高萬露，汪小海

南京醫(yī)科大學(xué)鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院麻醉科，南京 210008

脂肪乳劑用于小鼠急性酒精中毒復(fù)蘇效果的觀察

高萬露，汪小海*

南京醫(yī)科大學(xué)鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院麻醉科，南京 210008

目的：研究脂肪乳劑用于小鼠急性酒精中毒的復(fù)蘇效果。方法：按照隨機(jī)數(shù)字表將54只小鼠隨機(jī)平均分成3組，采用56°白酒灌胃建立急性酒精中毒小鼠模型，各組均一次性給藥。A、B組為脂肪乳低、高劑量組，分別給予20%脂肪乳劑3 mL·kg-1、5 mL·kg-1，行靜脈注射；C組為對(duì)照組，3 mL·kg-1生理鹽水尾靜脈注射。觀察小鼠醉酒時(shí)間及復(fù)蘇時(shí)間。結(jié)果：3組小鼠的醉酒時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其復(fù)蘇時(shí)間A組和B組均顯著短于C組，而A組和B組復(fù)蘇時(shí)間無明顯差異。結(jié)論：20%脂肪乳劑可以促進(jìn)小鼠急性酒精中毒的復(fù)蘇，縮短其復(fù)蘇時(shí)間。

脂肪乳劑；急性酒精中毒；復(fù)蘇

急性酒精中毒是指過量飲入酒精或酒類飲料引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，表現(xiàn)行為和意識(shí)異常，嚴(yán)重者損傷臟器功能，導(dǎo)致呼吸循環(huán)衰竭，進(jìn)而危及生命。對(duì)于嚴(yán)重中毒的患者，實(shí)施以下急救措施：消化道內(nèi)酒精的促排、藥物治療、血液凈化療法以及對(duì)癥治療等。其中采用納洛酮靜滴配合對(duì)癥處理是較為常見的治療措施，但該方法僅限于促醒作用，對(duì)酒精的代謝并無確切影響。美他多辛也是目前有效的治療藥物，其可以加速乙醇的消除，促進(jìn)肝臟功能的恢復(fù)，還可以減輕酒精中毒引起的神經(jīng)精神紊亂[1]。也有報(bào)道稱蛋白酶體抑制劑ALLN（N-acetyl-leu-leu-norleucinal）通過作用于細(xì)胞凋亡通路，減輕飲酒相關(guān)的心臟組織損傷[2]。

近年來脂肪乳被發(fā)現(xiàn)在藥物中毒方面具有較好的復(fù)蘇效果。Weinberg等[3]采用大鼠模型證實(shí)了脂肪乳可以逆轉(zhuǎn)布比卡因誘導(dǎo)的心搏停止。該方法應(yīng)用于臨床獲得成功救治局麻藥中毒的病例亦有報(bào)道[4]。Tebbutt等[5]研究提示，脂肪乳劑可以延長(zhǎng)維拉帕米中毒的生存時(shí)間；Cave[6]研究指出，脂肪乳劑可以減弱麻醉藥硫噴妥鈉所致的呼吸抑制。從目前看，這些藥物屬于脂溶性藥物，美國(guó)醫(yī)學(xué)毒理學(xué)學(xué)院對(duì)此給出了脂肪乳用于臨床上藥物中毒復(fù)蘇的過渡性治療指南。酒精雖然屬于水溶性物質(zhì)，鑒于脂肪乳對(duì)上述藥物中毒治療的特殊復(fù)蘇作用，推測(cè)脂肪乳用于急性酒精中毒可能具有復(fù)蘇效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)ICR雄性小鼠54只，5周齡，體重24～28 g，購(gòu)自揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心SCXK（蘇）2012-0004，動(dòng)物合格證號(hào)：0031812。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

0.9%氯化鈉注射液（Baxter，批號(hào)CS1310007）；20%脂肪乳劑（Baxter，批號(hào)80HC131）；56°白酒（牛欄山二鍋頭酒，批號(hào)20140417）。

1.3 方法與觀察指標(biāo)

將54只小鼠隨機(jī)分為3組，A組：脂肪乳劑低劑量組，小鼠醉酒后予3 mL·kg-1體重、20%脂肪乳劑尾靜脈注射（1 min內(nèi)完成，其它兩組均相同）；B組：脂肪乳劑高劑量組，小鼠醉酒后予5 mL·kg-1體重、20%脂肪乳劑尾靜脈注射；C組：生理鹽水對(duì)照組，小鼠醉酒后予3 mL·kg-1體重、生理鹽水尾靜脈注射。各組小鼠均予以15 mL·kg-1白酒灌胃，出現(xiàn)醉酒狀態(tài)（以翻正反射消失為依據(jù)）后小鼠分別按分組情況一次性給藥[7]。觀察記錄小鼠醉酒時(shí)間（從灌胃到翻正反射消失的時(shí)間）和復(fù)蘇時(shí)間（從翻正反射消失到翻正反射恢復(fù)的時(shí)間）。排除灌胃后立即死亡及3 h以上仍未出現(xiàn)醉酒狀態(tài)的小鼠。

翻正反射消失是小鼠酒精中毒時(shí)常用的行為學(xué)測(cè)試方法[8]。小鼠醉酒與否，以翻正反射是否消失為標(biāo)準(zhǔn)，小鼠灌胃后將其背向下，輕放入鼠籠，若小鼠背向下的姿勢(shì)保持30 s以上，則認(rèn)為翻正反射消失，即為醉酒。小鼠復(fù)蘇的標(biāo)志為翻正反射恢復(fù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組定量資料比較采用t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD法。P＜0．05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

A組小鼠灌胃后立即死亡1只，3 h內(nèi)未醉酒2只；B組小鼠灌胃后立即死亡2只，3 h內(nèi)未出現(xiàn)醉酒狀態(tài)的2只；C組小鼠灌胃后立即死亡1只，3 h內(nèi)未醉酒1只。余下45只小鼠用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3組小鼠的體重?zé)o明顯差異（F=1．42，P=0．25）。小鼠的醉酒時(shí)間亦無明顯差異（F=0．48，P=0．62）。與對(duì)照組比較，脂肪乳劑高、低劑量組治療性給藥均可以明顯縮短小鼠復(fù)蘇時(shí)間（P＜0．05）。對(duì)照組與脂肪乳劑低劑量組相比，復(fù)蘇時(shí)間延長(zhǎng)（105．37±24．59）min（95% CI，55．45～155．28 min）；對(duì)照組與脂肪乳劑高劑量組相比，復(fù)蘇時(shí)間延長(zhǎng)（67．62±24．59）min（95%CI，17．70～117．53 min）。脂肪乳劑高劑量組和低劑量組的復(fù)蘇時(shí)間無明顯差異（P=0．148）。結(jié)果見表1、表2。

表1 各組小鼠體重、醉酒時(shí)間及復(fù)蘇時(shí)間比較（±s）

表1 各組小鼠體重、醉酒時(shí)間及復(fù)蘇時(shí)間比較（±s）

注：A：脂肪乳低劑量組；B脂肪乳高劑量組；C：生理鹽水對(duì)照組；與C組比較，aP＜0．05

組別n 體重/g 醉酒時(shí)間/min 復(fù)蘇時(shí)間/min A組15 26．42±0．67 68．33±54．15 108．92±40．35aB組15 25．92±1．68 70．00±55．59 146．67±60．50aC組15 25．57±1．28 52．21±45．48 214．29±77．73

表2 各組小鼠復(fù)蘇時(shí)間兩兩比較

3 討 論

臨床上機(jī)體攝入酒精后，除了少量未被代謝的乙醇經(jīng)呼吸道揮發(fā)或尿液排出以外，大部分乙醇在肝臟進(jìn)行氧化代謝，若代謝不足，過量的乙醇可以透過血腦屏障，在腦組織中濃度增加，干擾神經(jīng)遞質(zhì)和受體的功能，抑制大腦皮質(zhì)和皮質(zhì)下中樞，從而出現(xiàn)醉酒狀態(tài)。研究表明，乙醇可以通過直接作用于細(xì)胞膜上的受體和離子通道影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能[8]。本研究對(duì)小鼠醉酒后的復(fù)蘇進(jìn)行了觀察，發(fā)現(xiàn)靜注脂肪乳劑的兩組小鼠的復(fù)蘇時(shí)間均顯著短于對(duì)照組，該結(jié)果提示脂肪乳對(duì)小鼠急性酒精中毒具有較好的復(fù)蘇作用。

目前，關(guān)于脂肪乳解救局麻藥中毒作用機(jī)制的研究較多，Weinbery等[9]使用狗建立布比卡因誘導(dǎo)的心臟停搏模型，脂肪乳組均復(fù)蘇成功，對(duì)照組則復(fù)蘇失敗。他們認(rèn)為脂肪乳可能的作用機(jī)制是將血管內(nèi)局麻藥分割為新的脂質(zhì)間隔，導(dǎo)致局麻藥與作用部位分離，從而減弱其對(duì)靶器官的損害。一項(xiàng)對(duì)小鼠離體心臟的研究發(fā)現(xiàn)，脂肪乳加速布比卡因從心臟組織的移除，促進(jìn)布比卡因中毒所致心臟停搏的恢復(fù)[10]。Stehr等[11]進(jìn)一步探討了脂肪乳的作用機(jī)制，認(rèn)為脂肪乳對(duì)左旋布比卡因誘導(dǎo)的心臟抑制有增強(qiáng)心臟收縮力的效應(yīng)，并認(rèn)為脂肪乳作為“脂質(zhì)槽”與局麻藥結(jié)合降低血漿游離藥物濃度，減弱其毒性作用。Litz等[12]報(bào)道了一例老年男性患者接受1%甲哌卡因30 mL與1%丙胺卡因10 mL進(jìn)行鎖骨下臂叢神經(jīng)阻滯后出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心臟的中毒現(xiàn)象，予以20%脂肪乳200 mL，5 min后中樞神經(jīng)系統(tǒng)中毒癥狀消失，15 min后心臟中毒癥狀消失，接著檢測(cè)了患者局麻藥的血藥濃度，發(fā)現(xiàn)藥物濃度顯著下降，其認(rèn)為脂肪乳對(duì)于局麻藥引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中毒癥狀有較好地治療效果。

脂肪乳劑是由大豆油、卵磷脂及甘油組成，其中卵磷脂作為常用的乳化劑，其分子結(jié)構(gòu)中既存在親水區(qū)，也存在疏水區(qū)。本研究結(jié)果提示，脂肪乳可以縮短急性酒精中毒的復(fù)蘇時(shí)間，而乙醇與局麻藥、硫噴妥鈉、維拉帕米等脂溶性藥物不同，推測(cè)脂肪乳對(duì)酒精中毒有效可能與卵磷脂的理化性質(zhì)有關(guān)，即卵磷脂的親水區(qū)可以與乙醇結(jié)合，從而降低血漿中游離乙醇濃度，減輕其對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害，加速乙醇過量中毒的恢復(fù)。

本研究采用白酒直接灌胃建立急性酒精中毒模型，由于小鼠呈現(xiàn)酒精中毒時(shí)其胃內(nèi)酒精并未完全吸收，即還處于不斷吸收的狀態(tài)，因此研究小鼠的復(fù)蘇時(shí)間并不能直接反映脂肪乳對(duì)小鼠急性酒精中毒的復(fù)蘇效果，也就是說，如果增加中毒后洗胃措施，則其復(fù)蘇時(shí)間可能會(huì)縮短。由于以恢復(fù)翻正反射的時(shí)間作為復(fù)蘇效果的評(píng)價(jià)指標(biāo)，雖然具有一定的參照價(jià)值，但是如果持續(xù)監(jiān)測(cè)小鼠的生命體征及重要臟器的功能則更有利于評(píng)估小鼠的復(fù)蘇效果，可能有助于更好地評(píng)價(jià)脂肪乳的治療價(jià)值。值得注意的是，雖然脂肪乳低劑量組和高劑量組的復(fù)蘇時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是低劑量脂肪乳的復(fù)蘇時(shí)間短于高劑量組，可見脂肪乳用于急性酒精中毒復(fù)蘇的劑量并不是越高越好，其最佳劑量有待研究。2011年美國(guó)醫(yī)學(xué)毒理學(xué)學(xué)院給出脂肪乳用于臨床上藥物中毒復(fù)蘇治療時(shí)的過渡性指南，推薦使用方法為20%脂肪乳首劑為1.5 mL·kg-1緩慢推注2～3 min以上，首劑無效者，可以重復(fù)注射，繼以0.25 mL·kg-1·min-1持續(xù)給藥，同時(shí)監(jiān)測(cè)生命體征，調(diào)整給藥劑量和時(shí)間[13]。在以往研究脂肪乳治療局麻藥中毒的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，所使用的劑量不同，大多數(shù)研究的劑量在5 mL·kg-1以上，本研究選擇的脂肪乳劑量相對(duì)較小，且未在首劑注射后持續(xù)輸注給藥，如果研究中監(jiān)測(cè)小鼠生命體征并持續(xù)給藥，其復(fù)蘇效果可能更佳。

總之，脂肪乳可以促進(jìn)小鼠急性酒精中毒的復(fù)蘇，但是合理的劑量和給藥策略以及作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究，且需要更多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)證實(shí)。

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Lipid Emulsion Rescues Mice from Alcohol Induced Intoxication

GAO Wan-lu,WANG Xiao-hai*
Department of Anesthesiology,Affiliated Drum Tower Hospital of Medical College of Nanjing University, Nanjing 210008,China

Objective:Previous investigators have demonstrated the benefit of lipid emulsion therapy in ameliorating toxicity from local anesthetics.The aim of this study was to study the effect of intralipid treatment in mice model of acute alcoholism.Methods:Fifty-four mice were intragastrically administered with 56%ethanol solution at 15 mL·kg-1body weight.Once the mice were in ebriety,they were treated with a bolus of 3 or 5 mL·kg-1body weight 20%intralipid,or 3 mL·kg-1body weight 0.9%saline(normal saline,NS).Ebriety time and resuscitation time were recorded.Results:There was no significant difference for ebriety time among the three groups.Compared with the NS group,treatment with 20%intralipid sig-nificantly shortened resuscitation time.However,the resuscitation times between the groups with 3 or 5 mL· kg-1body weight 20%intralipid were not significantly different.Conclusion:Intralipid could shorten the resuscitation time of acute alcoholism in the mice model.

Intralipid;Acute alcoholism;Resuscitation

R965

A

1673-7806（2015）03-226-03

高萬露，女，碩士生 E-mail:gaowanlu1213@163.com

*通訊作者汪小海，男，主任醫(yī)師 E-mail:519602322@qq.com

2014-10-22

2014-12-07