劉雪來 高 鵬 綜述 黃格元 審校

①(香港大學(xué)深圳醫(yī)院外科，深圳 518053)②(香港大學(xué)李嘉誠醫(yī)學(xué)院外科學(xué)系，香港 999077)③(哈爾濱市兒童醫(yī)院外科，哈爾濱 150010)

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·文獻綜述·

皮膚角朊細(xì)胞的三維培養(yǎng)*

劉雪來①②高 鵬③綜述 黃格元①②審校

①(香港大學(xué)深圳醫(yī)院外科，深圳 518053)②(香港大學(xué)李嘉誠醫(yī)學(xué)院外科學(xué)系，香港 999077)③(哈爾濱市兒童醫(yī)院外科，哈爾濱 150010)

表皮角朊細(xì)胞(keratinocyte，KC)是皮膚創(chuàng)傷后“再上皮化”過程中的主要功能細(xì)胞，其增殖和移行是創(chuàng)緣皮膚早期修復(fù)的重要生物學(xué)過程[1，2]。在體內(nèi)外環(huán)境下探索和檢測各種分子類藥物、納米顆粒材料等對KC增殖、移行和分化的功效以及創(chuàng)傷后組織結(jié)構(gòu)和功能的快速修復(fù)，是微創(chuàng)治療的熱點研究內(nèi)容之一[3]。KC的培養(yǎng)作為開展相關(guān)研究工作的前提，因其在體外環(huán)境貼壁性差，細(xì)胞活力低，增殖緩慢，對培養(yǎng)要求相對嚴(yán)格，成為創(chuàng)傷修復(fù)研究的難點。

當(dāng)前人們主要采用體外二維培養(yǎng)擴增KC，而近年來隨著三維(three-dimensional，3D)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的興起，國內(nèi)外學(xué)者亦嘗試對KC進行3D培養(yǎng)并取得成功，為人工皮膚制備提供了技術(shù)支持。本文對此進行綜述。

1 皮膚角朊細(xì)胞采用3D培養(yǎng)的原因

對于表皮KC的體外培養(yǎng)，研究者所關(guān)心的不僅是KC能否在體外環(huán)境下有效生長，還有分裂增殖和歷經(jīng)多次傳代后的KC能否依舊保持在體狀態(tài)的原有性狀[4]。在皮膚表皮內(nèi)具有增殖活力的KC主要位于棘層和基底層，其增殖和分化受到基因表達(dá)的調(diào)控，其在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控尤為重要，這些經(jīng)過調(diào)控的KC經(jīng)過一系列形態(tài)學(xué)和生化改變，最終進入角質(zhì)層形成角質(zhì)細(xì)胞。表皮本身是KC生長的內(nèi)環(huán)境，對于基因調(diào)控KC的增殖和分化至關(guān)重要。此外，各種細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞因子等也對KC生長產(chǎn)生重要影響。這些提示：傳統(tǒng)二維培養(yǎng)與體內(nèi)環(huán)境之間存在著較大的生物學(xué)差異(表1)。

傳統(tǒng)二維培養(yǎng)技術(shù)使細(xì)胞僅可以在平面內(nèi)單層生長，無法更好地模擬體內(nèi)微環(huán)境，影響了基因精確表達(dá)調(diào)控，使KC在體外培養(yǎng)環(huán)境下生長過程中逐漸喪失原有性狀特征。以皮膚創(chuàng)傷修復(fù)研究為例，各種藥物分子、分子載體、靶基因(蛋白)的激活劑或阻斷劑，以及干細(xì)胞在局部應(yīng)用之后，研究者只能借助觀察傷口面積大小改變情況來判定外源因素對傷口愈合的影響，觀察結(jié)果只代表藥物的最終效果，無法呈現(xiàn)包括對“再上皮化過程”的影響或“再上皮化過程”對“真皮收縮”影響的“修復(fù)中間過程”。因此，人們認(rèn)識到在傳統(tǒng)的體外二維細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)研究之間，應(yīng)該存在一種新的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，這種技術(shù)：①不但能有效培養(yǎng)KC，使細(xì)胞在生長傳代的同時能保持自然形態(tài)和功能，以及良好的體內(nèi)生物學(xué)性狀特征，而且有助于人們觀察和了解KC的代謝、分化、增殖、發(fā)育和移行等過程，以及對全皮膚組織構(gòu)建的影響；②貼近體內(nèi)真實環(huán)境，為臨床研究提供科學(xué)依據(jù)；③保證細(xì)胞的活力和對外界因素的敏感性[5]；④有助于了解KC在培養(yǎng)體系(模擬皮膚組織)內(nèi)的相互作用和影響；⑤規(guī)避動物皮膚燒傷、燙傷等模型制備過程中的倫理學(xué)問題。在這種情況下，3D培養(yǎng)KC技術(shù)應(yīng)運而生，其對KC的培養(yǎng)較傳統(tǒng)二維培養(yǎng)優(yōu)勢明顯，并更貼近人體內(nèi)環(huán)境條件(表1)。通過應(yīng)用具有三維結(jié)構(gòu)的材料作為載體與KC在體外共同培養(yǎng)，使KC能夠在載體特有的立體結(jié)構(gòu)中增殖、遷移和生長，形成類似皮膚表皮結(jié)構(gòu)，即培養(yǎng)體系立體結(jié)構(gòu)與皮膚切面結(jié)構(gòu)相似。

2 皮膚角朊細(xì)胞3D培養(yǎng)的探索演化過程

對KC的3D培養(yǎng)經(jīng)歷了較長的探索過程。正常皮膚表皮含有8～10層KC，呈立體排列，因此人們力圖探索和培養(yǎng)出形態(tài)學(xué)上與成人表皮結(jié)構(gòu)相近的含有數(shù)層KC的組織。最初采用3T3細(xì)胞種植于膠原蛋白表面，其上種植KC[6]，即以3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層，KC在培養(yǎng)皿底呈單層平面性生長；此后又探索將3T3細(xì)胞混入膠原蛋白來模擬真皮組織，其上種植KC[7]。2種培養(yǎng)方法均可產(chǎn)生分別具有增殖和角化特性的數(shù)層KC，被視為3D培養(yǎng)KC和制備人工皮膚的早期雛形。

表1 傳統(tǒng)二維培養(yǎng)、三維培養(yǎng)和體內(nèi)環(huán)境對角朊細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

人體皮膚的真皮來源于中胚層，與外界隔離且有血管組織，細(xì)胞外液豐富；表皮來源于外胚層，暴露于干燥的外界環(huán)境且無血管組織，細(xì)胞連接緊密。為使KC的生長環(huán)境更接近人體正常生理狀態(tài)，人們進一步探索出氣-液界面培養(yǎng)法，借助氣-液界面使3D培養(yǎng)KC最大程度地接近正常人體皮膚[8]。操作時在培養(yǎng)皿內(nèi)加上一層鋪墊，鋪墊可以是動物皮膚真皮組織，生物水化劑膠體，生物纖維片，膠原蛋白膜，有機尼龍網(wǎng)，或膠原蛋白與有機尼龍網(wǎng)的貼合物。對鋪墊物先進行浸泡性培養(yǎng)，然后再將皮膚KC接種其上，加入的培養(yǎng)液不超過鋪墊水平，細(xì)胞通過鋪墊吸收營養(yǎng)。KC在接種一定時間后，將鋪墊物升到氣-液面繼續(xù)培養(yǎng)，在這種環(huán)境下，鋪墊物始終暴露于類似細(xì)胞外液環(huán)境下，而表層KC暴露于氣-液界面之間，此環(huán)境有助于KC完成終末分化并形成多層細(xì)胞，從上層細(xì)胞到底層細(xì)胞含有分布不等的角蛋白[9，10]。氣-液界面培養(yǎng)法培養(yǎng)KC可生長出多層類似正常皮膚的表皮細(xì)胞層次。檢測某些生化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，其與正常皮膚非常相近，如脂類物質(zhì)的合成，具有對水的屏障功能[11]。

隨著真皮組織替代物培養(yǎng)材料的不斷革新，近年來人們開始采用各類納米級高分子蛋白質(zhì)支架和降解材料來包被和模擬真皮組織成分，并且可以添加各種促進KC增殖和分化的成分到納米支架內(nèi)，調(diào)控KC生長使其處于不同細(xì)胞周期和代謝狀態(tài)[12]。此外，人們也選用可降解性材料作為真皮組織替代物進行KC的3D培養(yǎng)之前的包被，這些可降解生物材料可在有限的空間內(nèi)最大程度地培養(yǎng)KC并有助收集細(xì)胞過程中的純化和提取，且不影響細(xì)胞的活力和增殖特性[13]。

當(dāng)前，KC的3D培養(yǎng)變得更加便捷，一些商業(yè)化3D培養(yǎng)產(chǎn)品在生產(chǎn)和制備過程中已包被成各種基質(zhì)蛋白，及其他一些常用的細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)，包括Ⅰ型膠原、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白、纖維粘連蛋白、多聚賴氨酸、Matrigel等[14]，并已實現(xiàn)了在3D培養(yǎng)產(chǎn)品內(nèi)對KC的培養(yǎng)和皮膚表皮層的構(gòu)建[15]。因此法便捷、安全，可靠，實驗數(shù)據(jù)能更貼近體內(nèi)環(huán)境，當(dāng)前已成為3D培養(yǎng)KC的首選。

3 皮膚角朊細(xì)胞3D培養(yǎng)常用模式介紹

3D細(xì)胞培養(yǎng)是將細(xì)胞種植在細(xì)胞外基質(zhì)或細(xì)胞外基質(zhì)替代物所構(gòu)建的立體培養(yǎng)體系內(nèi)，培養(yǎng)體系內(nèi)網(wǎng)眼狀細(xì)胞外基質(zhì)成分為細(xì)胞生長構(gòu)建出三維結(jié)構(gòu)支架，使細(xì)胞能在該立體空間結(jié)構(gòu)內(nèi)增殖、遷移、分化[16，17]，即采用立體結(jié)構(gòu)來模擬細(xì)胞生長的體內(nèi)環(huán)境。皮膚組織KC的3D培養(yǎng)突出的優(yōu)勢在于細(xì)胞外基質(zhì)或細(xì)胞外基質(zhì)替代物本身為KC的貼壁提供了理想環(huán)境。無論是來自原代細(xì)胞還是細(xì)胞系，KC在體外環(huán)境貼壁性差，細(xì)胞活力低，增殖緩慢，傳統(tǒng)二維培養(yǎng)方法需要采用各種手段先促進KC貼壁才能進一步生長，例如在二維細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基內(nèi)添加各種生物成分，或采用射線照射滅活的3T3成纖維細(xì)胞為飼養(yǎng)層，以及鼠尾膠涂層技術(shù)，為KC提供貼壁環(huán)境[1,18]。而在3D細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)，其存在的細(xì)胞外基質(zhì)本身就是KC貼壁和生長的物質(zhì)基礎(chǔ)，KC能夠在更接近體內(nèi)真皮組織環(huán)境下快速貼壁。該技術(shù)是一種在形態(tài)上仿生人體皮膚結(jié)構(gòu)，并在立體層面構(gòu)建和培養(yǎng)擁有數(shù)層表皮KC的培養(yǎng)方法。

當(dāng)前，3D培養(yǎng)體系種類繁多。按培養(yǎng)體系的外觀結(jié)構(gòu)可以分為培養(yǎng)板和細(xì)胞小室兩類(圖1)。培養(yǎng)板上培養(yǎng)的細(xì)胞通常在細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建的支架上方生長，細(xì)胞只接受來自培養(yǎng)體系上部的營養(yǎng)，適于短期培養(yǎng)細(xì)胞；細(xì)胞小室是目前最常用的3D培養(yǎng)體系，是在培養(yǎng)板基礎(chǔ)上加裝了小室(chamber)以方便懸掛培養(yǎng)，支架內(nèi)的細(xì)胞可在兩個方向接受營養(yǎng)，方便更換下部的培養(yǎng)板從而使實驗用途增大，可用于細(xì)胞在氣-液交界面上進行培養(yǎng)和共培養(yǎng)研究，適于長期細(xì)胞培養(yǎng)和研究。作為廣泛應(yīng)用的3D培養(yǎng)體系，細(xì)胞小室按體系內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)支架與培養(yǎng)基之間的毗鄰關(guān)系分為氣-液交界3D培養(yǎng)，常規(guī)3D培養(yǎng)和兩種培養(yǎng)基3D培養(yǎng)三種方式(圖2)。對于氣-液交界3D培養(yǎng)，細(xì)胞外基質(zhì)支架的底部與培養(yǎng)基接觸，基質(zhì)借助虹吸作用吸收培養(yǎng)基，營養(yǎng)其內(nèi)細(xì)胞并使細(xì)胞在氣-液之間生長。該培養(yǎng)方式主要用于各種上皮細(xì)胞(包括皮膚KC)的培養(yǎng)，由于處于氣-液之間，KC在增殖、移行和分化過程中上部KC可出現(xiàn)角化現(xiàn)象，并構(gòu)成了表皮組織的外表面，進一步模擬和構(gòu)建出其下KC生長的體內(nèi)環(huán)境；對于常規(guī)3D培養(yǎng)，培養(yǎng)板和小室內(nèi)培養(yǎng)基相通，基質(zhì)支架和其內(nèi)生長的細(xì)胞浸沒于培養(yǎng)基內(nèi)。對于KC培養(yǎng)而言，該方法適用于長期大規(guī)模培養(yǎng)以快速擴增細(xì)胞數(shù)量，而傳統(tǒng)二維細(xì)胞培養(yǎng)所從事的實驗研究，該方法也可實現(xiàn)且兩者之間沒有差異；對于兩種培養(yǎng)基3D培養(yǎng)，培養(yǎng)板和小室內(nèi)的培養(yǎng)基不相通，基質(zhì)支架內(nèi)生長的細(xì)胞可以浸沒于兩種不同的培養(yǎng)基，該方式適于檢測不同條件下藥物分子或細(xì)胞因子通透分析和評定。

3D培養(yǎng)模式的多樣化為不同層面研究提供了條件。近年來，人們借助3D細(xì)胞培養(yǎng)模型，結(jié)合不同的3D培養(yǎng)方式以及所培養(yǎng)細(xì)胞的種類，開發(fā)出細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)并將單純的3D細(xì)胞培養(yǎng)功能進一步擴展，實現(xiàn)了對細(xì)胞不同生物學(xué)過程和功能的分析和檢測。以KC為例，研究者可在細(xì)胞外基質(zhì)支架內(nèi)的不同層面培養(yǎng)不同類型的細(xì)胞，模擬多種細(xì)胞構(gòu)建和優(yōu)化表皮和皮膚符合組織結(jié)構(gòu)的可行性(圖3A和B)，檢測不同培養(yǎng)基、藥物分子，細(xì)胞因子和分泌化學(xué)因子對KC的作用，和對細(xì)胞信號通路的影響和干擾情況，以及蛋白質(zhì)組學(xué)研究，檢測不同類型的細(xì)胞對KC的影響和表型轉(zhuǎn)化情況(圖3C和D)，研究KC在不同細(xì)胞間穿透和遷移能力，以及在“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”中的單一生物學(xué)效果或作用(圖3E和F)。

圖1 3D培養(yǎng)板和細(xì)胞小室的剖面圖。培養(yǎng)板僅接受來自培養(yǎng)體系上部營養(yǎng)(箭頭)；細(xì)胞小室因懸掛培養(yǎng)可以在2個方向接受營養(yǎng)(箭頭) 圖2 細(xì)胞小室的不同培養(yǎng)方式剖面圖。藍(lán)色顯示小室內(nèi)與培養(yǎng)板內(nèi)不同類型的培養(yǎng)基 圖3 3D細(xì)胞共培養(yǎng)的模式和類別。共培養(yǎng)模式的多樣化使人們研究不同生物學(xué)過程和功能成為可能。粉色示培養(yǎng)基，紅色和藍(lán)色分別示不同類型的細(xì)胞

4 皮膚角朊細(xì)胞在3D培養(yǎng)中具備的優(yōu)勢

3D細(xì)胞培養(yǎng)是以細(xì)胞外基質(zhì)蛋白為生長支架，使細(xì)胞在保證活力和增殖能力的基礎(chǔ)上，迅速貼壁生長并能夠分化產(chǎn)生一定的三維組織特異性結(jié)構(gòu)[19，20]。該細(xì)胞外基質(zhì)支架所創(chuàng)建或營造的細(xì)胞生長環(huán)境，因可以最大程度地模擬體內(nèi)環(huán)境保證了KC體內(nèi)生長時所具備的形態(tài)和表型特征，相關(guān)實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果更能真實反應(yīng)出KC在體內(nèi)環(huán)境下某一生物學(xué)過程中的生物學(xué)效果或作用。

皮膚KC的3D培養(yǎng)有助于了解在正常和病理條件下組織修復(fù)時“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”過程中的單一生物學(xué)過程。早期的“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”在傷口愈合(特別是真皮收縮過程)中更是起到至關(guān)重要的作用。表皮層的KC及其前體細(xì)胞在創(chuàng)傷后因處于應(yīng)激狀態(tài)，在較短時間內(nèi)發(fā)生表皮-真皮之間的改變，KC向棘細(xì)胞層和真皮層移行并發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的KC在功能上具備真皮內(nèi)成纖維細(xì)胞的特點，形成“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”并分泌產(chǎn)生表皮層內(nèi)的膠原，該過程不僅介導(dǎo)了表皮祖細(xì)胞的增殖和分化，也激活了其后的組織重塑。借助3D細(xì)胞培養(yǎng)，可有效排除復(fù)雜體內(nèi)環(huán)境因素的干擾，借助不同類別的3D細(xì)胞共培養(yǎng)模式(圖3)，可直接演示“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”單一過程中的表型和分子學(xué)改變情況，以及單一條件或因素對該過程的影響，也有助于闡明正常和病理條件下KC的結(jié)構(gòu)和功能之間的改變情況和相互關(guān)系。

皮膚KC的3D培養(yǎng)有助于在體外環(huán)境下了解KC之間，KC與細(xì)胞外基質(zhì)和生長因子，KC表面受體和配體之間的關(guān)系。KC的3D培養(yǎng)不但促進了細(xì)胞本身的貼壁性，其模擬的體內(nèi)細(xì)胞生長環(huán)境保證了細(xì)胞與培養(yǎng)環(huán)境之間的相互作用，因此，該培養(yǎng)體系有助于在體外環(huán)境下研究以KC為中心的相關(guān)細(xì)胞學(xué)過程、大分子蛋白與KC之間的相互作用。此外，對靶分子和下游蛋白功能的描述，可在體外環(huán)境下先進行基因或蛋白質(zhì)修飾(借助分子雜交、小RNA干擾技術(shù)或轉(zhuǎn)基因手段)，進而進入3D培養(yǎng)體系內(nèi)，在不同培養(yǎng)階段清晰觀測細(xì)胞形態(tài)和功能改變情況，確認(rèn)生物學(xué)功能的變化，彌補在轉(zhuǎn)基因動物研究中無法實現(xiàn)的形態(tài)觀測研究。以皮膚KC的3D培養(yǎng)為例，上述對單一生物學(xué)過程中分子功能的研究，不但有助于探索不同修復(fù)過程的分子學(xué)變化，尋找創(chuàng)傷修復(fù)的分子學(xué)開關(guān)，也可進一步上溯到表皮祖細(xì)胞的研究，有助于確認(rèn)表皮祖細(xì)胞不同亞型，不同發(fā)育階段分子標(biāo)志物的形成情況，也可有助于探索表皮祖細(xì)胞向短暫擴增細(xì)胞、KC和終末角化細(xì)胞分化的分子學(xué)依據(jù)，以及用于組織工程學(xué)模擬理想皮膚結(jié)構(gòu)的相關(guān)研究。

5 皮膚角朊細(xì)胞在3D培養(yǎng)用于治療的微創(chuàng)前景和價值

如前所述，皮膚KC的3D培養(yǎng)，提供了一種有效培養(yǎng)KC的技術(shù)，并使其在生長傳代的同時能保持自然形態(tài)和功能，以及良好的體內(nèi)生物學(xué)性狀特征，這為皮膚嚴(yán)重?fù)p傷，包括大范圍撕脫傷、皮膚嚴(yán)重?zé)齻吞悄虿∑つw組織的缺損，提供了可在短期內(nèi)迅速擴增、具有較高質(zhì)量的表皮細(xì)胞來源，而充足的KC和更加貼近表皮底層環(huán)境的KC是保證創(chuàng)傷修復(fù)過程中快速“再上皮化”的關(guān)鍵因素。

此外，過去人們多采用動物皮膚組織來模擬和制備人工皮膚。由于表皮層內(nèi)無血管，其代謝主要依賴來自真皮的細(xì)胞外基質(zhì)，但是在其移植和生長過程中，宿主血管需要為快速增值和移行的KC提供大量的營養(yǎng)，尤其是處于“表皮舌”部位的KC，通常會與宿主真皮血管直接接觸，這加劇了移植物排斥反應(yīng)。采用皮膚KC的3D培養(yǎng)，能根據(jù)受損表皮和真皮的厚度，調(diào)控3D培養(yǎng)下的KC的厚度，是移植皮膚更貼近正常皮膚的形態(tài)特征；此外，可采用人體或患病個體的KC進行3D培養(yǎng)，這在一定程度上較少了修復(fù)過程中的免疫排斥，使修復(fù)過程更加迅速，修復(fù)后的組織外觀更加美觀。同時，該方法也有助于規(guī)避動物皮膚治療燒傷、燙傷過程中的倫理學(xué)問題。

不僅如此，利用3D細(xì)胞培養(yǎng)模式的可調(diào)控性，人們在進行皮膚KC的3D培養(yǎng)過程中可適時在培養(yǎng)體系內(nèi)添加細(xì)胞因子、分子藥物等，也可以通過與納米支架的聯(lián)合應(yīng)用來改變培養(yǎng)基的成分、質(zhì)地和組織結(jié)構(gòu)，從而最大程度地優(yōu)化皮膚組織修復(fù)中的“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”過程，使修復(fù)或再生的皮膚組織具有輕微的瘢痕組織結(jié)構(gòu)和良好的彈性、韌度，最大程度地實現(xiàn)“無瘢痕修復(fù)”治療的目的。

6 展望

3D細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)作為二維細(xì)胞培養(yǎng)與動物實驗之間的橋梁，具有細(xì)胞培養(yǎng)的形態(tài)學(xué)直觀性及培養(yǎng)條件可控性的優(yōu)勢，該培養(yǎng)技術(shù)正越來越得到廣泛接受和使用。對于皮膚KC的3D培養(yǎng)技術(shù)，其無論是在研究表皮發(fā)育、模擬和優(yōu)化人工皮膚，還是在皮膚移植領(lǐng)域，均可呈現(xiàn)傳統(tǒng)二維細(xì)胞培養(yǎng)所不具備的優(yōu)勢。筆者認(rèn)為，該技術(shù)用于細(xì)胞培養(yǎng)僅僅是其部分功能，與其他綜合技術(shù)的廣泛結(jié)合和相互滲透(包括再生醫(yī)學(xué)、干細(xì)胞技術(shù)和材料科學(xué))并有效促進3D培養(yǎng)體系最大程度接近和模擬人體組織和生化環(huán)境，才能進一步拓寬該技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用，而該技術(shù)的不斷優(yōu)化和成熟，并最終與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的有效結(jié)合將更好地造福于病患。

1 Liu XL,Lee PY,Ho CM,et al. Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing.Chem Med Chem,2010,5(3):468-475.

2 劉雪來,黃格元.納米生物材料在創(chuàng)傷修復(fù)中的研究與應(yīng)用.中華外科雜志,2013,51(8)：748-752.

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4 胡康洪,姚 穎.三維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的研究與應(yīng)用.醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志,2008,5(2):185-188.

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(修回日期：2014-10-30)

(責(zé)任編輯：王惠群)

哈爾濱市科技創(chuàng)新人才研究專項(青年后備人才)基金項目(2014RFQGJ158)

R329.2+8

A

1009-6604(2015)02-0185-05

10.3969/j.issn.1009-6604.2015.02.028

2014-07-23)

**通訊作者，E-mail：kkywong@hku.hk