鐘 興， 弓 健， 郭 斌， 徐 浩

（暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院1.醫(yī)學(xué)影像中心超聲科；2.核醫(yī)學(xué)科，廣東廣州510632）

siRNA沉默survivin增強(qiáng)hNIS轉(zhuǎn)染的鼻咽癌細(xì)胞株對(duì)131碘的敏感性

鐘 興1， 弓 健2， 郭 斌2， 徐 浩2

（暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院1.醫(yī)學(xué)影像中心超聲科；2.核醫(yī)學(xué)科，廣東廣州510632）

目的：研究Survivin特異性小片段干擾RNA（siRNA）能否增強(qiáng)人鈉碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體（hNIS）轉(zhuǎn)染的鼻咽癌細(xì)胞株（CNE-2-hNIS）對(duì)131碘的放射敏感性.方法：設(shè)計(jì)并合成針對(duì)survivin基因的特異性siRNA，利用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染CNE-2-hNIS細(xì)胞，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）和Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞survivin基因沉默效果.CCK-8、克隆形成實(shí)驗(yàn)和AnnexinV FITC／PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)131碘孵育后對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響.結(jié)果：Survivin siRNA轉(zhuǎn)染CNE-2-hNIS細(xì)胞72 h后，細(xì)胞的survivin基因mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低，Si-survivin組較SiRNA-NC組細(xì)胞增殖率降低，131碘孵育后，Si-survivin組較SiRNA-NC組細(xì)胞增殖率降低，凋亡率增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）.結(jié)論：Survivin特異性siRNA能顯著沉默CNE-2-hNIS細(xì)胞的survivin基因的表達(dá)，增加CNE-2-hNIS對(duì)131碘的放射敏感性.

survivin； RNA干擾； 鼻咽癌； 鈉／碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體； 碘放射性同位素

［Key words］survivin； siRNA； sodium／iodide symporter（NIS）； nasopharyngeal carcinoma； iodine radioisotopes

鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）是中國(guó)南方及東南亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一，放療是其首選的治療方法，但是對(duì)于放療不敏感、放療后病灶殘留或復(fù)發(fā)，以及發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，不少學(xué)者正積極探索其他有效的治療手段.鈉／碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體（sodium／iodide symporter，NIS）基因轉(zhuǎn)染非甲狀腺源的腫瘤細(xì)胞以介導(dǎo)放射性核素治療腫瘤的研究，為探索內(nèi)放射治療腫瘤提供了一個(gè)新的研究領(lǐng)域［1-2］.通過(guò)前期實(shí)驗(yàn)，本項(xiàng)目組已成功建立穩(wěn)定表達(dá)hNIS的鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2-hNIS，使得原本不能攝碘的鼻咽癌細(xì)胞能夠攝取放射性核素131碘，經(jīng)體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)證實(shí)131碘能一定程度抑制hNIS轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡［3-4］，但要達(dá)到治療鼻咽癌的效果，仍需加強(qiáng)131碘對(duì)鼻咽癌的治療作用.研究顯示［5］，鼻咽癌組織中survivin基因mRNA和蛋白質(zhì)有著高表達(dá)，并且癌組織中的這種高表達(dá)與患者的不良預(yù)后密切相關(guān).體外研究結(jié)果顯示，許多惡性腫瘤細(xì)胞中，特別是具有放射抵抗的細(xì)胞中可以檢測(cè)到Survivin的表達(dá)上調(diào)，Survivin的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞對(duì)放射抗性密切相關(guān)［6，7］.為了進(jìn)一步提高131碘對(duì)CNE-2-hNIS細(xì)胞的治療效果，本組利用RNA干擾技術(shù)，沉默CNE-2-hNIS細(xì)胞株中survivin基因的表達(dá)，探討survivin基因表達(dá)抑制后的CNE-2-hNIS細(xì)胞能否提高對(duì)131碘的敏感性，從而達(dá)到增強(qiáng)131碘的治療效果.

1 材料與方法

1.1 材料

脂質(zhì)體lipofectamine 2000及胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，RPMI-1640培養(yǎng)基購(gòu)自GBICO公司.cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒iScript cDNA Synthesis Kits購(gòu)自Bio-Rad.iTaqTMUniversal SYBR?Green Supermix購(gòu)自Bio-Rad.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗購(gòu)自Proteintech，ECL試劑盒購(gòu)自Milipore.蛋白預(yù)覽marker購(gòu)自TransGene Biotech.Survivin抗體購(gòu)自美國(guó)CST公司.

1.2 siRNA設(shè)計(jì)、合成和轉(zhuǎn)染

Survivin siRNA的設(shè)計(jì)與合成由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司完成.在6孔板中接種處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的CNE-2-hNIS（5×105／每孔），待細(xì)胞生長(zhǎng)至密度達(dá)到60%～70%進(jìn)行轉(zhuǎn)染.轉(zhuǎn)染過(guò)程參考lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書.轉(zhuǎn)染分2組：轉(zhuǎn)染Survivin siRNA為Si-survivin組（實(shí)驗(yàn)組），轉(zhuǎn)染隨機(jī)對(duì)照為SiRNA-NC組（對(duì)照組），轉(zhuǎn)染步驟按照說(shuō)明書進(jìn)行.轉(zhuǎn)染后72 h進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn).

1.3 RT-qPCR檢測(cè)survivin m RNA的表達(dá)

Si-survivin組和SiRNA-NC組細(xì)胞棄培養(yǎng)液后PBS沖洗3次，通過(guò)Trizol法提取總RNA，用cDNA合成試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA.設(shè)計(jì)特異性引物分別擴(kuò)增survivin和內(nèi)參Actin（survivin引物序列：上游5′-AGGCTGGCTTCATCCACTGC-3′，下游5′-TGTTCCTCTATGGGGTCGTCA-3′，Actin引物序列：上游5′-AGAGCTACGAGCTGCCTGAC-3′，下游5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′）.qPCR反應(yīng)采用兩步法.反應(yīng)體系：iTaq Universal SYBR Green Supermix 7.5μL，上游引物0.3μL，下游引物0.3μL，cDNA 1μL，ddH2O 5.9μL.反應(yīng)條件：95℃2 min，95℃10 s，60℃30 s 39個(gè)循壞.溶解曲線程序按照iTaqTNUniversal SYBR?Green Supermix說(shuō)明書設(shè)計(jì).

1.4 Western-blot鑒定Survivin蛋白的表達(dá)

Si-survivin組和SiRNA-NC組細(xì)胞棄培養(yǎng)上清液，用冰冷的磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗細(xì)胞2次，加入預(yù)冷的細(xì)胞裂解液（50 mmol／L Tris-HCl，150 mmol／L NaCl，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.02%疊氮鈉，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%SDS，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%NP-40，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%去氧膽酸鈉，100 mg／L苯甲基磺酰氟（PMSF），1 mg／LA protinin）150μL，用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下，收集到1.5 mL離心管中，冰浴20 min后，于4℃、12 000×g離心15 min，收集上清液.蛋白樣品與等體積2×上樣buffer混勻，煮沸5 min，每孔上樣10μL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離樣品.分離的蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用封閉液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%脫脂奶粉溶于TBS-T）室溫封閉1 h，將膜與用封閉液稀釋的Ⅰ抗（小鼠抗人Survivin單克隆抗體1∶400）室溫孵育2 h，TBS-T洗膜15 min×3次，將膜與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG第Ⅱ抗體（1∶2 000）室溫孵育1 h，TBS-T洗膜15 min×3次，加入ECL試劑顯色發(fā)光，在暗室中用X-光膠片曝光，顯影和定影.

1.5 Cell Counting Kit-8（CCK-8）檢測(cè)131碘作用后的細(xì)胞增殖活性

Si-survivin組和SiRNA-NC組細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，5 ×105／孔的密度接種于六孔板中，37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下過(guò)夜培養(yǎng)，棄去舊的培養(yǎng)液，用平衡Hank′s緩沖液（bHBSS）液清洗細(xì)胞2遍后，分別加入0、100μCi／mL的131碘的bHBSS，在37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下孵育7 h，吸棄含131碘的bHBSS，并用bHBSS液清洗數(shù)遍，胰酶消化，加培養(yǎng)液輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后以5×103個(gè)／孔、3×103個(gè)／孔、1×103個(gè)／孔的密度分別接種于96孔板中（共7塊），每孔體積200μL.37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下常規(guī)培養(yǎng).分別于培養(yǎng)第1、2、3、4、5、6、7天后，每天取一塊96孔板，每孔加入CCK-8 10μL，避免氣泡帶入孔內(nèi)干擾讀數(shù)，37℃繼續(xù)孵育2 h.用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光度，并計(jì)算腫瘤細(xì)胞增殖率.細(xì)胞增殖率＝（實(shí)驗(yàn)組吸光度A值一空白組A值）／（對(duì)照組A值一空白組A值）×100%.

1.6 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)

Si-survivin組和SiRNA-NC組細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，以5×105／孔的密度接種于六孔板中，37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下過(guò)夜培養(yǎng)，棄去舊的培養(yǎng)液，用bHBSS液清洗細(xì)胞2遍后，分別加入0、100μCi／mL131碘的bHBSS，在37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下孵育7 h，吸棄含131碘的bHBSS，并用bHBSS液清洗數(shù)遍，胰酶消化，加完全培養(yǎng)基輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)，以200個(gè)／孔的密度接種于六孔板中.37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件常規(guī)培養(yǎng)14 d，培養(yǎng)期間要適時(shí)更換培養(yǎng)液.培養(yǎng)14 d后，棄舊培養(yǎng)液，PBS小心浸洗2次，加純甲醇5 mL固定15 min，棄固定液，加適量龍膽紫溶液染色10 min，然后流水緩慢洗去染色液，空氣干燥.在顯微鏡下計(jì)數(shù)大于50個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù)，并計(jì)算克隆形成率：克隆形成率＝克隆數(shù)／接種細(xì)胞數(shù)（100%）.

1.7 AnnexinV FITC／PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)131I作用后細(xì)胞凋亡

Si-survivin組和SiRNA-NC組常規(guī)培養(yǎng)，以5× 105／孔的密度接種于六孔板中，37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下過(guò)夜培養(yǎng)，次日，棄去舊的培養(yǎng)液，用bHBSS液清洗細(xì)胞2遍后，加入0、100μCi／mL131碘的bHBSS，在37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下孵育7 h，吸棄含131碘的bHBSS，并用bHBSS液清洗數(shù)遍，更換完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每天觀察細(xì)胞的變化，于24、48、72 h分別用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25%含乙二胺四乙酸（EDTA）胰蛋白酶分別消化細(xì)胞，用含血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液終止消化.將收集細(xì)胞約1× 106個(gè)／mL，1 000 rpm室溫離心5 min，棄去上清.用PBS洗滌細(xì)胞2次，室溫1 000 rpm離心5 min，棄去上清，重懸于1 mL PBS中.取100μL細(xì)胞，約1× 105個(gè)細(xì)胞，加5μL PI和5μL AnnexinV／FTTC，室溫下避光孵育15 min.加400μL孵育緩沖液，1h內(nèi)進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè).在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上，左下象限（FTTC-／PI-）顯示活細(xì)胞；右上象限（FITC＋／PI＋）是晚期凋亡細(xì)胞；而右下象限（FTTC＋／PI-）為凋亡細(xì)胞.

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行兩均數(shù)間的差異性分析.

2 結(jié)果

2.1 Survivin基因表達(dá)的鑒定

RT-qPCR結(jié)果表明，Si-survivin組的Survivin mRNA表達(dá)較SiRNA-NC組降低，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.000 2），見圖1.Western blot結(jié)果表明，Si-survivin組的Survivin蛋白表達(dá)較SiRNA-NC組明顯降低，見圖2.

圖1 RT-qPCR檢測(cè)Si-survivin組和SiRNA-NC組中Survivin mRNA表達(dá)情況Fig.1 Survivin mRNA in Si-survivin group and SiRNA-NC group was detected by RT-qPCR

圖2 Western blot檢測(cè)Si-survivin組和SiRNA-NC組中的Survivin蛋白的表達(dá)Fig.2 Expression of Survivin protein in Si-survivin group and SiRNA-NC group was detected by Western blot

2.2 131碘作用后細(xì)胞增殖和凋亡的變化

CCK-8檢測(cè)結(jié)果表明，Si-survivin組和SiRNANC組細(xì)胞在無(wú)131碘的作用時(shí)，第3 d Si-survivin組細(xì)胞增殖率下降，與SiRNA-NC組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝6.56，P＜0.01）.經(jīng)過(guò)100μCi／mL131碘孵育后，Si-survivin組和SiRNA-NC組細(xì)胞在1～7天增殖率均有一定程度下降，Si-survivin組較SiRNA-NC組細(xì)胞增殖率下降更為明顯，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖3.

圖3 CCK-8檢測(cè)0、100μCi／mL131碘作用于SiRNA-NC組和Si-survivin組細(xì)胞后在1～7 d細(xì)胞增殖率的改變Fig.3 The rate of proliferation of cells in SiRNA-NC group and Si-survivin group detected by CCK-8 after adding 0 and 100μCi／mL131I

體外克隆形成實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)顯示，在無(wú)131碘的作用時(shí)，Si-survivin組細(xì)胞克隆形成率（61.33±4.72）%較SiRNA-NC組（96.14±2.91）%下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝10.87，P＜0.01）.經(jīng)過(guò)100μCi／mL131碘孵育后，兩組細(xì)胞克隆形成率均有降低，Si-survivin組細(xì)胞克隆形成率為（18±2.64）%，較SiRNA-NC組（34.33±3.05）%有明顯下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝7.01，P＜0.01），見圖4.

圖4 SiRNA-NC組和Si-survivin組經(jīng)0、100μCi／mL131碘作用于后細(xì)胞克隆形成率Fig.4 The rate of colon formation of cells in SiRNA-NC group and Si-survivin group after adding 0 and 100μCi／mL131I

圖5 AnnexinV FITC／PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)0、100μCi／mL131碘作用于SiRNA-NC組和Si-survivin組后細(xì)胞凋亡情況（A和B為未加131碘作用的SiRNA-NC和Si-survivin組，C和D為加100μCi／mL131碘作用的SiRNA-NC和Si-survivin組）Fig.5 The apoptosis of cells in in SiRNA-NC group and Si-survivin group after adding 0 and 100μCi／mL131Idetected by AnnexinV FITC／PI

AnnexinV-FITC／PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示，在無(wú)131碘的作用時(shí)，Si-survivin組和SiRNA-NC組細(xì)胞凋亡率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝1.64，P＞0.05），經(jīng)過(guò)100μCi／mL131碘孵育后，Sisurvivin組和SiRNA-NC組的細(xì)胞凋亡率均下降，但Si-survivin組的細(xì)胞凋亡率（28.27±4.87）%較SiRNA-NC組（10.54±3.87）%下降更為明顯，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝4.93，P＜0.01）.

3 討論

Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白（IAPs）家族中分子量最小但抗凋亡能力最強(qiáng)的成員，主要作用是調(diào)控細(xì)胞凋亡和細(xì)胞分裂.Survivin基因幾乎在所有的人類腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，但在正常的末端分化組織中卻很少能檢測(cè)到，因此作為一個(gè)腫瘤特異性標(biāo)記物，其研究逐漸成為腫瘤治療相關(guān)領(lǐng)域的熱點(diǎn).研究［8］表明Survivin能抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的發(fā)生，參與細(xì)胞周期的調(diào)控，誘導(dǎo)腫瘤血管的生成以及向周圍組織浸潤(rùn)，并能增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療和放療的耐受性.Survivin蛋白的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞對(duì)放射抗性密切相關(guān).R?del等［9］研究顯示，運(yùn)用小干擾RNA降低結(jié)直腸癌細(xì)胞放射抵抗株SW480和HCT-15中Survivin的表達(dá)后，SW480和HCT-15細(xì)胞株對(duì)放射的敏感性增加，凋亡率增高，該研究的結(jié)果亦顯示，Survivin的表達(dá)水平與直腸癌的患者進(jìn)行放化療的預(yù)后呈負(fù)相關(guān).因此，survivin基因可以作為具有潛在價(jià)值的放射性治療的新靶點(diǎn)，沉默該基因可能影響腫瘤對(duì)放射治療的敏感性.

RNAi是一種通過(guò)細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入雙鏈RNA而導(dǎo)致靶基因表達(dá)抑制的進(jìn)化保守的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象.RNAi在細(xì)胞內(nèi)能通過(guò)多種途徑（如RNA降解、轉(zhuǎn)錄抑制、翻譯抑制及染色體重組等）引起特異基因的失活.隨著對(duì)siRNA研究的不斷深入，越來(lái)越多的研究顯示siRNA在基因治療領(lǐng)域有著潛在優(yōu)勢(shì)，與其他幾種基因封閉技術(shù)相比，siRNA具有更強(qiáng)大、更持久的抑制基因表達(dá)的能力，并且具有體積小、序列特異性高和無(wú)免疫原性等優(yōu)點(diǎn)，目前siRNA已經(jīng)已成為一種新的放、化療增敏途徑［10］.本項(xiàng)目組的研究顯示，通過(guò)siRNA survivin基因后，CNE-2-hNIS細(xì)胞中的survivin的mRNA及蛋白表達(dá)明顯降低，達(dá)到了抑制CNE-2-hNIS細(xì)胞中survivin基因表達(dá)的效果.

本組前期的實(shí)驗(yàn)表明將hNIS轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞株后能引起細(xì)胞攝取131碘的增加，能一定程度抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡.為了進(jìn)一步增強(qiáng)131碘對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的殺傷作用，本組將鼻咽癌細(xì)胞中的凋亡基因survivin進(jìn)行抑制，在131碘的作用下，survivin抑制組的鼻咽癌細(xì)胞較未抑制組的增殖率及克隆形成率降低，凋亡率明顯增高，達(dá)到增強(qiáng)131碘對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的治療作用.

本研究中通過(guò)RNA干擾的方法阻斷CNE-2-hNIS細(xì)胞中Survivin的表達(dá)，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染小干擾RNA可以有效阻斷Survivin在CNE-2-hNIS細(xì)胞中的表達(dá).survivin基因表達(dá)下調(diào)能夠增強(qiáng)CNE-2-hNIS對(duì)131碘的敏感性，為鼻咽癌放射性碘的治療提供了新的思路和方法.

［1］ RIESCO-EIZAGUIRRE G，SANTISTEBAN P.A perspective view of sodium iodide symporter research and its clinical implications［J］.Eur J Endocrinol，2006，155（4）：495-512.

［2］ WILLHAUCK M J，SHARIF SAMANI B R，GILDEHAUSF J，et al.Application of 188rhenium as an alternative radionuclide for treatment of prostate cancer after tumor-specific sodium iodide symporter gene expression［J］.J Clin Endocrinol Metab，2007，92（11）：4451-4458.

［3］ 鐘 興，弓 健，郭 斌，等.hNIS轉(zhuǎn)染介導(dǎo)鼻咽癌移植瘤放射性核素顯像和治療實(shí)驗(yàn)［J］.中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志，2012，32（6）：452-456.

［4］ 鐘 興，弓 健，曾祥鳳，等.轉(zhuǎn)基因介導(dǎo)碘對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響［J］.暨南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版，2010，31（4）：387-392.

［5］ XIANG Y，YAO H，WANG S，et al.Prognostic value of Survivin and Livin in nasopharyngeal carcinoma［J］.Laryngoscope，2006，116（1）：126-130.

［6］ ALTIERID C.Survivin，cancer networks and pathway-directed drug discovery［J］.Nat Rev Cancer，2008，8（1）：61-70.

［7］ ASANUMA K，MORIAIR，YAJIMA T，et al.Survivin as a radioresistance factor in pancreatic cancer［J］.Jpn J Cancer Res，2000，91（11）：1204-1209.

［8］ ALTIERID C.Survivin，cancer networks and pathway-directed drug discovery［J］.Nat Rev Cancer，2008，8（1）：61-70.

［9］ R?DEL F，HOFFMANN J，DISTEL L，et al.Survivin as a radioresistance factor，and prognostic and therapeutic target for radiotherapy in rectal cancer［J］.Cancer Res，2005，65（11）：4881-4887.

［10］RAO D D，WANG Z，SENZER N，et al.RNA interference and personalized cancer therapy［J］.Discov Med，2013，15（81）：101-110.

［責(zé)任編輯：陳詠梅］

Survivin special siRNA enhanced radiosensitivity of nasopharyngeal carcinoma cells transferred human sodium／iodide sym porter gene to131I

ZHONG Xing1， GONG Jian2， GUO Bin2， XU Hao2
（1.Ultrasound Department of Medical Imaging Center；2.Department of Nuclear Medicine，the First Affiliated Hospital，Jinan University，Guangzhou 510632，China）

Aim：To explore the effects of siRNA-mediated survivin on the enhancement radiosensitivity of Nasopharyngeal Carcinoma cell transferred Human Sodium／Iodide Symporter Gene（CNE-2-hNIS）to131I.Methods：The survivin siRNA was successfully constructed and was transiently transfected into NPC cell line CNE-2-hNIS by liposome-mediated.The expression of survivin was detected by RT-qPCR and western blot.The proliferation and apoptosis of CNE-2-hNIS after treatment with131I in vitro were detected by CCK-8 cell proliferation，colony formation assay and Annexin V-FITC／PI double-labeled flow cytometry.Results：Significant down-regulation of the survivin protein expression was found after transfection of the survivin-siRNA in CNE-2-hNIS cells.With131I treatment，the rate of proliferation in survivin-siRNA group was gradually lesser，whereas the rate of cell apoptosis was gradually increased than those of SiRNA-NC group.Conclusion：The survivin special siRNA silenced survivin gene of CNE-2-hNIS and enhanced the radiosensitivity of CNE-2-hNIS to131I.

R736.1

A

1000-9965（2015）03-0246-05

10.11778／j.jdxb.2015.03.010

2015-01-13

廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項(xiàng)目（A2012342）；廣東省科技計(jì)劃基金項(xiàng)目（2011B061200028）

鐘 興（1974-），副主任醫(yī)師，博士研究生，研究方向：分子影像學(xué)Mobile：13725197597；E-mail：tzhxing＠jnu.edu.cn