結(jié)腸管狀腺癌GATA3的免疫組化表達檢測及其意義

佟強1,金梅1,姜慧1，劉天戟2*

(一汽總醫(yī)院 病理科,吉林 長春130011；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院)

結(jié)腸管狀腺癌是臨床較為常見且預(yù)后不良的大腸癌之一，其發(fā)病率高，惡性度高，且死亡率高，手術(shù)和化療均不能達到根治的效果。GATA3轉(zhuǎn)錄因子是GATA超家族成員之一，我們對其在結(jié)腸管狀腺癌中的特異性表達進行檢測，進而進一步探討結(jié)腸管狀腺癌的發(fā)病機理等，以期達到治愈結(jié)腸管狀腺癌的目的。結(jié)腸管狀腺癌約占大腸癌的80%，患者多為老年人，多數(shù)患者診斷后很難治愈，近年來報道GATA3在諸多惡性腫瘤細胞中有表達，如乳腺癌[1,2]，宮頸癌[3]，胰腺癌[4]等。國外也有學(xué)者研究表明，GATA3的表達與腫瘤分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等指標(biāo)相關(guān)[5]。國內(nèi)尚未見結(jié)腸管狀腺癌中GATA3表達情況的報道。因此我們通過免疫組織化學(xué)染色法檢測GATA3在結(jié)腸管狀腺癌中的表達情況，通過研究其組織級別和分化程度的關(guān)系，探討其在結(jié)腸管狀腺癌中的發(fā)病機理及預(yù)后中的意義。

1材料和方法

1.1材料

60例結(jié)腸管狀腺癌標(biāo)本和60例正常結(jié)腸組織標(biāo)本均來自我院普外科手術(shù)切除，已經(jīng)過2位以上資深病理科醫(yī)生明確診斷。經(jīng)得患者知情同意，進行試驗研究?；颊吣挲g在42-80歲(平均59歲)，男女各半。所有標(biāo)本均經(jīng)過HE染色和免疫組織化學(xué)染色。

1.2主要試劑

GATA3兔抗人多克隆抗體及其他試劑均購自北京中衫生物科技有限公司。

1.3方法

所有標(biāo)本均按照GATA3試劑盒說明書進行操作，經(jīng)過DAB顯色，蘇木素復(fù)染細胞核，以出現(xiàn)黃褐色產(chǎn)物為陽性結(jié)果，以60例正常結(jié)腸組織患者作為對照。經(jīng)過一系列過程，于高倍鏡下觀察GATA3的表達情況。GATA3在結(jié)腸管狀腺癌細胞的胞核中表達為黃褐色，以GATA3廣泛均勻分布在結(jié)腸管狀腺癌細胞核中認定為陽性表達。120例標(biāo)本經(jīng)過常規(guī)HE染色和免疫組織化學(xué)染色后，觀察其陽性表達情況。

1.4結(jié)果判定

GATA3陽性顆粒主要定位在細胞核，當(dāng)細胞核中出現(xiàn)均勻分布的棕黃色顆粒時，即可定義該細胞為陽性細胞，在組織切片中隨機選取5-15個高倍視野，當(dāng)陽性染色細胞數(shù)占總癌細胞數(shù)25%以上即可認為GATA3陽性表達。

1.5統(tǒng)計學(xué)

采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，用χ2檢驗進行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1免疫組化檢測組織中GATA3蛋白表達及定位情況

正常結(jié)腸組織中GATA3呈陰性，腺上皮未著色，如圖1；結(jié)腸管狀腺癌組織中GATA3染色60%以上細胞核著色，呈陽性表達，如圖2。

圖1正常結(jié)腸組織中GATA3表達(×40)圖2結(jié)腸管狀腺癌組織中GATA3表達(×100)

2.2正常結(jié)腸組織和結(jié)腸管狀腺癌組織中GATA3的表達情況

GATA3主要定位在細胞核內(nèi)，免疫組化提示GATA3在結(jié)腸管狀腺癌組織中高表達，在正常結(jié)腸組織中弱表達甚至不表達(P<0.05)，見表1。

表1　正常結(jié)腸組織和結(jié)腸管狀腺癌組織中GATA3的

2.3GATA3與腫瘤TNM分期和分化程度的關(guān)系

通過實驗我們發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸管狀腺癌組織TNM分期越高，GATA3的陽性表達越強；結(jié)腸管狀腺癌組織分化程度越低，GATA3的陽性表達越強(P<0.05)，見表2。

表2　GATA3與腫瘤TNM分期和分化程度的關(guān)系

3討論

結(jié)腸管狀腺癌發(fā)病率正呈逐年增高的趨勢，且男性多于女性。迄今為止，其病因?qū)W尚未完全清楚，可能與飲食因素，體力活動，遺傳因素等相關(guān)。

GATA3是GATA家族成員之一，在多種惡性腫瘤細胞的生長調(diào)節(jié)和分化中起重要作用，在很多惡性腫瘤細胞中高表達。GATA3是CD4+輔助性T細胞Th2特異性轉(zhuǎn)錄因子，Th2細胞對機體的免疫功能有著重要的調(diào)節(jié)作用[6]，CD4+輔助性T細胞的分化與機體內(nèi)的各種疾病有著密切的關(guān)系，作為Th2特異性轉(zhuǎn)錄因子，GATA3調(diào)控Th2 細胞的分化過程，為控制與治療某些疾病提供了新的靶點，在分子水平、轉(zhuǎn)錄水平以及蛋白水平上它受到了眾多信號通路的調(diào)節(jié)。GATA3能識別并與DNA的特定序列結(jié)合，從而促進或抑制相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄[7]。GATA3除了通過直接結(jié)合到相應(yīng)的DNA序列上調(diào)節(jié)靶基因的表達，還能通過染色質(zhì)重塑的過程來

整體改變基因的遺傳性狀。它直接參與T淋巴細胞的分化調(diào)控，誘導(dǎo)Th2細胞生物生成，亦直接或間接參與紅細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞等的分化調(diào)控。

GATA3在諸多正常組織和腫瘤組織均有所表達，但在結(jié)腸管狀腺癌中的研究尚無報道，本實驗通過免疫組織化學(xué)方法觀察了GATA3的表達情況，發(fā)現(xiàn)60例結(jié)腸管狀腺癌組織與60例正常結(jié)腸組織相比，GATA3在結(jié)腸管狀腺癌組織中強陽性表達，在正常結(jié)腸組織中弱表達甚至不表達(P<0.05)，且結(jié)腸管狀腺癌組織TNM分期越高，GATA3的陽性表達越強；分化程度越低，GATA3的陽性表達越強(P<0.05)。研究GATA3的表達調(diào)控與功能,既能深化人們在分子水平上對CD4+輔助性T細胞的分化機制的了解，也能拓寬相關(guān)疾病治療的思路，為臨床用藥及預(yù)后提供了扎實的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。

參考文獻：

[1]Mehra R’Varambally S’ Ding L et al.Identification of GATA3 as a breast cancer prognostic marker by global gene expression meta-analysis[J].Cancer Res,2005,65(24):11259.

[2]Abba MC,Nunez MI,Colussi AG,et al.GATA3 protein as a MUC1 transcriptional regulator in breast cancer cells[J].Breast Cncer Res,2006,8(6):R64.

[3]Steenbergen RD,Oude Engberink VE,Kramer D et al.Down regulation of GATA3 expression during human papillomavirus mediated immortalization and cervical carcinogenesis[J].Am J Pathol.2002.160(6):1945.

[4]Gulbinas A,Berberat PO,Dambrauskas Z et al.Aberrant gata-3 expression in human pancreatic cancer[J].J Histochem Cytochem,2006,54(2):161.

[5]Voduc D,Cheanq M,Nielsen T.GATA-3 expression in breast cancer has a strong association with estrogen receptor but lacks independent prognostic value[J].Cancer Epidemiol Biomarkers PreV,2008,17(2):365.

[6]Zheng W.Flavell RA,The transcription actor GATA-3 is necessary and sufficient for Th2 cytokine gene expression in CD4 T cells[J].Cell,1997,89(4):587.

[7]Yang Z,Gu L,Romeo PH et al.Human GATA3-trans-activation,DNA-binding and nuclear localization activities are organized into distinct structural domains[J].Mol Cell Biol,1994,14(3):2201.

收稿日期：(2013-11-17)

通訊作者*

文章編號：1007-4287(2015)03-0430-02