史蕾喆等

【摘要】目的：建立蠶沙藥材薄層色譜鑒別方法。方法：以1-脫氧野尻霉素、派可林酸為對(duì)照品，通過優(yōu)化顯色劑、展開劑及檢視等條件，篩選出最佳薄層鑒別條件。結(jié)果：所有批次蠶沙藥材均能檢出1-脫氧野尻霉素和派可林酸，且斑點(diǎn)清晰、分離度高、重復(fù)性好。結(jié)論：該法可行性，專屬性強(qiáng)，可用于蠶沙藥材的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】蠶沙；1-脫氧野尻霉素；派可林酸；薄層鑒別

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）02-0018-02

Abstract：Objective To resrarch and establish a TLC indentification method for Faeces Bombycis. Methods With 1-deoxynojirmycin and Pipecoline acid as the reference， select the optimal conditions for TLC by optimizing the Chromogenic agent， exopand agent， view conditions and so on. Results All batches of Faeces Bombycis can be detected 1-deoxynojirimycin and Pipecoline acid， the spots were clear and it has good separation and repeatability. Conclusion This method that is feasible， and has strong specificity can be used for the quality control standards of Faeces Bombycis.

Keywords：Faeces Bombycis； 1-deoxynojirmycin； Pipecoline acid； TLC identification

蠶沙為蠶蛾科昆蟲家蠶Bonbyx mori L.的干燥糞便，具有祛風(fēng)除濕、活血定痛的功效，用于風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)不遂、皮膚不仁、腰腿冷痛、風(fēng)疹瘙癢、頭風(fēng)頭痛、烘弦風(fēng)眼[1]?，F(xiàn)代藥理和臨床研究表明蠶沙有抗腫瘤、降血糖、改善和治療貧血作用，并且成功地開發(fā)了金糖尿膠囊、生血寧片。其中1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）和派可林酸為蠶沙降血糖、抗腫瘤、抗病毒的有效成分[2、3]?！吨腥A人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥材（第一冊(cè)）采用TLC鑒別了蠶沙藥材中含有的β-谷甾醇成分，為了更好地控制蠶沙藥材質(zhì)量，我們以1-DNJ和派可林酸為對(duì)照品，對(duì)蠶沙TLC鑒別條件進(jìn)行了研究，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1材料與儀器

11儀器薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）；超聲波清洗器（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司，型號(hào)HX-06）；硅膠G薄層板（產(chǎn)自德國Merck默克公司）；電熱恒溫干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）。

12試藥蠶沙藥材分別購自長沙市岳麓區(qū)高新大藥房、濟(jì)仁堂大藥房、永康堂大藥房、湖南上藥九旺醫(yī)藥有限公司，均由湖南省中醫(yī)藥研究院李若存研究員鑒定為家蠶Bonbyx mori L的干燥糞便；1-DNJ對(duì)照品（批號(hào)：MUST-1305502，純度>98%），購自成都曼思特生物科技有限公司；派可林酸對(duì)照品（批號(hào)：111751-200601）和蠶沙對(duì)照藥材（批號(hào)：121419-200501）均購自中國藥品生物制品檢定研究院；其余所用試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

211-DNJ薄層鑒別取蠶沙藥材約2g，加水20mL，加熱回流20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?0%乙醇5ml使溶解，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。取1-DNJ對(duì)照品適量，加90%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl、1-DNJ對(duì)照品溶液15μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（16：4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于105℃加熱至斑點(diǎn)明顯后，再置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖1。

22派可林酸的薄層鑒別取派可林酸對(duì)照品適量，加乙醇制成每1ml含 025mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl、派可林酸對(duì)照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖2。

3討論

311-DNJ和派可林酸為降血糖的藥效物質(zhì)，同時(shí)1-DNJ也是抗腫瘤、艾滋病病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）的藥效物質(zhì)，故以此2種成分來衡量蠶沙藥材質(zhì)量的優(yōu)劣比β-谷甾醇更加合理。

32顯色劑的選擇[4、5]由于1-DNJ和派可林酸分子中均無不飽和結(jié)構(gòu)，不能采用紫外光燈進(jìn)行檢視，且GF254板也未檢測(cè)到特征斑點(diǎn)，最后決定選用日光檢視。1-DNJ為生物堿類成分，常用顯色劑為改良碘化鉍鉀試液、吲哚醌試液；派可林酸為氨基酸類成分，常用顯色劑為茚三酮試液。試驗(yàn)結(jié)果表明，上述顯色劑對(duì)1-DNJ不靈敏，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)樣品與1-DNJ對(duì)照品用茚三酮試液顯色，加熱至斑點(diǎn)明顯后，再置碘蒸氣中熏，日光下檢視，可增加顯色的靈敏性。因此，采用茚三酮試液和碘蒸氣作為1-DNJ的顯色劑；茚三酮試液對(duì)派可林酸顯紫色斑點(diǎn)，靈敏性好、專屬性強(qiáng)，所以選茚三酮試液作為派可林酸的顯色劑。

33展開劑的選擇1-DNJ分子含有多個(gè)羥基，具有較強(qiáng)的極性。因此，考慮采用①乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）；②乙酸乙酯-無水乙醇（1：2）；③三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）；④正丁醇-醋酸-水（6：1：1）作為展開劑進(jìn)行試驗(yàn)。以乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）的展開系統(tǒng)，分離得到的斑點(diǎn)最多。所以確定用乙酸乙酯-甲酸-水為展開系統(tǒng)，分別采用（16：3：1）、（16：4：1）、（16：5：1）不同比例進(jìn)行比較，經(jīng)過多次試驗(yàn)，確定以（16：4：1）的分離度及Rf值最為合適。派可林酸分子中含有羧基，極性較強(qiáng)。采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：1）和三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）作為展開劑進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）的展開系統(tǒng)，分離得到的斑點(diǎn)分離度好，斑點(diǎn)非常清晰?？紤]到三氯甲烷的毒性，換用二氯甲烷進(jìn)行試驗(yàn)，但是斑點(diǎn)的分離度不夠好。所以，最后確定以三氯甲烷-甲醇-水（5：45：1）為展開劑。

34耐用性試驗(yàn)選用不同廠家的硅膠G板進(jìn)行了比較，結(jié)果市售4個(gè)批次的蠶沙藥材與蠶沙對(duì)照藥材試驗(yàn)均與1-DNJ和派可林酸對(duì)照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，且分離度好。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：20131128）