。最常引起尖銳濕疣的HPV有6、11等。HPV在人體溫暖潮濕的條件下易生存繁殖，故外生殖器和肛周是最易發(fā)生感染的部位。臨床上CA患者，特別是難治性或復(fù)發(fā)性CA的出現(xiàn)，常與HPV基因型的感染狀況和分布特點(diǎn)，以及HPV型及宿主的免疫狀態(tài)等因素有關(guān)，尖銳濕疣患者細(xì)胞免疫功能異常導(dǎo)致HPV發(fā)生免疫逃逸，易引起尖銳濕疣的復(fù)發(fā)[2]。本次研究發(fā)現(xiàn)HPV感染型別和細(xì)胞免疫功能的變化在尖銳濕疣發(fā)病因素起著重要作用。本研究對81例臨床初次確診為尖銳濕疣的患者在治療前進(jìn)行HPV亞型檢測，最常見19種亞型檢測發(fā)現(xiàn)，HPV感染組患者混合感染的比例較高，感染類型以高危型＋低危型為主，提示混合高HPV感染是導(dǎo)致CA發(fā)生尤其是復(fù)發(fā)的重要因素之一。文獻(xiàn)表明[3]，單純或混合高危型HPV 16/18 型CA患者的復(fù)發(fā)率高于低危型HPV 6/11型患者，使病毒復(fù)制擴(kuò)大和感染時(shí)間延長。此外，E 6還可以結(jié)合干擾素調(diào)控因子，降低干擾素β表達(dá)功能，使HPV病毒逃逸正常免疫反應(yīng)。進(jìn)一步說明HPV高危亞型參與的混合感染能夠加強(qiáng)HPV病毒復(fù)制的協(xié)同作用，并且有利于HPV逃脫宿主免疫應(yīng)答。CA患者與正常人群對照組比較，CA患者CD 8+淋巴細(xì)胞百分比增加，CD 4+淋巴細(xì)胞百分比減少，CD 4+/CD 8+比值下降，表明機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降（Th 2占優(yōu)），抑制病毒增殖和誘發(fā)細(xì)胞毒CD 8+T細(xì)胞抗病毒的作用都降低，不能有效清除HPV。經(jīng)卡介菌多糖核酸等免疫

調(diào)節(jié)劑治療尖銳濕疣，可有效提高患者的免疫功能，外周血CD 4+T淋巴細(xì)胞以及CD 4+/CD 8+比值與治療前相比升高，而CD 8+T淋巴細(xì)胞降低，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。如何規(guī)范有效治療尖銳濕疣，預(yù)防和減少尖銳濕疣患者復(fù)發(fā)，是皮膚性病科包括婦科、泌尿外科醫(yī)生在日常門診中較為麻煩的問題。尖銳濕疣患者致病，特別是難治性或復(fù)發(fā)性CA的出現(xiàn)，常與HPV感染亞型，包括機(jī)體的細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)。本研究需要引起我們?nèi)粘ｉT診工作足夠重視的是尖銳濕疣患者感染亞型，尤其是由高危亞型或合并高危亞型的混合感染引起時(shí)，尖銳濕疣患病及復(fù)發(fā)的機(jī)率明顯增加，而檢測尖銳濕疣患者與正常人群比較CD 8+淋巴細(xì)胞百分比增加，CD 4+淋巴細(xì)胞百分比減少，CD 4+/CD 8+比值下降，提示與患者機(jī)體的細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)，而增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，則是可能減少CA發(fā)生，規(guī)范治療減少復(fù)發(fā)的關(guān)鍵。

參考文獻(xiàn)

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[3] 李彥，張守民，李振魯. 尖銳濕疣患者人乳頭狀瘤病毒感染細(xì)胞免疫功能的相關(guān)性研究[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014（12）：2874-2876.

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.26.055

【文章編號】1674-9308（2015）26-0078-03

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B

【中圖分類號】R725.5+3