周靈芝，康婷，高順利(南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院，湖南衡陽(yáng)421001)

羅格列酮對(duì)膿毒癥大鼠凝血功能的影響

周靈芝，康婷，高順利
(南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院，湖南衡陽(yáng)421001)

摘要:目的觀察膿毒癥大鼠應(yīng)用羅格列酮后凝血功能指標(biāo)的變化，為膿毒癥的藥物治療提供新的思路。方法將48只SD大鼠隨機(jī)分為A、B、C組各16只，A、B組行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)建立膿毒癥大鼠模型，C組開腹僅暴露盲腸、不行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)。術(shù)后B組大鼠尾靜脈注射羅格列酮，其余兩組注射等量生理鹽水，觀察各組術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)的凝血功能指標(biāo)變化。結(jié)果術(shù)后24、48 h，A、B組PT、APTT、TT均較C組延長(zhǎng)，A組較B組延長(zhǎng)更明顯(P均＜0.05) ; A、B組FIB、凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)較C組降低，以A組降低最為顯著(P均＜0.05) ; A、B組纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)較C組明顯升高，A組升高最為顯著(P均＜0.05)。結(jié)論羅格列酮能夠改善膿毒癥大鼠凝血功能障礙。

關(guān)鍵詞:膿毒癥;羅格列酮;凝血功能;大鼠

膿毒癥患者因炎癥介質(zhì)的“瀑布樣”釋放導(dǎo)致其凝血系統(tǒng)被激活，纖溶系統(tǒng)被不同程度抑制，血液出現(xiàn)高凝狀態(tài)，導(dǎo)致微循環(huán)障礙［1，2］。研究發(fā)現(xiàn)，羅格列酮可通過抑制炎癥介質(zhì)的表達(dá)而減輕炎癥反應(yīng)，在膿毒癥及缺血再灌注損傷發(fā)生過程中發(fā)揮抗炎作用［3，4］。2013年7月～2014年8月，本研究采用盲腸結(jié)扎穿孔法制造大鼠膿毒癥模型，觀察羅格列酮對(duì)膿毒癥大鼠凝血功能的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物分組及模型建立SD大鼠48只(南華大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供)，雌雄不拘，體質(zhì)量250～300 g，均自由攝食、飲水;將其隨機(jī)分為A、B、C組各16只。A、B組行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)，建立膿毒癥大鼠模型; C組開腹，僅暴露盲腸，不行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)。術(shù)后B組大鼠于造模后0、12 h兩次尾靜脈注射羅格列酮(美國(guó)Cayman公司) 0.3 mg/kg。A、C組均注射等量生理鹽水。

1.2凝血功能檢測(cè)各組分別計(jì)劃于造模后即刻(術(shù)后0 h)及羅格列酮或生理鹽水注射后(術(shù)后) 12、24、48 h各取大鼠4只，取其頸動(dòng)脈血，采用STA-R多功能凝血分析儀(法國(guó)思達(dá)高公司)檢測(cè)凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)、凝血酶時(shí)間(TT)、血漿纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)及抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用珋x±s表示，組間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1膿毒癥大鼠造模情況參照Remick［5］關(guān)于盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)的手術(shù)方式及診斷標(biāo)準(zhǔn)，A、B組各16只大鼠術(shù)后12 h均出現(xiàn)攝食減少、發(fā)熱癥狀，肛溫平均增加1.5℃，呼吸頻率較術(shù)前增加1倍，心率較術(shù)前增加50%，白細(xì)胞升高1倍以上，膿毒癥大鼠模型均制作成功。C組術(shù)后12 h攝食基本正常，體溫、心率、呼吸變化不明顯，白細(xì)胞稍有上升，但較術(shù)前增加不到1倍。

2.2各組術(shù)后凝血指標(biāo)比較術(shù)后0、12 h三組大鼠凝血功能指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。術(shù)后24、48 h，A、B組PT、APTT、TT均較C組延長(zhǎng)，A組較B組延長(zhǎng)更明顯(P均＜0.05) ; A、B 組FIB水平較C組降低(P均＜0.05)，其中以B組降低明顯(P＜0.05) ; A、B組PAI-1水平較C組升高(P均＜0.05)，其中A組升高明顯(P＜0.05) ; A、B組AT-Ⅲ較C組降低(P＜0.05)，以A組降低明顯(P＜0.05)。見表1。

表1　三組大鼠術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)凝血功能指標(biāo)比較(±s)

注:與C組同時(shí)間點(diǎn)比較，*P＜0.05;與A組同時(shí)間點(diǎn)比較，△P＜0.05。

組別　n　PT(s)　APTT(s)　TT(s)　FIB(g/L)　PAI-1(ng/mL)　AT-Ⅲ(%) A 組術(shù)后0 h　4　8.12±1.13　30.21±1.29　20.12±2.31　5.13±0.71　30.23±2.39　110.71±5.51術(shù)后12 h　4　8.17±1.57　32.23±1.97　22.14±2.57　4.74±0.57　32.23±1.97　106.49±6.91術(shù)后24 h　4　15.25±2.31*　41.25±4.11*　33.25±4.11*　2.59±0.71*　57.22±4.19*　82.32±5.24*術(shù)后48 h　4　14.54±1.69*　43.63±3.27*　35.64±5.67*　2.24±0.74*　63.71±6.57*　80.70±5.37*B組術(shù)后0 h　4　8.63±1.21　31.37±1.47　21.63±2.41　5.61±0.49　31.27±2.46　112.27±5.46術(shù)后12 h　4　8.42±1.29　31.32±1.68　21.32±1.89　5.31±0.59　33.45±2.58　108.38±6.65術(shù)后24 h　4　12.29±2.04＊△　37.32±3.44＊△　28.31±3.04＊△　3.31±0.54＊△　51.32±5.61＊△　91.73±5.59＊△術(shù)后48 h　4　11.38±1.78＊△　38.73±3.56＊△　32.73±4.76＊△　3.76±0.66＊△　59.85±5.64＊△　103.85±6.48＊△C組術(shù)后0 h　4　8.39±1.35　30.91±1.83　20.39±2.15　5.30±0.55　30.27±2.43　110.27±6.93術(shù)后12 h　4　9.07±1.25　30.09±2.09　20.07±2.19　5.17±0.43　29.69±2.59　113.19±5.29術(shù)后24 h　4　8.86±1.43　30.14±1.97　20.86±1.94　5.86±0.71　31.14±2.44　113.41±5.74術(shù)后48 h　4　8.39±1.22　31.09±2.12　19.39±2.32　5.13±0.56　30.29±2.52　114.79±7.50

3　討論

膿毒癥時(shí)患者機(jī)體炎癥介質(zhì)和抗炎介質(zhì)之間的平衡被打破，產(chǎn)生大量細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)且不斷循環(huán)促進(jìn)形成“瀑布樣”釋放，這些炎癥介質(zhì)可激活凝血系統(tǒng)導(dǎo)致凝血功能障礙［2，6］。羅格列酮屬于噻唑烷二酮類，它通過與過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)γ結(jié)合，使PPARγ/RXRα發(fā)生空間構(gòu)象改變，脫離輔抑制因子并結(jié)合輔激活因子，再通過與相應(yīng)靶基因啟動(dòng)子上的聚對(duì)苯二甲酰對(duì)苯二胺(PPAE)結(jié)合，激活靶基因轉(zhuǎn)錄，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)級(jí)聯(lián)信號(hào)途徑發(fā)揮其作用。PPARγ活化后可以通過調(diào)控NF-κB和AP-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在轉(zhuǎn)錄水平抑制TNF-α、IL-6的轉(zhuǎn)錄而發(fā)揮抗炎作用［7］。已有研究表明，羅格列酮及其類似物吡格列酮可減輕全身炎癥反應(yīng)癥狀、減少病變部位炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及炎癥因子的表達(dá)，從而在膿毒癥、支氣管哮喘、炎癥性腸病等急慢性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮抗炎作用［4，8～12］。

本研究中A、B組采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)成功構(gòu)建膿毒癥大鼠模型，術(shù)后B組大鼠尾靜脈注射羅格列酮，結(jié)果顯示術(shù)后12 h膿毒癥大鼠凝血功能尚無明顯異常，術(shù)后24、48 h，A、B組PT、APTT、TT均較C組延長(zhǎng)，但是A組較B組延長(zhǎng)更明顯; A、B組FIB、AT-Ⅲ較C組降低，以A組降低更顯著; A、B組PAI-1較C組明顯升高，以A組升高更顯著。提示盲腸結(jié)扎穿孔導(dǎo)致膿毒癥大鼠的凝血功能發(fā)生障礙，而羅格列酮對(duì)凝血功能障礙有改善作用。

凝血功能障礙是一個(gè)非常復(fù)雜的病理生理過程，包括炎癥介質(zhì)釋放、血小板活化聚集、血管內(nèi)皮損傷等一系列因素參與，其中炎癥介質(zhì)過度釋放是凝血功能障礙的始動(dòng)環(huán)節(jié)并貫穿整個(gè)過程［13］。本研究羅格列酮對(duì)膿毒癥大鼠凝血功能障礙有改善作用，可能為羅格列酮的臨床應(yīng)用及膿毒癥的藥物治療提供新的思路。但是，其具體作用機(jī)制還有待深入研究。

參考文獻(xiàn):

［1］Hartemink KJ，Hack CE，Groeneveld AB.Relation between coagulation/fibrinolysis and lactate in the course of human septic shock ［J］.J Clin Pathol，2010，63(11) : 1021-1026.

［2］Knoebl P.Blood coagulation disorders in septic patients［J］.Wien Med Wochenschr，2010，160(5-6) : 129-138.

［3］楊靖，卿國(guó)忠.羅格列酮抗炎作用的研究進(jìn)展［J］.國(guó)際病理科學(xué)與臨床，2008，28(4) : 362-365.

［4］Cuzzocrea S.Peroxisome proliferator-activated receptors gamma ligands and ischemia and reperfusion injury［J］.Vascul Pharmacol，2004，41(6) : 187-195.

［5］Remick DG，Newcomb DE，Bolgos GL，et al.Comparison of the mortality and inflammatory response of two models of sepsis: lipopolysaccharide vs.cecal ligation and puncture［J］.Shock，2000，13 (2) :110-116.

［6］Sakamoto Y，Inoue S，Iwamura T，et al.Studies on therapeutic effects and pathological features of an antithrombin preparation in septic disseminated intravascular coagulation patients［J］.Yonsei Med J，2013，54(3) : 686-689.

［7］Gada E，Owens AW，Gore MO，et al.Discordant effects of rosiglitazone on novel inflammatory biomarkers［J］.Am Heart J，2013，165(4) : 609-614.

［8］Celinski K，Dworzanski T，F(xiàn)ornal R，et al.Comparison of anti-inflammatory properties of peroxisome proliferator-activated receptor gamma agonists rosiglitazone and troglitazone in prophylactic treatment of experimental colitis［J］.J Physiol Pharmacol，2013，64 (5) : 587-595.

［9］Celinski K，Dworzanski T，Korolczuk A，et al.Effects of peroxisome proliferator-activated receptors-gamma ligands on dextran sodium sulphate-induced colitis in rats［J］.J Physiol Pharmacol，2011，62(3) : 347-356.

［10］Spears M，Donnelly I，Jolly L，et al.Bronchodilatory effect of the PPAR-gamma agonist rosiglitazone in smokers with asthma［J］.Clin Pharmacol Ther，2009，86(1) : 49-53.

［11］Jin N，Wang X.Peroxisome proliferator-activated receptors and atherosclerosis［J］.Sheng Li Ke Xue Jin Zhan，2004，35(1) :13-18.

［12］Bao ZJ，Xiang XD，Deng JW.Influence of rosiglitazone on the airway inflammation in guinea pigs with asthma［J］.Hunan Yi Ke Da Xue Xue Bao，2003，28(4) : 424-426，436.

［13］Ostrowski SR，Berg RM，Windelov NA，et al.Coagulopathy，catecholamines，and biomarkers of endothelial damage in experimental human endotoxemia and in patients with severe sepsis: a prospective study［J］.J Crit Care，2013，28(5) : 586-596.

(收稿日期:2014-11-26)

通信作者:周靈芝

文章編號(hào):1002-266X(2015)21-0026-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

中圖分類號(hào):R631.2; R-322

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.009