趙春

疾病預(yù)防控制領(lǐng)域檢驗(yàn)中膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)的應(yīng)用探析

趙春

探析膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)在疾病預(yù)防控制領(lǐng)域檢驗(yàn)中的價(jià)值。分別將膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)分別應(yīng)用在不同細(xì)菌性疾病、病毒性疾病、寄生蟲(chóng)疾病及其他微生物疾病檢驗(yàn)中, 分析其在不同病菌中的應(yīng)用效果。膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)在多種疾病中具有明顯的檢測(cè)結(jié)果, 可為疾病診斷與治療方案的制定提供重要信息。膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)在多種疾病預(yù)防、檢驗(yàn)與控制中應(yīng)用效果良好。

疾病預(yù)防控制；檢驗(yàn)；膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)

膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)將酶免疫結(jié)合試驗(yàn)作為基礎(chǔ), 是一種固相標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù), 優(yōu)勢(shì)明顯, 如有單份測(cè)定、得出結(jié)果時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便等多種優(yōu)點(diǎn), 并將商品試劑排除, 在測(cè)定中不需任何儀器設(shè)備輔助, 幾分鐘后就可得出結(jié)果, 是目前臨床廣泛應(yīng)用的一種檢測(cè)技術(shù)［1］。本院為分析在疾病預(yù)防控制領(lǐng)域檢驗(yàn)中膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)的應(yīng)用價(jià)值, 將該技術(shù)應(yīng)用于不同細(xì)菌性、病毒性疾病檢驗(yàn)中?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)原理

膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)技術(shù)的檢測(cè)原理分析：以微孔濾膜為檢測(cè)載體, 對(duì)已知抗原或抗體進(jìn)行包被, 隨后把待檢標(biāo)本依次加入, 在濾膜的毛細(xì)管作用下, 使標(biāo)本中的抗原或抗體與膜上包被的抗原與抗體充分結(jié)合, 最后經(jīng)膠體金結(jié)合物達(dá)到本次檢測(cè)目的。按照不同的檢驗(yàn)裝置可將其分為GIFA(金免疫滲濾試驗(yàn))與GICA(金免疫層析試驗(yàn))。

2 在疾病預(yù)防控制領(lǐng)域檢驗(yàn)中膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)的應(yīng)用價(jià)值

2.1 鼠疫耶爾森菌 在鼠疫耶爾森菌檢測(cè)中使用快速金免疫滲濾法進(jìn)行檢測(cè), 具有特異性好的優(yōu)點(diǎn)；且在檢測(cè)中不和小腸結(jié)腸耶氏菌起明顯的交叉反應(yīng), 最低檢出限為2.4×105cfu/ml。其中在鼠疫耶爾森菌檢測(cè)中, 免疫層析法檢測(cè)的靈敏度為1×105cfu/ml, 使用F1抗體金探針檢測(cè)F1抗原的最低檢出限為10 μg/ml。

2.2 沙門(mén)菌 抗沙門(mén)菌處于封閉環(huán)境下, 采用抗原吸收法處理可使之其避免與其他腸道桿菌發(fā)生反應(yīng), 探針使用標(biāo)記膠體金溶膠制備而成, 然后使用選擇多膜復(fù)合法將膠體金溶膠制作成免疫層析條, 其中其靈敏度為12.1×106cfu/ml。因?yàn)樯抽T(mén)菌與其他桿菌之間無(wú)反應(yīng)發(fā)生, 所以檢測(cè)108～1011 cfu/ml菌懸液未出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。通過(guò)對(duì)沙門(mén)菌09抗氧采用快速免疫金滲濾法檢測(cè), 沙門(mén)菌09抗原單克隆抗體3-47-0及膠體金標(biāo)記親和純化的羊抗鼠IgG, 腸炎沙門(mén)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株靈敏度為6×104cfu/ml點(diǎn)?？梢允褂每焖倜庖呓饾B濾法檢測(cè)疾病中存在的09抗原的沙門(mén)菌, 同時(shí)在檢測(cè)時(shí), 其與其他陽(yáng)性菌、腸道桿菌等不發(fā)生反應(yīng)。

2.3 金黃色葡萄球菌 在金黃色葡萄球菌檢測(cè)中, 快速金免疫滲濾法檢測(cè)最低檢測(cè)下限為(3.3～6.1)×106cfu/ml。本次研究中主要是對(duì)12株大腸埃希菌與18株不產(chǎn)生毒素的金黃色葡萄桿菌進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可知, 各有1株產(chǎn)生了明顯的交叉反應(yīng), 其他均未出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

3 在病毒性疾病檢驗(yàn)中膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)的應(yīng)用價(jià)值

3.1 在艾滋病抗體中的應(yīng)用價(jià)值 在本次研究中, 主要對(duì)18家注冊(cè)艾滋病抗體快速檢測(cè)試劑實(shí)施了系統(tǒng)評(píng)價(jià)。在對(duì)300份強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè), 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可知, 試劑檢測(cè)靈敏度均為100%；在本次健康獻(xiàn)血員血液標(biāo)本中(共450份), 除去未參與本次檢測(cè)的3家試劑外, 其他15家特異度為96.9%～100%。259份血液標(biāo)本屬于高危人群, 均使用18家試劑進(jìn)行常規(guī)檢測(cè), 檢測(cè)靈敏度為73.6%～94.9%；1家特異性為58.7%, 其余均超過(guò)95.3%。

3.2 在流行性出血熱抗體檢驗(yàn)中 對(duì)160份流行性出血熱患者使用膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn), 患者血清結(jié)果均呈陽(yáng)性, 檢測(cè)靈敏度為97.9%。對(duì)黑線(xiàn)姬鼠、家貓血清及兔免疫血清標(biāo)本(共10份)進(jìn)行檢測(cè), 結(jié)果顯示均為陰性。對(duì)健康人群血清標(biāo)本(共80份)進(jìn)行檢測(cè), 其檢測(cè)結(jié)果也均為陰性；對(duì)220份鉤體病、乙腦、乙肝及其他出血性疾病樣本使用該技術(shù)進(jìn)行檢測(cè), 其結(jié)果同樣均為陰性；對(duì)腎綜合征出血熱(HFRS)患者血清標(biāo)本(共120份)中抗旱坦病毒IgM抗體經(jīng)膠體金免疫滲濾法實(shí)施檢測(cè), 其中3 d內(nèi)的32份病程中, 28份結(jié)果顯示為陽(yáng)性, 剩余超過(guò)4 d的88份病程中, 結(jié)果顯示為陽(yáng)性。

3.3 柯薩奇病毒檢測(cè) 由于科薩奇病毒對(duì)多種疾病的發(fā)生與發(fā)展均有重要作用, 因此在檢測(cè)薩奇病毒中使用柯薩奇病毒IgM抗體膠體金免疫層析診斷試紙條實(shí)施檢測(cè), 在本次檢測(cè)的血清標(biāo)本中(共72份), 將RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)作為評(píng)價(jià)依據(jù),膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)最終靈敏度為96.2%, 特異度為66.8%。

4 在病寄生蟲(chóng)病檢驗(yàn)中膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)的價(jià)值

血吸蟲(chóng)抗體使用快速免疫金滲濾法進(jìn)行檢測(cè), 其總靈敏度為96.8%, 另外, 急性患者血吸蟲(chóng)靈敏度為99.9%, 慢性患者靈敏度為97.8%, 晚期患者靈敏度為92.8%。對(duì)40例華支睪血吸蟲(chóng)病患者及198例健康人進(jìn)行檢測(cè), 結(jié)果顯示均為陰性?？焖倜庖呓饾B濾法的靈敏度、特異度及診斷效率和膠體金SEA-dipstick檢測(cè)方法一致。

5 膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)在其他微生物疾病檢驗(yàn)中的應(yīng)用

梅毒使用膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè), 我國(guó)膠體金免疫結(jié)合試劑盒的檢測(cè)靈敏度均高于日本富士公司的TPPA試劑與美國(guó)梅毒螺旋體特異性抗體膠體金法, 其靈敏度為72.5%。對(duì)70份孕婦血清、160份紅斑狼瘡患者血清及50份正常體檢者血清采用膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè), 其結(jié)果顯示均為陰性。

6 小結(jié)

膠體金顆粒的化學(xué)效應(yīng)及物理效應(yīng)具有獨(dú)特性, 因此在免疫學(xué)、生物學(xué)及醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。由于膠體金標(biāo)記對(duì)生物分子活性影響相對(duì)較小, 在多種生物分子中均為理想標(biāo)記物［2］。但由于膠體金免疫試劑缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn), 導(dǎo)致其檢測(cè)靈敏度及特異度存在一定差異, 因此需建立一套完善的膠體金制備質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系, 提高試劑質(zhì)量, 發(fā)揮其在疾病預(yù)防控制領(lǐng)域的檢測(cè)作用。

［1］ 章小雨, 戴曉愛(ài).免疫膠體金技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用與進(jìn)展.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué), 2014, 32(3):279-281.

［2］ 何金林.膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)在疾病預(yù)防控制領(lǐng)域檢驗(yàn)中的應(yīng)用.中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 9(11):1012-1013.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.204

2015-01-05］

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