李 龍

西安交通大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院(西安710061)

異體新鮮、冷存乳鼠卵巢試樣與老齡大鼠卵巢不同應力松弛特性關(guān)系研究*

李 龍

西安交通大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院(西安710061)

目的:探討異體新鮮、冷存乳鼠卵巢試樣與老齡大鼠卵巢應力松弛特性差異。方法:使用電子萬能試驗機，以0.1%/s的應變增加速度，對老齡大鼠卵巢、3日齡乳鼠異體新鮮卵巢和冷存卵巢進行應力松弛實驗，比較異體新鮮、冷存乳鼠卵巢試樣與老齡大鼠卵巢應力松弛特性差異性。結(jié)果:三組卵巢試樣應力松弛曲線呈對數(shù)變化，可發(fā)現(xiàn)老齡大鼠卵巢組曲線與其他兩組曲線明顯不同，老齡組大鼠卵巢7200s應力下降幅度為0.009±0.0002顯著低于異體新鮮(0.020±0.001)、冷存乳鼠卵巢組(0.022±0.003)(P<0.05)；異體新鮮組的7200s應力下降幅度與冷存乳鼠卵巢組的差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論:老齡大鼠卵巢與異體新鮮、冷存乳鼠卵巢試樣具有不同的應力松弛特性，冷存乳鼠卵巢試樣具有和異體新鮮試樣相近的應力松弛特性。

卵巢是女性重要生殖器官之一，功能主要包括產(chǎn)卵及分娩類固醇激素，是女性生理代謝的重要組織。隨著卵巢癌、卵巢早衰、更年期綜合征等卵巢相關(guān)疾病發(fā)病率的不斷增高，卵巢健康越來越被臨床重視[1]。目前，臨床常選用外激素替代療法來救治卵巢相關(guān)疾病，但這些替代激素與機體自然分泌激素存在一定生理差異，患者易出現(xiàn)或加重子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥等疾病。因此，卵巢移植術(shù)成為恢復女性內(nèi)分泌功能的重要救治方式[2]。本次研究中，我們對15只12月齡SD大鼠，30只3日齡SD乳鼠進行了卵巢移植術(shù)，旨在分析異體新鮮、冷存乳鼠卵巢試樣與老齡大鼠卵巢應力松弛特性，并為臨床提供參考意見。

材料與方法

1 實驗動物和儀器 選取15只12月齡SD大鼠，30只3日齡SD乳鼠。所有動物均麻醉后取雙側(cè)卵巢，試樣分組包括老齡大鼠卵巢組，乳鼠異體新鮮卵巢組和乳鼠冷凍卵巢組，每組試樣15份。

2 實驗方法 計算試樣直徑及長度，并輸入計算機內(nèi)。預處理試樣，再將試樣置于含生理鹽水的有機玻璃缸內(nèi)，并置于電子萬能試驗機上，于室溫20℃環(huán)境下應變。異體新鮮卵巢組大鼠應變37.2%，乳鼠冷凍卵巢組應變達38.1%，各組應變力達0.055mPa時，恒定應變，將應力逐步降低。計算機從應變開始時采集數(shù)據(jù)，直至應變結(jié)束，共采集100個數(shù)據(jù)，歷時7200s，將結(jié)果打印導出。

3 觀察指標 觀察3組試樣應力松弛數(shù)據(jù)和曲線，以及應力與時間的變化規(guī)律。

結(jié) 果

1 應力松弛曲線 3組卵巢試樣應力松弛曲線，見圖1?？砂l(fā)現(xiàn)老齡大鼠卵巢組曲線與其他兩組曲線明顯不同，老齡大鼠卵巢組試樣7200s應力下降幅度，與異體新鮮組試樣和冷存組試樣比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而異體新鮮組試樣和冷存組試樣比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見附表。

圖1 3組試樣應力松弛曲線

組 別份數(shù)7200s應力下降量FP老齡大鼠組150.009±0.0002異體新鮮組150.020±0.001*17.835<0.05冷存組150.022±0.003*

注：*與老齡大鼠組比較，P<0.05

2 各組卵巢試樣歸一化應力松弛函數(shù)結(jié)果 見圖2。

圖2 各組試樣歸一化應力松弛函數(shù)曲線

女性卵巢位于子宮底后外側(cè)，臨盆腔側(cè)壁，呈圓形，主要結(jié)構(gòu)包括卵泡、結(jié)締組織、血管、神經(jīng)及淋巴管等。卵巢移植術(shù)是一種新型卵巢疾病救治手術(shù)，國外也有全卵巢移植成功案例，但我國研究較晚，至今尚無臨床實例[3]。卵巢與其他器官一樣，均有生物黏彈性材料組織，這種黏彈性是保證器官及組織功能的重要條件[4]。本次研究中我們對SD大鼠進行卵巢移植研究，并對大鼠自體卵巢異體新鮮與冷存卵巢應力松弛特性進行研究。

我們的研究發(fā)現(xiàn)3組卵巢試樣應力松弛曲線呈對數(shù)變化，老齡大鼠卵巢組曲線與其他兩組曲線明顯不同，老齡大鼠卵巢組試樣7200s應力下降幅度，與異體新鮮組試樣和冷存組試樣比較差異顯著，這可能與老齡大鼠卵巢功能衰退有關(guān)，功能衰退導致大鼠卵巢黏彈性損傷，應力下降迅速。而我們對比異體新鮮組試樣和冷存組試樣應力曲線發(fā)現(xiàn)，兩種大鼠應力松弛曲線近似，提示這兩組大鼠卵巢黏彈性近似。從時間變化上分析，我們可以從圖1、圖2中發(fā)現(xiàn)3組大鼠1000s前應力松弛曲線下降最快，這表明卵巢試樣固有膨脹壓低于局部壓力，組織內(nèi)水分子向外溢出速度較快，隨著組織內(nèi)水分子的大量溢出，膨脹壓與局部壓差逐步降低，故1000s后應力松弛曲線逐步穩(wěn)定，最終平衡[5]。應力松弛是黏彈性組織材料流變特性的重要檢測參數(shù)，是臨床常用的生物材料、組織器官應力及時間檢測標準，特指恒定應力下，應力隨時間變化而下降，并在一定時間后趨于平衡的這一狀態(tài)。應力松弛檢測需求較長時間，且實驗期間需保證外部環(huán)境穩(wěn)定，因此對實驗條件具有較高要求[6]。本次研究中，我們選用的電子萬能試驗機具有自動應力調(diào)節(jié)，應變增速以及恒定應力等功能，且試驗機自帶-35℃-200℃環(huán)境溫箱及溫控裝置，實驗人員可根據(jù)具體需求進行調(diào)控。此外，為保證試樣濕度，我們將試樣置于含生理鹽水的有機玻璃缸內(nèi)，并優(yōu)先對試樣進行預處理，將實驗誤差降到最低。有學者在大鼠新鮮卵巢和冷凍卵巢移植研究中發(fā)現(xiàn)，凍卵巢移植后卵巢功能恢復速度優(yōu)于新鮮卵巢，分析可能與免疫抵抗有關(guān)[7]。還有學者對家兔卵巢移植后組織學狀態(tài)進行分析發(fā)現(xiàn)，在位卵巢皮質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)不同發(fā)育程度的健康卵泡，且間質(zhì)細胞呈輕度腫脹；而自體皮下移植后存活的卵巢組織狀態(tài)與移植前近似，卵巢被厚實的結(jié)締組織報告，表面血管較為豐富，皮質(zhì)內(nèi)有不同發(fā)育程度的健康原始、初級卵泡，部分成功移植卵巢甚至可見成熟竇狀卵泡，異體移植存活卵巢組織表現(xiàn)與正常卵巢形態(tài)近似[8]。

綜上所述，老齡大鼠卵巢與異體新鮮、冷存乳鼠卵巢試樣具有不同的應力松弛特性，其中老齡大鼠卵巢應力松弛較差，異體新鮮、冷存乳鼠卵巢近似，但冷存乳鼠卵巢移植后免疫排斥更小。

[1] 王燕蓉,孫 靜,李 婧,等. 小鼠卵巢自體及異體移植前的尿促性素體外干預對卵泡存活的影響[J]. 器官移植, 2012,3(4):219-223.

[2] 郁麗麗,劉麗均,王俊風,等. 同品系小鼠卵巢移植方法的建立[J]. 中國比較醫(yī)學雜志, 2013,23(7):41-43.

[3] 劉 芳,黑常春,鄭小敏,等. 卵巢移植對去勢大鼠海馬神經(jīng)元數(shù)量和ER-β、NG表達的影響[J]. 神經(jīng)解剖學雜志, 2013,29(3):306-310.

[4] 徐大寶,許俊磊,韓雪瑩,等. 大鼠胚胎卵巢原位移植的生殖內(nèi)分泌功能研究[J]. 南方醫(yī)科大學學報, 2011,31(10):1757-1760.

[5] 程春霞,薛 敏,徐大寶. 大鼠胚胎卵巢原位移植后子代的健康安全性研究[J]. 中南大學學報(醫(yī)學版), 2011,36(12):1158-1162.

[6] 丁洪月,吳 瑤,李新穎. 老齡大鼠自體卵巢與異體新鮮及冷存卵巢應力松弛特性對比分析[J].中國老年學雜志, 2012,32(10):2117-2119.

[7] 孔 斌,劉 芳,張文華,等. 卵巢移植對去勢大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)及BDNF表達的影響[J]. 神經(jīng)解剖學雜志, 2012,28(3):273-277.

[8] 張 翹,張忠君,李新穎. 去卵巢骨質(zhì)疏松模型大鼠L4脊椎骨的應力松弛與蠕變中國組織[J].工程研究與臨床康復, 2011,15(26):4829-4832.

(收稿：2014-10-10)

Study on the relationship between Allogeneic fresh, cold storage neonatal rats ovary and aged rats ovarian specimens stress relaxation characteristics

Li Long

The First Affiliated Hospital of Xi'an Jiao Tong University Medical College(Xi’an710061)

Objective: Discussion allogeneic fresh, cold storage neonatal rats ovaries and ovarian specimen stress relaxation characteristic difference in aged rats.Methods: The use of electronic universal testing machine, with 0.1% / s strain rate of increase of the rats ovary aging, three-day-old suckling mice and allogeneic fresh cold storage ovarian ovarian stress relaxation experiments to compare allogeneic fresh, cold storage neonatal rat ovary samples the aged rats with stress relaxation properties of ovarian differentiation.Results: Three samples of ovarian stress relaxation curves logarithmic changes could be found in the aged rats with ovarian group curve and the curve significantly different from the other two groups, the group aged rats with ovarian decrease stress specimen 7200s, 7200s stress decrease the aging group of ovariectomized rats was 0.009 ± 0.0002 was significantly lower than that in the fresh allograft group (0.020 ± 0.001), cold storage neonatal rats ovary group (0.022 ± 0.003) (P<0.05); 7200s allogeneic fresh set of stress decrease neonatal rat ovary and cold storage group the difference was not statistically significant (P> 0.05).Conclusion: Aging rats ovary and allogeneic fresh, cold storage neonatal rats ovary samples with different stress relaxation, cold storage neonatal rats ovary and allogeneic fresh samples have similar stress relaxation properties of the sample.

Ovary @The stress relaxation characteristics Animals,laboratory Rat

*陜西省科技攻關(guān)項目(K13-01-13)

卵巢 @不同應力松弛特性 動物，實驗 大鼠

R-33

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.04.002