周 鑫，李康智，秦群生

(1. 廣西桂林市精神衛(wèi)生中心/桂林市社會(huì)福利醫(yī)院，廣西 桂林 541001；2. 桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林 541004)

兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶基因Val158Met多態(tài)性與阿立哌唑治療精神分裂癥患者療效的相關(guān)性研究

周 鑫1，李康智2，秦群生1

(1. 廣西桂林市精神衛(wèi)生中心/桂林市社會(huì)福利醫(yī)院，廣西 桂林 541001；2. 桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林 541004)

目的 探討兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)基因Val158Met多態(tài)性與阿立哌唑治療精神分裂癥患者療效的相關(guān)性。方法 選取接受阿立哌唑治療的精神分裂癥患者80例作為治療組，選取同期愿意充當(dāng)精神疾病志愿者的健康人70例作為對(duì)照組。應(yīng)用即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)分析(PCR-RFLP)與即陽性、陰性癥狀評(píng)定表(PANSS)進(jìn)行基因分型與精神癥狀評(píng)定，同時(shí)觀察應(yīng)用阿立哌唑治療的臨床效果。結(jié)果 2組的基因型及等位基因頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。經(jīng)阿立哌唑治療后，患者PANSS評(píng)分明顯降低(P<0.05)。3種基因型應(yīng)用阿立哌唑治療后療效比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。結(jié)論 COMT基因Val158Met多態(tài)性并不關(guān)聯(lián)于臨床癥狀的改善，阿立哌唑治療精神分裂，能夠有效改善患者精神狀況及部分認(rèn)知狀況。

精神分裂癥；兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶基因Val158Met多態(tài)性；阿立哌唑

兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)是導(dǎo)致精神分裂癥的候選基因之一，這類型基因處于22q11.2，即22號(hào)染色體，其長(zhǎng)臂11區(qū)2亞帶上[1]。COMT基因的cDNA已經(jīng)可被全長(zhǎng)克隆，克隆大小在6 210 bp左右[2]。對(duì)患者認(rèn)知功能研究發(fā)現(xiàn)，精神分裂癥患者在工作記憶、注意力、智商、信息加工等方面會(huì)受到COMT基因多態(tài)性影響，且在Met基因型認(rèn)知功能上遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于另2種類型[3]。據(jù)調(diào)查，全世界約有1%的人口受到精神分裂癥的影響，由此可見，該病是全球主要的公共衛(wèi)生疾病。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，COMT基因會(huì)引發(fā)精神分裂癥，同時(shí)影響患者的認(rèn)知功能與治療效果[4]。本研究分析了80例精神分裂癥患者COMT基因Val158Met多態(tài)性，阿立哌唑治療精神分裂癥的療效，報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2012年5月—2014年6月在桂林市精神衛(wèi)生中心接受治療的精神分裂癥患者80例作為治療組，均符合美國(guó)精神障礙與行為問題診斷標(biāo)準(zhǔn)第4版(DSM-Ⅳ)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，患者未患有嚴(yán)重內(nèi)臟器官疾病，無較強(qiáng)烈的自殺企圖，無嚴(yán)重藥物依賴現(xiàn)象，未濫用過精神活性物質(zhì)，在入組前14 d未服用過抗抑郁、抗癲癇、抗精神病等藥物，患者均簽署知情同意書。80例患者中，男49例，女31例；年齡17～60(38.4±2.7)歲；病程(16.3±4.1)年(4個(gè)月～29年)。選取同期自愿作為精神疾病志愿者的健康人70例為對(duì)照組，男44例，女26例；年齡16～60(38.2±2.9)歲。2組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，具有可比性。

1.3檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1采集血液，提取DNA基因組 取外周靜脈血5 mL置于0.5 mL的EDTA試管中，即刻放入-80 ℃低溫冰箱中保存。7 d后按照如下步驟對(duì)白細(xì)胞中的DNA進(jìn)行提?。孩偃?00 μL的靜脈全血，在其中混入TBP裂解液，將二者搖勻后放置3 min，而后應(yīng)用高速冷凍離心機(jī)行離心處理1 min，而后棄掉上清。②上述步驟需重復(fù)3次左右，一直到形成沉淀，且顏色為淡紅色或者無色即可停止。③在離心管中加入20 μL的RNase/蛋白酶K液，而后即刻振蕩搖晃，待其均勻后放入溫度55 ℃左右的水槽中行衡溫浴處理，時(shí)間45 min左右，在溫浴期間數(shù)次對(duì)離心管行來回顛倒處理。④加入3 mol/L NaAc 10 μL，至pH值為4.8，而后再加入結(jié)合緩沖液1 250 μL，行振蕩搖晃處理，待其均勻后行3 min的轉(zhuǎn)動(dòng)處理，而后在離心吸附柱中應(yīng)用TIP加入上清液，放置1 min后行3 min離心轉(zhuǎn)動(dòng)處理。⑤將廢液倒掉，加入漂洗緩沖液約600 μL，離心30 s，將此步驟重復(fù)2次后，最后一次將廢液倒掉，再行3 min的離心處理，這樣能夠保證漂洗緩沖液被充分去除。⑥在容量為1.5 mL的EP管中套上已經(jīng)被取出的離心柱，將洗脫緩沖液50 μL加入其中，放置1 min后行1 min的離心處理，而后所提取到的DNA就會(huì)出現(xiàn)在EP管中。

1.3.2COMT基因型分析 ①主要應(yīng)用PCR-RFLP法，P1為正向引物，序列號(hào)為5’-TCGTGGACGCCGTGATTCAGG-3’；P2為反向引物，序列號(hào)為5’-AGGTCTGACAACGGGT CAGGC-3’。PCR具體反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性8 min，94 ℃變性1 min，57 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，上述步驟循環(huán)35次后。在72 ℃條件下逐漸延伸8 min，而后保存于4 ℃條件下。②對(duì)PCR產(chǎn)物行純化處理。將DB緩沖液150 μL放入PCR反應(yīng)液中，振蕩搖勻。而后在Collection上將Spin Column放置好，行1 min離心處理，將濾液棄掉。再在Spin Column中先后放入Rinse A和Rinse B，離心處理30 s后將濾液棄掉；在容量為1.5 mL的新型EP管中放好Spin Column，在中央位置混入Elution Buffer液30 μL，放置1 min。而后再行1 min的離心處理，以對(duì)DNA行洗脫處理。③對(duì)產(chǎn)物行酶切處理。將20 μL的酶切體系、7 μL的ddH2O、2 μL的10×buffer、10 μL的PCR產(chǎn)物以及1 μL的NlaⅢ酶放入容量為0.5 mL的EP管中，振蕩搖晃處理后放入溫度37 ℃的水浴中，時(shí)間控制在2.5 h。而后再應(yīng)用濃度為3%的瓊脂糖凝膠行20 min的電泳處理，基因分型如下：V/V基因型為136 bp、81 bp；M/M基因型為96 bp、81 bp以及40 bp；V/M基因型為136 bp、96 bp、81 bp以及40 bp。由于40 bp擁有較小的條帶且已經(jīng)擴(kuò)散開，故而成像較模糊。

1.3.3精神癥狀評(píng)定 主要應(yīng)用PANSS與臨床療效總評(píng)量表(CGI)進(jìn)行精神癥狀評(píng)定。①PANSS量表：主要包括一般精神病理、陽性以及陰性量表。每個(gè)癥狀按照0～7分評(píng)分，7分為最嚴(yán)重，0分為最輕。②CGI量表：主要包括療效指數(shù)(EI)、病情嚴(yán)重程度(SI)以及療效總評(píng)(GI)3項(xiàng)。SI用于評(píng)定病情程度，0分代表沒有病，7分代表極其嚴(yán)重；GI用于評(píng)定患者治療前后的情況，0分代表未評(píng)，7分代表病變嚴(yán)重；EI是結(jié)合患者治療效果以及不良反應(yīng)進(jìn)行評(píng)定，EI=療效分/不良反應(yīng)分，療效主要有4個(gè)級(jí)別，1分代表惡化或者未出現(xiàn)變化，4分代表療效顯著；不良反應(yīng)也有4個(gè)級(jí)別，1分代表未出現(xiàn)不良反應(yīng)，4代表不良反應(yīng)已經(jīng)對(duì)患者安危有所威脅。

2 結(jié) 果

2.12組COMT基因Val158Met多態(tài)性分布情況 2組基因型及等位基因頻率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1 2組COMT基因Val158Met多態(tài)性分布情況

2.2治療組治療前后PANSS與CGI評(píng)分比較 治療后各評(píng)分均明顯降低(P均<0.05)。見表2。

2.3COMT基因多態(tài)性與阿立哌唑治療前后PANSS之間的相關(guān)性 3種基因型患者經(jīng)阿立哌唑治療后療效比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

3 討 論

精神分裂癥主要是指?jìng)€(gè)性、情感、行為以及思維上的分裂，發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，可能與內(nèi)分泌、遺傳或者環(huán)境有關(guān)[5]。諸多研究認(rèn)為，家庭中若有近親出現(xiàn)精神分裂者，則與患者血緣愈加濃厚，患上精神分裂癥的概率也越高，由此可見，遺傳是主要原因[6]。COMT基因?qū)儆诙喟桶返闹饕到饷竅7]，其具有多態(tài)性，且不同基因型有不同活性，主要有3型，V/V型為高活性，V/M型為中等活性，M/M型為低活性。該基因中的堿基G會(huì)被A替換，而后使得COMT結(jié)構(gòu)出現(xiàn)變化，使得纈氨酸逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍彼幔@一突變致使COMT酶活性大幅度降低，致使位于大腦前額的多巴胺(DA)出現(xiàn)代謝紊亂現(xiàn)象，從而致使精神分裂癥的發(fā)病率增加[8]。此外，COMT基因Val158Met多態(tài)性與精神分裂癥患病率上升存在某種關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果顯示，治療組的M/M基因型頻率要比對(duì)照組高，表明M等位基因可能是精神分裂癥的易感因素。同時(shí)，Val158Met多態(tài)性在極大程度上決定著COMT活性，其多態(tài)性也關(guān)聯(lián)于COMT酶活性，V/V與M/M基因型患者會(huì)致使DA水平缺乏平衡性，導(dǎo)致大腦前額葉、扣帶回以及海馬等位置的DA信號(hào)出現(xiàn)異常，從而增加精神分裂癥的風(fēng)險(xiǎn)[9-11]。筆者認(rèn)為V/M基因型精神分裂癥的發(fā)病概率低。

表2 治療組治療前后PANSS與CGI評(píng)分比較，分)

表3 COMT基因多態(tài)性與阿立哌唑治療后PANSS與CGI評(píng)分相關(guān)性±s，分)

目前，阿立哌唑作為臨床主要抗精神病藥，與D2、D3、5-HT1A、5-HT2A受體具有高親和力，與D4、5-HT2 c、5-HT7、α1、H1受體及5-HT重吸收位點(diǎn)具有中度親和力。阿立哌唑是D2和5-HT1A受體的部分激動(dòng)劑，也是5-HT2A受體的拮抗劑，與其他具有抗精神分裂癥作用的藥物一樣，阿立哌唑的作用機(jī)制尚不清楚，但認(rèn)為是通過對(duì)D2和5-HT1A受體的部分激動(dòng)作用及對(duì)5-HT2A受體的拮抗作用介導(dǎo)產(chǎn)生的，與其他受體的作用可能產(chǎn)生了阿立哌唑臨床上某些其他的作用，如對(duì)α1受體的拮抗作用可以闡釋其體位性低血壓的現(xiàn)象，能夠穩(wěn)定多巴胺系統(tǒng)，同時(shí)對(duì)5-HT2A受體起阻斷作用[12-14]，亦有部分激動(dòng)功能，故而可有效治療精神分裂癥患者的情感以及精神障礙。且臨床研究后證實(shí)，該藥對(duì)陰性癥狀改善情況比陽性癥狀好，尤其體現(xiàn)在認(rèn)知功能方面[15-16]。而M/M基因型患者本來就比其他2種基因型患者有更好的認(rèn)知能力，故而阿立哌唑?qū)/M基因型精神分裂患者認(rèn)知功能改善效果最優(yōu)[17]。

本研究結(jié)果顯示，阿立哌唑治療后精神分裂癥患者PANSS評(píng)分明顯降低，且不同基因型患者的各項(xiàng)評(píng)分均明顯下降，各型間評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，COMT基因Val158Met具有多態(tài)性，且M等位基因以及M/M基因型在很大程度上屬于精神分裂癥的易感因素，然而該多態(tài)性并不關(guān)聯(lián)于臨床癥狀的改善。阿立哌唑治療精神分裂能夠有效改善患者精神狀況，亦可改善部分患者的認(rèn)知狀況。

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Study on the correlation between COMT gene Val158Met polymorphism and clinical efficacy of aripiprazole in the treatment of schizophrenic patients

ZHOU Xin1, LI Kangzhi2, QIN Qunsheng1

(1.The Mental Health Cente of Guilin/Guilin City Social Welfare Hospital, Guilin 541001, Guangxi, China; 2.Guilin Medical University, Guilin 541004, Guangxi, China)

Objective It is to approach the correlation of COMT gene Val158Met polymorphism and clinical effect of aripiprazole in treatment of schizophrenic patients. Methods 80 cases of schizophrenia patients received aripiprazole were selected as treatment group, 70 cases of healthy people who willing to volunteer spirit disease were selected as control group. The clinical data were retrospectively analyzed, as the treatment group. The genotyping were detected by Polymerase Chain Reaction restriction fragment length polymorphism analysis (PCR-RFLP), the symptoms were evaluated by Positive and Negative Symptom Scale (PANSS). At the same time, the curative effects were observed. Results There was significant differences in the genotypes and allele frequency between both groups (allP<0.05). After treatment by aripiprazole, the PANSS scores were significantly reduced in treatment group (P<0.05), but there was no significant difference between the three genotypes after treatment by aripiprazole (allP>0.05). Conclusion COMT gene Val158Met polymorphism is not associated with the improvement of clinical symptom, aripiprazole in treatment of schizophrenia patients to mental health, can effectively improve the patient's mental health and part of cognitive status.

schizophrenia; COMT gene Val158Met polymorphism; aripiprazole

周鑫,男，主治醫(yī)師，研究方向?yàn)榫穹至寻Y及雙向情感障礙的診療。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.004

R749.3

A

1008-8849(2015)06-0580-04

2014-08-30