戴宇，鄧赟，宋川霞，陳紅梅，胡佳，康敏

對照提取物的國內(nèi)外發(fā)展研究概況

戴宇，鄧赟，宋川霞，陳紅梅，胡佳，康敏

目的：對對照提取物的國內(nèi)外發(fā)展研究進行綜述。方法：就對照提取物在國內(nèi)外的發(fā)展概況及應用現(xiàn)狀進行了綜述，結(jié)合對照提取物在《中國藥典》( 2010 年版) 、歐洲藥典（7.0）、美國藥典（36）的應用現(xiàn)狀，就對照提取物展開討論并展望。結(jié)果：闡明了進一步推動對照提取物的發(fā)展對中藥國際化進程的積極影響。結(jié)論：中藥標準物質(zhì)中的對照提取物在中藥質(zhì)量控制中意義重大，成為中藥國際化的重要亮點。

對照提取物；發(fā)展；中國藥典；美國藥典；歐洲藥典

中藥標準物質(zhì)主要分為中藥化學對照品、對照提取物、對照藥材等，在中藥材和中成藥的質(zhì)量控制中被廣泛應用。對照提取物系指經(jīng)適當方法提取制備，含有多種主要有效成分或指標性成分，用于藥材（含飲片）、提取物、中成藥等鑒別或含量測定用的國家藥品標準物質(zhì)。它是一類非單體成分對照物，包括藥材提取對照物和揮發(fā)油對照物，要求其主要成分比例相對固定[1]，并提供對照提取物的來源、原料的科名、拉丁學名、藥用部位及有關的制備工藝、批號和提供單位，有顏色、氣味、溶解度、相對密度、折光率、旋光度、凝點等詳細描述，用于薄層色譜法或其他色譜鑒別以及高效液相色譜法的含量測定。中藥標準物質(zhì)對我國中藥質(zhì)量標準、檢測水平的迅速提高，中藥產(chǎn)業(yè)化、現(xiàn)代化進程的推進做出了重要貢獻，但在近幾年才提出的對照提取物方面，還有很多欠缺與不足。本文就對照提取物的概況及在國內(nèi)外發(fā)展、應用現(xiàn)狀進行綜述并進行展望，希冀為中藥標準物質(zhì)研究科學化、完善化、標準化提供一定參考。

1 對照提取物在國內(nèi)的發(fā)展概況

2005年版《中國藥典》首次收載了對照提取物，共11種，分別為廣藿香油、木香揮發(fā)油、烏靈菌粉、發(fā)酵蟲草菌粉（CS-C-Q80）、穿龍薯蕷皂苷提取物、總銀杏酸、黃山藥皂苷提取物、銀杏葉提取物、溫莪術油、薄荷素油、檀香油[2]。2010年版《中國藥典》增加了5種[3]，分別為云南白藥提取物、八角茴香油、牡荊油、松節(jié)油、三七總皂苷，共計16種。但對照提取物占中藥標準物質(zhì)總數(shù)量的比例極少，僅為1.88%。隨著2015年版《中國藥典》修訂工作進程的不斷推進，預計將有更多的對照提取物被收載和應用。

目前，中國藥品生物制品檢定院已發(fā)放了20種對照提取物，分別為：銀杏葉對照提取物、穿龍薯蕷皂苷提取物、三七總皂苷、三七莖葉皂苷、人參莖葉皂苷、黃山藥皂苷提取物、金龍膽草提取物、荊芥油、生姜油、莪術油、八角茴香油、魚腥草油、牡荊油、小茴香油、紫蘇油、肉桂油、薄荷素油、烈香杜鵑油、月見草油、薏苡仁油。根據(jù)中藥對照提取物應用現(xiàn)狀，將其分為3類: ①藥材或揮發(fā)油對照提取物以及一些成方制劑。主要用于原藥材提取物或含原藥材中成藥的薄層鑒別，相當于同時采用多個化學對照品進行鑒別，與單一對照品相比，提高了鑒別的專屬性，與對照藥材相比，簡化了制備過程。比如三七總皂苷、牡荊油、松節(jié)油、銀杏葉對照提取物、薄荷素油分別用于它們對應提取物的鑒別；八味檀香散、八味清心沉香散用檀香油進行薄層鑒別；地奧心血康膠囊（片）用黃山藥皂苷對照提取物進行薄層鑒別。②組分對照提取物，用于待測樣品中某類組分鑒別或色譜峰定位，比如銀杏葉提取物、銀杏葉片、銀杏葉膠囊質(zhì)量標準中總銀杏酸檢查項下各色譜峰的定位; ③標示了多個待測成分含量的對照提取物用于定量分析，比如標示槲皮素、山柰素、異鼠李素含量的銀杏葉對照提取物用于銀杏葉提取物、銀杏葉片、銀杏葉膠囊總黃酮苷的含量測定或者標示白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A，銀杏內(nèi)酯B 和銀杏內(nèi)酯C 含量的銀杏葉對照提取物用于銀杏葉提取物、銀杏葉片、銀杏葉膠囊萜類內(nèi)酯的含量測定[4]。

近三年內(nèi)先后有學者將對照提取物應用于中藥的質(zhì)量控制，如劉紹勇[5]等人利用對照提取物作為參考物質(zhì)，對金銀花藥材進行多指標含量測定，效果滿意，進一步證實了該方法用于中藥材質(zhì)量控制具有可行性。薛翠娟[6]等人采用對照提取物法測定葛根飲片中5種成分含量，結(jié)果顯示葛根對照提取物可以用于葛根藥材的質(zhì)量控制，也初步驗證了對照提取物在中藥應用中的可行性。但是關于對照提取物的應用還在探索、推行、驗證其可靠性和可行性的階段，相關報道極少。

2 對照提取物在國內(nèi)中藥質(zhì)量控制中的應用

2.1 在中藥飲片質(zhì)量控制方面的應用

經(jīng)統(tǒng)計，2010版《中國藥典》飲片質(zhì)量控制中應用的中藥化學對照品共400種，占飲片質(zhì)量控制中對照物質(zhì)總數(shù)的62.5%，但中藥化學對照品存在分離難度大，單體不穩(wěn)定，供應價格高，供應數(shù)目有限且所測成分單一等缺點，因此在中藥材的多指標質(zhì)量控制中應用對照提取物進行研究是一種新的趨勢。中藥飲片成分多樣且復雜，以單體化學對照品控制飲片質(zhì)量，所提供的信息遠遠達不到整體質(zhì)量控制的目的，這與中醫(yī)整體觀的思想不相符。對照提取物相對于中藥化學對照品和對照藥材有專屬性較強、配制操作簡單、價格低等優(yōu)勢。對照提取物可以應用于薄層色譜法，彌補對照藥材不能體現(xiàn)飲片炮制前后不同的缺點，還能應用于液相、氣相色譜等的鑒別。同時，在含量測定中對照提取物可以標示多個單體成分含量，達到“一標多測”的目的。因此，推行以飲片對照提取物為對照品的質(zhì)量評價體系，可以完善飲片質(zhì)量標準，解決部分飲片標準缺失和炮制加工后成分改變而標準未相應改變等問題。目前，2010版藥典收載的飲片質(zhì)量標準中僅薏苡仁油1種對照提取物[7～8]。

2.2 在中成藥質(zhì)量控制方面的應用

中成藥（包括現(xiàn)代中藥制劑）是中醫(yī)學的重要組成部分，其組成藥味多，成分復雜，對其進行鑒別和質(zhì)量控制比較困難。文獻調(diào)研顯示，每個中藥制劑建立鑒別方法，采用最多的就是薄層色譜法，以對照品或?qū)φ账幉臑閷φ眨瑫r設置陰性對照用于考察方法的可靠性。少數(shù)品種也使用試管反應、顯微鑒別或HPLC法。質(zhì)量控制方法多數(shù)采用測定其中一種藥物的主要成分或有效成分的含量，但中成藥是在中醫(yī)藥理論指導下形成的，是一個極其復雜的系統(tǒng)，含有多種化學成分。因此，僅用其中一味藥的某個化學成分作用來說明整個制劑的藥效是不充分、不合理的，是不符合中醫(yī)藥整體觀念理論的。盡管從2005年《中國藥典》已發(fā)布了對照提取物法主要用于成方制劑鑒別和質(zhì)量控制，但是在實際運用中僅有幾篇文獻報道。由此可見，更多的對照提取物及其標準的建立已經(jīng)成為刻不容緩的任務。

由于對照提取物是混合物，不穩(wěn)定單體成分在混合物中穩(wěn)定性得以提高。雖然2005 年版《中國藥典》中已經(jīng)提出了對照提取物的概念，但是對照提取物在《中國藥典》中的收載從2005年到2010年僅增加了5種，且其在中藥含量測定及質(zhì)量控制中的規(guī)范化應用目前沒有研究報道，可見其發(fā)展速度緩慢，但是對照提取物的應用必將是中醫(yī)藥行業(yè)的發(fā)展趨勢，這將為我們提供一個很廣闊的研究空間。同時，在以多成分質(zhì)量控制為研究趨勢的大環(huán)境下，對照提取物測定法將有更大的發(fā)展空間[9]。

3 對照提取物在國外的發(fā)展應用概況

通過對美國藥典（US Pharmacopoeia，USP）和歐洲藥典（European Pharmacopoeia，EP）的查閱和相關文獻的分析，可知：在國外藥典提出的對照提取物( 或?qū)φ罩苿? 被定義為二級參考物質(zhì)，必須要有一個和它相關的一級標準來約束它，并用一級標準對其進行定期或?qū)崟r的校準。如要對對照提取物色譜進行定期校正并進行多成分的鑒別，則應提供其圖譜。在對照提取物的說明中標明需檢測的成分和相應的圖譜，并進行系統(tǒng)適用性實驗，調(diào)整實驗參數(shù)確保分析方法與對照圖譜的一致。隨時校正測定條件，使用者可較簡單地操作，得到與標準圖譜一致的信息( 色譜峰大小，位置等) ，從而獲得樣品較全面的信息。

國外藥典里許多天然藥物各論已使用對照提取物進行定性鑒別，如EP7.0的圣約翰草提取物( St．John's Wort dry extract) 、越橘提取物（Bilberryextract）以及USP 34 中的貓爪草提取物( Cat's Clawextract) 、紅車軸草提取物( Red Cloverextract) 、圣約翰草提取物( St. John's Wortextract)、黑升麻提取物與（Black Cohoshextract）等。

自2004以來，歐洲藥品質(zhì)量管理局（European Directorate for the Quality Control of Medicines，EDQM）為研究中藥化學對照物質(zhì)（chemical reference substances，CRS）已經(jīng)做了相當大的努力，以前只有極少數(shù)是可用的，現(xiàn)在已經(jīng)有20余種對照提取物[10]被用于中草藥及其提取物的分析，如：番瀉葉提取物目前運用薄層色譜法作為鑒定對照；銀杏葉提取物用于對銀杏萜類內(nèi)酯峰的指認，包括銀杏內(nèi)酯A，B，C和白果內(nèi)酯，此外，它作為一個含有0.35%的銀杏酸對照提取物也用于銀杏酸限量檢測。奶薊草（又名水飛薊）干燥提取物用于計算總水飛薊素含量（即水飛薊賓A和B，異水飛薊賓A和B，次水飛薊素，水飛薊寧含量之和），以及水飛薊賓，異水飛薊賓和水飛薊亭、水飛薊寧的百分含量；穗花牡荊果實干燥對照提取物可以幫助測定紫花牡荊素含量。圣約翰草對照提取物，用于測定總金絲桃素含量（即金絲桃素和偽金絲桃素含量之和）；越橘提取物用于測定總花青素含量等。表1為《歐洲藥典》（EP 7.0）[11]收載的部分對照提取物的情況展示。

表1 歐洲藥典中的部分對照提取物

USP與EP不同的是更注重某些形式方面的建立和資格相關程序。USP并未明顯區(qū)分主次標準，兩種標準都在使用。USP也十分重視對照提取物的原材料.當前發(fā)布的參考標準的批次都列在USP的網(wǎng)站上(www.usp.org)并附有相關批號。對于EP的參考標準，盡管其標簽上提供了關于質(zhì)量方面較全面的信息，但他們的用戶并不會完全嚴格按照分析說明來控制對照提取物的質(zhì)量。

目前美國藥典中有28種對照提取物[12]在應用，其中大部分用于TLC鑒別實驗。USP中的對照提取物主要用于檢測分析，其一般不用于定量分析，而是專門用于鑒定測試，系統(tǒng)適用性試驗或峰的識別。在美國藥典中，當對照提取物作為一個快捷的方法用于鑒別測試時，它比起單一的純物質(zhì)，能夠更全面的提供各種相關信息。比如在大豆的專論中，其提取物可以用來識別異黃酮乙酰和丙二酰衍生物，這是用純物質(zhì)不能做到的。然而，水飛薊賓對照物質(zhì)也可以進行可靠的定量分析，在蔓荊子、纈草和奶薊草的各專論中分別對紫花牡荊素，纈草烯酸和水飛薊賓進行了定量分析。表2為《美國藥典》（USP36）收載的對照提取物的情況展示。

表2 美國藥典中的部分對照提取物

奶薊草提取物粉末 — √奶薊草膠囊 — √奶薊草片 — √紅車軸草提取物 紅車軸草 √（TLC、Peak ID） √紅車軸草粉末 √（TLC、Peak ID） √紅車軸草提取物粉末√（TLC、Peak ID） √紅車軸片 √（Peak ID） √圣約翰草提取物 圣約翰草 — √圣約翰草粉末 — √圣約翰草提取物粉末√（TLC） √貞潔樹提取物 貞潔樹 √（TLC） —貞潔樹粉末 √（TLC） —貞潔樹提取物粉末 √（TLC） —臀果木提取物 臀果木 √（TLC） —臀果木提取物 √（TLC） —番茄提取物 含有番茄紅素的番茄提取物 — √姜黃提取物 姜黃根 √（TLC、Peak ID） √姜黃根粉末 √（TLC、Peak ID） √姜黃根提取物粉末 √（TLC、Peak ID） √假馬齒莧提取物 假馬齒莧 √（TLC、Peak ID） √假馬齒莧粉末 √（TLC、Peak ID） √假馬齒莧提取物粉末√（TLC、Peak ID） √積雪草提取物 積雪草 √（TLC、Peak ID） √積雪草粉末 √（TLC、Peak ID） √積雪草提取物粉末 √（TLC、Peak ID） √積雪草總苷 √（TLC、Peak ID） √藤黃羥基檸檬酸提取物藤黃 — √藤黃果 — √藤黃果羥基檸檬酸提取物粉末 — √除蟲菊提取物 除蟲菊提取物 √（Peak ID） √乳香提取物 乳香 √（TLC、Peak ID） √乳香提取物 √（TLC、Peak ID） √葉下珠提取物 葉下珠 √（TLC、Peak ID） √(Peak ID)葉下珠粉末 √（TLC、Peak ID） √(Peak ID)穿心蓮提取物 穿心蓮 √（TLC、Peak ID） √

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4 展望

對照提取物的概念在國內(nèi)外被提出，并在一定程度上已經(jīng)應用于實際，歐美國家的相關藥事法規(guī)在不斷建立新的藥品標準物質(zhì)（尤其是植物藥），如美國藥典委員會在2013年5月出版的草藥法典（HMC）?？梢娭胁菟幰呀?jīng)更進一步地被世界接納和認可。隨著藥品質(zhì)量控制水平的提高，藥典中將引入更多新的對照提取物，用于中藥及其成方制劑質(zhì)量控制，甚至是其他更多的方面。我們應順應對照提取物的國際化，在與世界各國的交流和合作中制定出具有中國特色的對照提取物標準體系。

目前對照提取物品種和數(shù)量仍很少，國際上尚未建立完整的對照提取物標準及相關數(shù)據(jù)庫，而中藥質(zhì)量控制的發(fā)展不能僅僅局限在對照提取物的開發(fā)上，我們應該積極探索，尋求更多科學、先進、快捷的方法（如一測多評或一標多測等）來代替對照提取物的作用。對照提取物在醫(yī)藥領域作為藥品標準物質(zhì)中一項戰(zhàn)略性的資源，有著比以往化學對照品更為突出的優(yōu)點，但其標準建立的困難，穩(wěn)定性、均一性難以控制等不足，將成為中藥質(zhì)量控制中一項艱巨而意義重大的研究任務，這對于中藥事業(yè)的發(fā)展既是機遇又是挑戰(zhàn)[13]。隨著天然產(chǎn)物化學分離分析技術飛速發(fā)展，中藥質(zhì)量標準水平不斷地提高，這必將要求我們加強國內(nèi)外技術合作，做到全行業(yè)信息共享，才能促進對照提取物的快速發(fā)展，從而推進中藥國際化和現(xiàn)代化的進程。

[1] 李磊,戴金鳳,黎先春,等.丹參提取物作為質(zhì)控參照物的可行性研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐,2004,18( 增刊) : 36．

[2] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:化學工業(yè)出版社,2005．

[3] 國家藥典委員會,中國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010．

[4] 袁賢達,高慧敏,王智民,等.基于木通皂苷探討中藥質(zhì)量評價用對照提取物研究[J].中國中藥雜志,2012,37(16):2413.

[5] 劉紹勇,張文明,潘建超,等.對照提取物用于金銀花藥材的質(zhì)量控制方法研究[J].中國中藥雜志,2013,38(13):2147.

[6] 薛翠娟,章軍,荊文光,等.對照提取物法測定葛根飲片中5種成分含量[J].中國中藥雜志,2012,37(16):2388.

[7] 陸兔林,李偉東,毛春芹,等.中藥對照物質(zhì)在飲片質(zhì)量研究中的應用[C].中華中醫(yī)藥學會中藥炮制分會2011年學術年會論文集,2011:30.

[8] 陳勇,陸靜嫻,周建良,等.薏苡仁對照藥材和薏苡仁油對照提取物穩(wěn)定性考察[J].中國藥品標準,2012,13(1):39.

[9] 馬玲云,馬雙成.中藥標準物質(zhì)的發(fā)展現(xiàn)狀與展望[J].中國藥事,2010,24(12):1232.

[10] Schwarz M,Klier B,Sievers H.Herbal Reference Standards[J]. PlantaMed,2009,75(7): 689.

[11] The European Directorate for the Quality of Medicines. European Pharmacopoeia(7.0)[M].Europe: European Directorate for the Quality of Medicines,2011.

[12] The United States Pharmacopieial Convention. United States Pharmacopeia36[M].USA: United States Pharmacopeial Convention,2012.

[13] 王智民,肖詩鷹,錢忠直.加速中藥標準提取物發(fā)展，推動中藥現(xiàn)代化和國際化[J].中國中藥雜志,2003,32(17) : 1830.

（責任編輯：陳思敏）

The review of development on reference extracts at home and abroad

DAI Yu, DENG Yun, SONG Chuan-xia, CHEN Hong-mei, HU Jia, KANG Min//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province—Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To summarize the development and application on reference extracts at home and abroad.Method:The development and application on reference extracts home and abroad were summarized. The discussion was carried out on the application status of reference extracts in Chinese Pharmacopoeia (2010 edition), European Pharmacopoeia (7.0) and US Pharmacopoeia (36).Result:It was illustrated that the further development of reference extracts would have a positive infuence on TCM internationalization.Conclusion:The reference extracts as one of the TCM reference standards is important to TCM quality control, which becomes the highlight of TCM internationalization.

reference extracts；development；Chinese Pharmacopoeia；US Pharmacopoeia；European Pharmacopoeia

R 284

A

1674-926X(2015)03-017-05

四川省杰出青年學術技術帶頭人資助計劃項目(2010JQ0036)

成都中醫(yī)藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

戴宇（1988-），女(漢族)，在讀碩士，從事中藥有效成分分析應用研究Tel:13408478791 Email:414163617@qq.com

鄧赟（1975-），男（漢族），研究員，博士，主要從事天然藥物化學研究Tel:13208177492 Email:dengyun2000@hotmail.com

2014-09-19