胃癌組織中c-erbB-2癌基因表達與胃癌主要病理特征的關系

丁兆明

(萊州市人民醫(yī)院 中心實驗室，山東 萊州261400)

原癌基因c-erbB-2(又稱neu或HER-2)屬于受體酪氨酸激酶Ⅰ類亞家族，定位于人類17號染色體q21區(qū)帶上，編碼產物為Mr18500的跨膜糖蛋白(故又稱P185)，參與對細胞生長、繁殖、分裂的調控，其異常表達或基因突變時，使某些不正常細胞的獨立生長能力失控，從而發(fā)展為腫瘤細胞[1,2]，可作為卵巢癌、乳腺癌、子宮內膜癌及消化道腫瘤預后的參考指標[3]。筆者應用非放射性原位雜交技術檢測胃癌標本中c-erbB-2基因的擴增情況，分析了其與腫瘤分化、腫瘤浸潤和淋巴結轉移的關系，現(xiàn)報告如下。

1材料與方法

1.1臨床標本2011年1月-2013年3月，經我院病理確診、手術切除的胃癌標本81例，男52例，女29例；年齡35歲-67歲，平均57.8歲。其中賁門癌35例，胃體癌29例，胃竇癌17例。胃癌組織按Lauren分型，彌漫型48例，腸型33例。根據癌組織有無明顯乳頭及腺管結構形成，分為分化較差46例，分化較好35例。浸潤淺肌層11例，浸潤深肌層70例。有淋巴結轉移57例，無淋巴結轉移24例。癌組織經中性福爾馬林固定后，直接在-26℃冰凍切片機上切片，厚約4-6 μm，然后粘貼于經APES處理的玻片上。

1.2c-erbB-2 DNA探針① c-erbB-2 cDNA探針由日本東京大學yamamoto教授惠贈，探針長度461 bp，為c-erbB-2 cDNA的Dra Ⅰ和Sma Ⅰ雙酶切產物。②隨機引物延伸法進行非放射性地高辛配基-11-dUTP摻入標記，標記試劑盒為Boehringer mannheims公司產品(由華美生物工程公司提供)，點雜交檢測探針靈敏度為0.1 pg DNA。

1.3原位雜交①用0.1N HCl、RNase A、蛋白酶k處理切片，0.1%甘氨酸中止。②滴加預雜交液(含有：4×SSC，50%甲酰胺，1×Denhardt液，0.5%PEG，0.5 mg/ml ssDNA)，放置室溫1 h。③再加雜交液(探針濃度0.2 μg/ml)，用硅化蓋片復蓋組織，置甲酰胺濕盒內，95℃ 10-15 min。④直接移置42℃濕箱中雜交過夜。⑤在2×SSC 中滑除蓋片，洗滌后加堿性磷酸酶標記的抗地高辛抗體(1∶500稀釋)2 h。⑥洗滌后加NBT和BCIP混合底物，避光顯色，TE終止，核固紅復染，封片。⑦顯微鏡檢查，腫瘤細胞核內出現(xiàn)細小的紫藍色至粗大的深紫色顆粒為陽性。

圖1　胃癌細胞核內出現(xiàn)的c-erbB-2陽性顆粒(400×)

2結果

2.1c-erbB-2在胃癌組織中的表達胃癌標本中c-erbB-2擴增陽性結果見圖1，陽性率為50.6%。81例胃癌標本擴增結果與病理特征的關系見表1。

2.2C-erbB-2的表達與胃癌主要病理特征或惡性程度的相關性分析C-erbB-2的表達與胃癌的發(fā)展三大病理參數，即腫瘤的分化、組織浸潤和淋巴結轉移的關系，探討其相關性。

在胃癌分化程度方面，有35例(43.2%，35/81)高分化胃癌和46例(56.8%,46/81)低分化胃癌。其中41例c-erbB-2陽性病例中，12例高分化胃癌，占總樣本的14.8%(12/81)，占高分化組的34.3%(12/35)。29例在低分化胃癌組，占總數的35.8%(29/81)和占低分化組63.0%(29/46)，(χ2= 6.576，P<0.001)(圖2)。

表1　c-erbB-2基因表達與胃癌病理特征的關系

NS:not significant*Chi-square test

在胃癌的侵襲方面，有11例(13.6%，11/81)胃癌浸潤僅限于淺肌層，70例(86.4%，70/81)胃癌侵犯外深肌層。在淺肌層浸潤的情況下，C-erbB-2的表達，發(fā)現(xiàn)2例，占該組的18.2%(2/11)或研究的總樣本的2.5%(2/81)。另一方面，在深部肌肉浸潤的情況下，C-erbB-2的表達，觀察到39例，占該組的55.7%(39/70)或研究的總樣本的48.1%(39/81)。在C-erbB-2的這兩個群體之間的表達有非常顯著統(tǒng)計學差異(χ2=5.357，P<0.025)(圖2)。

圖2　c-erbB-2過度表達與胃癌病理特征的關系

好=高分化，差=低分化;S=腫瘤侵犯淺肌層，D=腫瘤侵犯深肌層;LN(-)=淋巴結轉移陰性，淋巴結(+)=淋巴結轉移陽性。其中c-erbB-2的表達率為低分化胃癌(35.8%)，明顯高于高分化胃癌(14.8%)(P<0.001)；胃癌侵犯深肌層(48.1%)明顯高于胃癌侵犯淺肌層(2.5%)(P<0.025)；而胃癌淋巴結轉移(42.0%)遠高于無淋巴結轉移(8.6%)(P<0.025)。

在淋巴結轉移方面，有57例(70.4%，57/81)淋巴結轉移，有24例(29.6%，24/81)無淋巴結轉移。淋巴結陽性組，C-erbB-2的表達中發(fā)現(xiàn)34例，占本小組的59.6%(34/57)，占研究的總樣本的42.0%(34/81)。相反，在淋巴結陰性組，C-erbB-2的表達，發(fā)現(xiàn)7例，占該組總數的21.2%(7/24)或總樣本的8.6%(7/81)。這兩個群體之間的差異達到統(tǒng)計學意義(χ2= 6.278，P<0.025)(圖2)。

3討論

早期的研究中，C-erbB-2蛋白在胃癌的表達率為9%-44.6%[4-8]，我們用非放射性原位雜交技術檢測C-erbB-2蛋白在胃癌中的表達率為50.6%(41/81)，比其高出了許多。究其原因有：首先，我們大部分的病人都是晚期的胃癌， 81例腫瘤中，57(70.3%)例有淋巴結轉移，70(86.4%)例有腫瘤擴散至深肌層；第二，我們獲得的胃癌組織是在手術后立即取材，在液氮中冷凍保存，故所獲標本新鮮，可以保留該基因產物為最大。另一方面，以往大多數研究采用免疫組織化學方法研究c-erbB-2的表達，標本大都是各種固定劑固定后石蠟包埋的組織塊。這種標本經固定、石蠟包埋影響胃癌C-erbB-2基因的免疫組化結果[9]，降低了靈敏度。

有作者報道，在胃黏膜輕度異型增生、中度異型增生、重度異型增生組織中，隨病變加重，c-erbB-2基因表達呈上升趨勢[10]，本文研究表明，c-erbB-2基因與胃癌組織分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移有關(P<0.05)，分化程度越差、浸潤深度越深、淋巴結有轉移，c-erbB-2基因表達率越高，說明c-erbB-2基因的活化在癌細胞浸犯胃壁深度至淋巴結轉移的過程中起著一定的作用，參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。

參考文獻：

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[10]蘇秀麗，金建軍.Rb與c-erbB-2基因在胃癌前病變組織中的表達及其臨床病理意義[J].河南科技大學學報(醫(yī)學版)，2012,30(2)：87.

收稿日期：(2013-11-20)

文章編號：1007-4287(2015)04-0635-03