沈艷麗，劉建平

(魯南制藥集團股份有限公司，國家手性制藥工程技術研究中心，山東臨沂276006)

離子色譜法測定鹽酸法舒地爾注射液中的高哌嗪

沈艷麗，劉建平

(魯南制藥集團股份有限公司，國家手性制藥工程技術研究中心，山東臨沂276006)

摘要:目的建立鹽酸法舒地爾注射液中高哌嗪含量的離子色譜檢測方法。方法采用IonPac CS12A(4 mm ×250 mm)陽離子交換色譜柱;以20 mmol·L－1甲磺酸水溶液－乙腈(80∶20)為淋洗液，流速為1.0 mL·min－1;外接抑制器，以100 mmol·L－1四丁基氫氧化銨水溶液為再生液;進樣量為50 μL，檢測器溫度為30℃。結果高哌嗪在0.30～7.56 μg·mL－1濃度范圍內線性關系良好(r=0.999 7)，平均回收率為99.99%。結論該法靈敏度高、專屬性強、重現(xiàn)性好，可用于鹽酸法舒地爾注射液中高哌嗪的含量測定。

關鍵詞:離子色譜;抑制器;鹽酸法舒地爾注射液;高哌嗪

鹽酸法舒地爾(Fasudil Hydrochloride)是異喹啉磺胺衍生物，由旭化成制藥株式會社開發(fā)，其注射液于1995年在日本首次上市，在臨床上用于蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣等引起的缺血性腦血管疾病癥狀的改善［1～4］。離子色譜法(IC)是一種主要用于陰、陽離子的新型分析技術，具有選擇性好，靈敏、快速、簡便、環(huán)保，近年來也被應用于藥物及合成中間體的分析等方面［5～7］。高哌嗪為鹽酸法舒地爾的原料和降解產(chǎn)物，張錦梅等［8］采用非抑制電導離子色譜法對鹽酸法舒地爾原料中高哌嗪進行了測定，但靈敏度較低。而陳梅蘭等［9］采用抑制性離子色譜法對鹽酸法舒地爾原料中高哌嗪進行了測定，靈敏度高。至今未見鹽酸法舒地爾注射液中高哌嗪含量測定方法的報道，而鹽酸法舒地爾降解亦會產(chǎn)生高哌嗪［10］，因此為了嚴格控制鹽酸法舒地爾注射液的質量，需要對高哌嗪進行檢查。由于高哌嗪沒有紫外吸收，極性又較大，用高效液相色譜(HPLC)法無法進行有效檢測。本文采用離子色譜法，建立了鹽酸法舒地爾注射液中高哌嗪含量的測定方法，經(jīng)方法學驗證，該法靈敏度高、專屬性強、精密度好、回收率高，可準確測定鹽酸法舒地爾注射液中高哌嗪的含量，有效控制鹽酸法舒地爾注射液的質量。

1　儀器與試藥

1.1儀器戴安1996－2001型離子色譜儀，ECD(電導)檢測器; IonPac CS12A(4 mm×250 mm)色譜柱及CG12A保護柱(50 mm×4 mm) ; CMMS300_4mm抑制器; Cascadatm LS MK2超純水系統(tǒng)(PALL公司) ;梅特勒XS205DU型電子天平。

1.2試藥高哌嗪對照品(含量: 99.99%，Alfa Aesar公司，批號: L06392) ;甲磺酸為分析純;實驗用水均為電阻率為18.2 MΩ·cm的超純水，乙腈(色譜純，Merck公司) ;鹽酸法舒地爾注射液［山東新時代藥業(yè)有限公司，規(guī)格(2 mL: 30 mg)，批號: 131201、131202、131203］。

2　方法與結果

2.1溶液制備供試品溶液:取本品5支，定量轉移至25 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

對照品溶液:取高哌嗪對照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含5 μg的溶液，搖勻，濾過，即得。

系統(tǒng)適用性溶液:取本品和高哌嗪對照品各適量，用溶劑溶解并稀釋制成每1 mL中約含鹽酸法舒地爾6 mg和高哌嗪5 μg的混合溶液，搖勻，濾過，即得。

2.2色譜條件淋洗液:20 mmol·L－1甲磺酸水溶液－乙腈(80∶20) ;再生液:100 mmol·L－1四丁基氫氧化銨水溶液;檢測器溫度:30℃;流速:1.0 mL·min－1;進樣量: 50 μL。溶劑: 20 mmol·L－1甲磺酸水溶液。

2.3專屬性試驗取空白輔料、系統(tǒng)適用性溶液、對照品溶液和供試品溶液各50 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，色譜圖見圖1。

圖1　IC譜圖A.空白輔料; B.系統(tǒng)適用性溶液; C.對照品溶液; D.供試品溶液1.高哌嗪; 2.鹽酸法舒地爾; 3.鈉離子

由圖1可見，空白輔料不干擾本品高哌嗪的檢查，高哌嗪峰與鈉離子峰、鹽酸法舒地爾峰的分離度均符合要求，本法能有效檢出鹽酸法舒地爾注射液中的高哌嗪。

2.4線性與范圍取高哌嗪對照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照儲備液;精密量取儲備液0.3、1.0、2.5、4.0、5.0、6.0、7.5 mL，分別置100 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，依法測定，以濃度(C)對峰面積(A)進行線性回歸，得高哌嗪的回歸方程A=0.056 9C+0.005 8，r=0.999 7(n=7)。結果表明，高哌嗪在0.30～7.56 μg·mL－1濃度范圍內線性關系良好。

2.5精密度試驗取“2.4”項下的儲備液，分別精密量取2.5、5.0、7.5 mL，各置100 mL的量瓶中，溶劑稀釋至刻度，分別制成低、中、高濃度的供試品溶液，每個濃度配制3份，分別依法測定，計算得低、中、高濃度供試品溶液峰面積的RSD分別為0.667%、0.331%、0.005%。結果表明本法的精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗取高哌嗪對照品溶液和鹽酸法舒地爾供試品溶液分別于配制后0、1、2、4、6、8、10 h取樣依法測定，結果高哌嗪峰面積的RSD為0.45%，鹽酸法舒地爾峰面積的RSD為1.98%，結果表明對照品溶液和供試品溶液至少在10 h內穩(wěn)定。

2.7加樣回收率試驗取鹽酸法舒地爾注射液(批號: 131201) 100支，定量轉移至200 mL量瓶中，搖勻，作為校正儲備液;精密量取校正儲備液10 mL，置25 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為校正溶液;分別精密量取“2.4”項下高哌嗪對照儲備液各2.5、5.0和7.5 mL及校正儲備液各10 mL，置同一25 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為低、中、高濃度的供試品溶液，各3份;按“2.1”項下配制對照品溶液。精密量取上述校正溶液、供試品溶液及對照品溶液各50 μL，依法測定，結果高哌嗪的回收率為99.09%～100.69%，平均回收率為99.99%，RSD為0.54%。說明此法測定本品中高哌嗪的回收率良好。

2.8耐用性試驗通過改變流速(±20%)、柱溫(±5℃)、流動相中乙腈比例(±5%)后，對照品溶液中高哌嗪峰面積無顯著性差異;系統(tǒng)適用性溶液中高哌嗪峰與法舒地爾峰的分離度均符合要求;供試品溶液中均未檢出高哌嗪。證明本方法的耐用性較好。

2.9定量限和檢測限取高哌嗪對照品溶液逐步稀釋，以S/N≈10時，定量限濃度為0.03 μg·mL－1，定量限為1.5 ng;以S/N≈3時檢測限濃度為0.01 μg·mL－1，檢測限為0.5 ng。

2.10樣品測定取鹽酸法舒地爾注射液(批號:131201、131202、131203)各適量，依法測定，結果本品3批樣品均未檢出高哌嗪。

3　討論

3.1對淋洗液的濃度進行了考察，結果淋洗液濃度為20 mmol·L－1時，峰形較好，靈敏度較高。

3.2為消除背景溶劑干擾，提高靈敏度，外部連接抑制器，分別以CMMS 300_4 mm和CSRS_4 mm抑制器進行試驗，發(fā)現(xiàn)以CMMS 300_4 mm抑制器，選擇四丁基氫氧化銨水溶液作為再生液，當再生液濃度為100 mmol·L－1時，獲得理想色譜圖，靈敏度高，溶劑無干擾。

3.3該方法快速、方便，靈敏度高、重現(xiàn)性好，高哌嗪峰形較好，溶劑和輔料無干擾，可準確測定鹽酸法舒地爾注射液中高哌嗪的含量，有效控制其質量。

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Determination of homopiperazine in Fasudil Hydrochloride Injection by ion chromatographic

SHEN Yan-li，LIU Jian-ping
(Lunan Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，National Engineering and Thecnology Research Center of Chirality Pharmaceutical，Linyi 276006，China)

Abstract:Objective To establish an ion chromatographic method for the determination of homopiperazine in Fasudil Hydrochloride Injection.Methods The samples were analyzed on the IonPac CS12A(4 mm×250 mm) exchange column，and connected the external suppressor，the mobile phase was 20 mmol·L－1mesilate in water－acetonitrile(80∶20)，the regen liquid was 100 mmol·L－1tetrabutyl ammonium hydroxide in water，the flow rate was 1.0 mL·min－1，the injection volumn was 50 μL and the detector temperature was 30℃.Results The linear range of homopiperazine was 0.30～7.56 μg·mL－1，r=0.999 7，The average recovery was 99.99%.Conclusion The established method was senstitive，specific，repeatable and suitable for the determination of homopiperazine in Fasudil Hydrochloride Injection.

Key words:Ion chromatographic; Suppressor; Fasudil Hydrochloride Injection; Homopiperazine

通訊作者:劉建平，男，工程師，研究方向:新藥質量研究和新藥申報，Tel: 0539－5030526，E－mail: jianpingl2007@163.com

作者簡介:沈艷麗，女，研究方向:藥品分析方法開發(fā)及質量研究，E－mail: shenyanli0103@163.com

中圖分類號:R927.11

文獻標識碼:A

文章編號:2095－5375(2015) 10－0581－003