唐暉慧

(1黃山學院旅游學院，安徽黃山 245021;2揚州大學旅游烹飪學院，江蘇揚州 225009)

我國是酒的故鄉(xiāng)，數(shù)千年文化積淀，酒幾乎滲透到社會生活的各個角落，形成了悠久深遠的酒文化。少量飲酒具有益處，如促進血液循環(huán)、加快新陳代謝等，但是過量飲酒導致大腦反應遲鈍、視力下降、語言能力降低、行為不受控制，此外，還帶來了許多嚴重的經(jīng)濟、健康和社會問題。研究發(fā)現(xiàn)，乙醇在機體內(nèi)的代謝主要依靠肝臟中的乙醇脫氫酶等酶作用后轉(zhuǎn)化為乙醛，之后在乙醛脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)化為乙酸，從而排出體外［1］。在乙醇的代謝過程中，會使得機體肝臟中的自由基大量形成，使得肝臟的氧化性應激增強，大大加強了肝臟中的脂質(zhì)過氧化反應，從而導致機體肝臟的損傷。乙醛也會通過降低肝臟中谷胱甘肽的濃度來增強肝臟的氧化性應激。因此，在不能立刻拒絕飲酒時，解酒保肝成為克服飲酒所帶來的傷害的又一途徑。肝病的發(fā)生過程中自由基起到了極其重要的作用，因此增強肝臟的抗氧化能力是保護肝臟免受乙醇代謝傷害的主要途徑［2］。我國的藥食同源植物資源豐富，自古以來已發(fā)現(xiàn)眾多具有解酒保肝、抗氧化功效的植物，此外由于價格便宜、作用獨特、毒副作用小等特點，廣受青睞。目前，單一植物原料或其所含成分的解酒或抗氧化活性研究較多，但復合配方的相關研究極少。

本研究旨在藥食兼用植物中尋找具有解酒保肝功效的植物提取物配方。通過考察10 種常用解酒植物水提物的乙醇保持率、總抗氧化能力、DPPH 自由基清除率、超氧陰離子自由基清除活性，篩選出具有相對較強活性的原料組成配方。

1 材料與方法

1.1 材料

原料半夏(Pinella ternate)、枳椇子(Hovenia dulcis)、青果(Canarium album)、葛根(Pueraria lobata)、青皮(Vatica mangachapoi Blauco)、五味子(Schisandra chinensis)、菊花 (Chrysanthemun morifolium)、白術(Atractylodes macrocephala)、肉豆蔻 (Myristica fragrans)、桑椹(Morus alba)，均購自黃山市華氏大藥房;總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒，南京建成生物工程研究所;還原型輔酶I (NADH)，ICN Biomedicals 公司;吩嗪硫酸甲酯(PMS)，上海源葉生物科技有限公司;氯化氮藍四唑(NBT)，上?；瘜W試劑公司;無水乙醇(色譜純)、無水正丙醇(色譜純)、其他試劑與藥品，國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 主要儀器設備

Agilent7890 氣相色譜儀、DB-WAX 色譜柱(30m×0.25mm，0.25μm)，美國Agilent 公司;Alpha-D2 凍干機，德國Christ 公司;PHS-3C pH 計，上海雷磁有限公司;UV752N 紫外可見分光光度計，上海儀電分析儀器有限公司;AB135-S 電子天平，梅特勒托利多上海公司。

1.3 方法

1.3.1 受試物的制備

分別取10 種原料的生藥各1 kg，加入5 L 水，分別煎煮3 次，每次1.5 h，合并濾液，經(jīng)負壓蒸發(fā)濃縮，再抽濾，再減壓濃縮至稠狀，真空冷凍干燥，粉碎，得到粗提物粉末，置于－20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩４郎y樣品溶液配制:將上述10 種原料水提物分別稱取0.05 g，定容于10 mL 容量瓶中，配置為0.5%原料水提物溶液，備用。

1.3.2 乙醇保持率測定

乙醇保持率是指解酒物質(zhì)包裹乙醇，使得游離乙醇量減少，抑制或延緩乙醇的體內(nèi)吸收。待測樣品溶液制備同1.3.1 項。測定溶液配制:于10 mL 具塞容量瓶中添加0.2 mL 無水乙醇和0.25 mL 待測樣品溶液搖勻，靜置1 h，再加入0.2 mL 無水正丙醇，最后用丙酮定容至刻度，測定溶液中乙醇含量。

乙醇保持率(%)=［(添加乙醇含量－處理后測定乙醇含量)/添加乙醇含量］×100%

乙醇含量的測定參考《中國藥典》2010 版一部附錄IX M［3］，采用內(nèi)標法測定，正丙醇為內(nèi)標物。色譜條件:升溫程序:初溫50 ℃保留7 min，以10 ℃/min 升至110 ℃，保留3 min;載氣N2:3.0 mL/min;H2:47.0 mL/min;空氣流速:400 mL/min;檢測器溫度:220 ℃;進樣口溫度:200 ℃;分流比:100∶1。

1.3.3 總抗氧化能力測定

具有抗氧化性質(zhì)的物質(zhì)能將Fe3+還原成Fe2+，而Fe2+能與菲啉物質(zhì)形成穩(wěn)固的絡合物，因此可以通過比色法來測定這類物質(zhì)抗氧化能力的高低?？偪寡趸芰Φ亩x:在37 ℃時，每分鐘每毫克樣品使反應體系的吸光度(OD)值，每增加0.01 時，為一個總抗氧化能力。待測樣品溶液制備同1.3.1 項。測定步驟按照試劑盒說明書所列操作流程進行。

1.3.4 DPPH 自由基清除能力測定

通過DPPH 自由基清除率表現(xiàn)待測樣品的抗氧化活性［4］。待測樣品溶液制備同1.3.1 項。分別取1 mL 待測樣品溶液與2 mL 濃度為0.1 mmol/L 的DPPH 乙醇溶液混勻，在避光處靜置30 min 測定吸光度A 樣品，同時測定1 mL 溶劑(水)與2 mL 濃度為0.1 mmol/L 的DPPH 乙醇溶液混勻后的吸光度A 對照，以及1 mL 待測樣品溶液與2 mL 無水乙醇混勻后的吸光度A 空白。自由基清除率按(1)式計算:

1.3.5 超氧陰離子自由基清除活性測定

由還原型輔酶Ⅰ-吩嗪硫酸甲酯—氯化硝基四氮唑藍體系(NADH-PMS-NBT)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，還原NBT 為藍色物質(zhì)，在波長560nm 處有最大吸收值［5］。待測樣品溶液制備同1.3.1 項。1 號溶液配制:加入1 mL 150 μmol/L NBT 溶液、1 mL 468 μmol/L NADH 溶液、2 mL待測樣品溶液和1 mL 60 μmol/L PMS 溶液;2 號溶液配制:1 mL NBT 溶液、1 mL NADH 溶液、2 mL 待測樣品溶液和1 mL 磷酸鹽緩沖液;3 號溶液配制:1 mL NBT 溶液、1 mL NADH 溶液、2 mL 甲醇和1 mL PMS 溶液。溶液配制后置于常溫下反應6 min，然后于560 nm測定其吸光值，1～3 號溶液的吸光度分別為A1、A2和A3。根據(jù)(2)式計算各樣品對超氧陰離子自由基的清除率:

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

每組試驗做6 次平行，以(平均值±標準偏差)表示。組間差異采用SPSS 16.0 進行單因素分析(ANOVA)，確定差異是否有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 乙醇保持活性

乙醇在機體中一般經(jīng)過口腔、食管、胃腸黏膜等吸收到體內(nèi)各組織器官中，約5 min 后便會出現(xiàn)在血液中。通過解酒物質(zhì)包裹乙醇，減少或延緩機體對乙醇的吸收。本研究采用氣相色譜法測定各水提物處理后溶液的乙醇含量，計算樣品的乙醇保持率，由圖1 可知，10 種原料水提物都具有不同程度的乙醇保持活性。不同原料間的顯著性分析結(jié)果［以字母順序(a－i)表示活性高低］顯示青果水提物的乙醇保持率最高，其次是桑椹，再次是枳椇子。

圖1 不同原料水提物的乙醇保持率

2.2 總抗氧化力

乙醇會使肝臟產(chǎn)生大量自由基，為了降低自由基對機體所帶來的損傷，應適當?shù)匮a給機體外源性抗氧化劑或者給予能夠促進機體內(nèi)源性抗氧化劑恢復到一定水平的藥物。對所選用的10 種原料水提物進行總抗氧化能力測定，由圖2 知，青果水提物的總抗氧化力最高，其次是枳椇子和菊花。

圖2 不同原料水提物的總抗氧化力

2.3 DPPH 自由基清除活性

DPPH 在有機溶液中是一種穩(wěn)定的自由基，由于其氮原子上有一個孤電子，反應系統(tǒng)中的自由基清除劑能與DPPH 的孤電子配對，使得反應液的顏色變淺，以變化程度來評價抗氧化能力的強弱。由圖3 可知，枳椇子水提物清除DPPH 自由基的活性最強，其次是菊花，再次是青果。

圖3 不同原料水提物的DPPH 自由基清除活性

2.4 超氧陰離子自由基清除活性

乙醇代謝過程中會產(chǎn)生大量的超氧陰離子自由基，特別是在機體氧化還原的平衡系統(tǒng)遭到破壞時，超氧陰離子自由基的濃度急劇升高，超氧陰離子自由基可以在一定條件下轉(zhuǎn)化為其他活性較強的含氧自由基。由此說明，若某物質(zhì)具有較強的清除此自由基活性便能有效地抑制其他含氧自由基的生成，在一定程度上保護機體免受氧自由基的損傷。由圖4 可知，菊花水提物清除超氧陰離子自由基的活性最高，其次是枳椇子、青果和青皮。

圖4 不同原料水提物的超氧陰離子自由基清除活性

從以上結(jié)果發(fā)現(xiàn)，青果、枳椇子、桑椹等水提物都具有較高的抗氧化活性，從乙醇代謝機制上看，這些物質(zhì)理論上能夠在一定程度上減輕機體氧化損傷的程度。在已有研究中，于修燭等［6］發(fā)現(xiàn)，枳椇子乙醇提取物具有較強抑制脂質(zhì)氧化的能力。姚瑞祺［7］發(fā)現(xiàn)，不同溶劑提取的青果多酚在DPPH 自由基清除試驗、總抗氧化能力測試中表現(xiàn)優(yōu)于BHT 和TBHQ。Isabelle 等［8］闡明桑椹所含多酚、花色苷、原花青素的含量與其過氧化氫自由基的清除能力存在相關性。顧瑋蕾等［9］研究發(fā)現(xiàn)，桑椹中主要的抗氧化有效成分來自于水溶性成分。醫(yī)學研究認為枳椇子具有清熱利尿，止咳除痰，解酒毒功效;桑椹能解除酒精中毒、保護肝臟和腎臟等;青果可防醉、抗菌、抗病毒和解除毒素。綜合乙醇保持率和抗氧化活性結(jié)果，綜合考慮其解酒功效、口感、色澤、原料成本等因素，選擇桑椹、枳椇子和青果水提物組成配方，并進一步優(yōu)化配比。

3 結(jié)論

為探索解酒配方，通過測定10 種植物原料水提物的乙醇保持率、總抗氧化力、DPPH 自由基清除率和超氧陰離子自由基清除率，根據(jù)測定結(jié)果，篩選出桑椹、枳椇子和青果水提物作為配方組分。以乙醇保持率與超氧陰離子自由基清除率作為評價指標，通過響應面法優(yōu)化3 種組分的最佳配比為4.43 g:3.47 g:4.71 g (桑椹:枳椇子:青果)。經(jīng)過急性毒性試驗、防醉試驗、解酒試驗、攀附試驗證實此配方對小鼠無不良反應，而且能增長醉酒小鼠的睡眠潛伏期，縮短醉酒小鼠的睡眠時間，并增長小鼠的攀附時間，起到一定的防醉解酒效果。桑椹、枳椇子和青果都是藥食同源植物，說明此配方可開發(fā)為防醉解酒保健食品，此配方對機體的影響和在體內(nèi)的作用機理仍需進一步研究。

［1］Giriwono PE，Hashimoto T，Ohsaki Y，et al.Extract of fermented barley attenuates chronic alcohol induced liver damage by increasing antixoidative activities ［J］.Food Research International，2010，43(1):118-124.

［2］Huang CH，Chang YY，Kang WY，et al.Fruiting body of Niuchangchih (Antrodia camporata)protects livers against livers against chronic alcohol comsumption damage ［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2010，58:3859-3866.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2010 版).一部附錄IX M 乙醇量測定法［S］.

［4］Sharma OP，Bhat TL.DPPH antioxidant assay revisited ［J］.Food Chemistry，2009，113(4):1202-1205.

［5］Kanatt SR，Chander R，Sharma A.Antioxidant potential of mint (Mentha spicata L.) in radiation-processed lamb meat ［J］.Food Chemistry，2007，100(2):451-458.

［6］于修燭，杜雙奎，李志西，等.枳椇子乙醇提取物對豬油抗氧化能力研究［J］.糧油加工，2010，12:33-37.

［7］姚瑞祺.青果多酚的提取、分離及體外抗氧化活性研究［D］.西安:陜西師范大學，2011.

［8］Isabelle M，Lee BL，Ong CN，et al.Peroxyl radical scavenging capacity，polyphenolics，and lipophilic antioxidant profiles of mulberry fruits cultivated in southern China ［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2008，56(20):9410-9416.