王玲華，鄒　芃

(1.東營市食品藥品檢驗(yàn)中心，山東東營257091;2.濟(jì)南市機(jī)關(guān)醫(yī)院，山東濟(jì)南250021)

RP－HPLC法測(cè)定三七接骨丸中芍藥苷的含量

王玲華1，鄒芃2

(1.東營市食品藥品檢驗(yàn)中心，山東東營257091;2.濟(jì)南市機(jī)關(guān)醫(yī)院，山東濟(jì)南250021)

摘要:目的建立高效液相色譜法測(cè)定三七接骨丸中芍藥苷的含量。方法采用Kromasil 100－A C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm。結(jié)果芍藥苷進(jìn)樣量在0.118 2～1.182 0 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為99.12%，RSD為0.66%。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于三七接骨丸中芍藥苷的含量測(cè)定。

三七接骨丸為東營市正骨醫(yī)院的醫(yī)院制劑，由三七、續(xù)斷、白芍、赤芍等13味藥材組成，具有活血化瘀，消腫止痛的功效［1，2］。臨床用于主治瘀血凝滯證，適用于跌打損傷引起的骨折及軟組織損傷［3，4］。方中赤芍具有清熱涼血，散瘀止痛的功效，白芍具有養(yǎng)血、止痛的功效，是化瘀止痛的重要藥味［5，6］。芍藥苷為赤芍和白芍的主要藥理活性成分［7］，所以建立了對(duì)該制劑中芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定的方法，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，從而保證臨床用藥的安全性和有效性。

1　儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1100高效液相色譜儀; Sartorius CP225D電子天平; KQ－300E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2試藥三七接骨丸(東營市正骨醫(yī)院，編號(hào)為1～3) ;芍藥苷對(duì)照品(批號(hào): 110736－201136，含量以96.0%計(jì)，中國食品藥品檢定研究院) ;乙腈為色譜純，純凈水為純化水，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱: Kromasil 100－A C18(4.6 mm×250 mm，5 μm) ;流動(dòng)相:乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)［8］，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm;進(jìn)樣量: 10 μL;理論板數(shù):按芍藥苷峰計(jì)算為12 593。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品10.26 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取對(duì)照品溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液制備取本品研勻，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率: 300 W，頻率: 40 kHz) 30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性對(duì)照溶液制備取按三七接骨丸處方比例除去赤芍和白芍的陰性樣品，按“2.3”項(xiàng)下的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5專屬性試驗(yàn)分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜保留時(shí)間相同的位置上，有相應(yīng)的色譜峰，且陰性對(duì)照色譜中在與芍藥苷相應(yīng)保留時(shí)間處，無干擾峰出現(xiàn)，說明處方中其他藥味對(duì)測(cè)定結(jié)果無干擾，色譜圖見圖1。

圖1　HPLC色譜圖A.對(duì)照品; B.供試品; C.陰性對(duì)照

2.6線性關(guān)系考察精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(0.059 10 mg·mL－1) 2、5、10、15、20 μL，注入液相色譜儀，依法測(cè)定。以芍藥苷對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程: Y=4 678.257 1X－4.623 3，r=0.999 9 (n=5)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.118 2～1.182 0 μg之間其與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7精密度試驗(yàn)精密吸取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液10 μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積，計(jì)算芍藥苷色譜峰面積的RSD為0.21%，表明精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12 h測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算芍藥苷色譜峰面積的RSD為0.64%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9重復(fù)性試驗(yàn)取樣品，共6份，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，測(cè)定，計(jì)算含量，芍藥苷平均含量為3.962 8 mg·g－1，RSD為0.86%，表明重復(fù)性良好。

2.10加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的樣品(芍藥苷含量為3.962 8 mg·g－1)，共6份，每份0.25 g。精密加入芍藥苷對(duì)照品甲醇溶液(含芍藥苷0.197 0 mg·mL－1) 5.0 mL，精密加入甲醇50 mL，按供試品溶液制備方法制備，并按上述測(cè)定條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1　回收率測(cè)定結(jié)果(n=6)

2.11樣品測(cè)定取3批樣品，按建立的方法測(cè)定芍藥苷的含量。精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果1～3號(hào)樣品中芍藥苷的含量分別為3.96、3.80、3.91 mg·g－1。

3　討論

3.1含量測(cè)定提取方法考察為了保證含量測(cè)定的準(zhǔn)確性，對(duì)供試品溶液制備方法中超聲提取時(shí)間(15、30、45、60 min)進(jìn)行考察，結(jié)果采用超聲30 min為宜。3.2含量測(cè)定流動(dòng)相考察選擇流動(dòng)相時(shí)，分別考察了乙腈－0.1%磷酸溶液、甲醇－0.05 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液等流動(dòng)相組成，結(jié)果表明乙腈－0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，所得色譜峰峰形較好，而且操作便捷。

3.3含量測(cè)定耐用性考察同時(shí)對(duì)Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Shim－pack VPODS(4.6 mm×250 mm，5 μm)等色譜柱按上述色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果色譜峰的峰形均較好，說明建立的三七接骨丸中芍藥苷含量的測(cè)定方法耐用性較好。該方法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，是控制該制劑內(nèi)在質(zhì)量的可行方法。

參考文獻(xiàn):

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010: 96，147.

［2］辛愛玲，郭潤琴.三七接骨丸中三七的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.海峽藥學(xué)，2014，26(9) :55－58.

［3］張虹，李淑芳.高效液相色譜法測(cè)定三七接骨丸中三七皂苷R1的含量［J］.中醫(yī)藥臨床雜志，2012，24(5) : 461－462.

［4］韓軍濤.三七接骨丸治療colle's骨折40例［J］.中醫(yī)研究，2008，21(9) :73－74.

［5］王嘉林，程芳，趙靜，等.三七接骨丸中四環(huán)三萜類類皂苷的含量測(cè)定及制粒穩(wěn)定性研究［J］.中國藥師，2014，17(11) :1873－1875.

［6］張虹.三七接骨丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［D］.長(zhǎng)沙:湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

［7］李捷瑋，金柔男，李翔.多種中成藥中芍藥苷的含量測(cè)定［J］.藥物分析雜志，2009，29(9) :1440－1443.

［8］程?hào)|方，謝紀(jì)珍，賈元印.HPLC法測(cè)定血康顆粒中芍藥苷的含量［J］.藥學(xué)研究，2013，32(3) :150－152.

·臨床藥學(xué)·

關(guān)鍵詞:反相高效液相色譜法;三七接骨丸;芍藥苷

Determination of paeoniflorin in Sanqi Jiegu Pills by RP－HPLC

WANG Ling-hua1，ZOU Peng2
(1.Dongying Inspection Center for Food and Drug，Dongying 257091，China;2.Jinan Municipal Organs Hospital，Jinan 250021，China)

Abstract:ObjectiveTo establish a RP－HPLC method for the determination of paeoniflorin in Sanqi Jiegu Pills.Methods The method was performed on a Kromasil 100－A C18(4.6 mm×250 mm，5 μm) column with acetonitrile －0.1%phosphoric acid (12∶88) .The column temperature was 30℃.The detection wavelength was 230 nm.Results There was a good linear relationship between the absorption area and the concentration in the range of 0.118 2～1.182 0 μg for paeoniflorin.The average recovery of standard addition were 99.12%，RSD=0.66% (n=6) .ConclusionThis method was simple，accurate and can be used for the quality control of Sanqi Jiegu Pills.

Key words:RP－HPLC; Sanqi Jiegu Pills; Paeoniflorin

作者簡(jiǎn)介:王玲華，女，主管中藥師，研究方向:藥品檢驗(yàn)，E－mail: dywanglinghua@163.com

中圖分類號(hào):R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào):2095－5375(2015) 10－0579－003