趙娟　陳隈陟　馬唯　仝亞紅　劉彤　劉鳳閣

作者單位: 101100北京市，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院婦科(趙娟、陳隈陟、馬唯、仝亞紅)，病理科(劉彤、劉鳳閣)

VEGF、P53及C-erbB2蛋白在卵巢上皮性腫瘤中的表達及臨床意義

趙娟陳隈陟馬唯仝亞紅劉彤劉鳳閣

作者單位: 101100北京市，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院婦科(趙娟、陳隈陟、馬唯、仝亞紅)，病理科(劉彤、劉鳳閣)

【摘要】目的觀察卵巢上皮性腫瘤組織中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、抑癌基因P53及人表皮生長因子受體2 (C-erbB2)蛋白的表達情況，探討三者在卵巢腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。方法采用免疫組化SP法檢測40例正常卵巢、45例良性、30例交界性、65例卵巢上皮癌中VEGF、P53及C-erbB2蛋白的表達。結(jié)果正常卵巢、良性、交界性、卵巢上皮癌中VEGF蛋白的表達率分別為17.50%(7/40)，24.44%(11/45)，63.33% (19/30)和73.85% (48/65)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。卵巢癌組VEGF蛋白的表達與腫瘤的臨床分期差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但與腫瘤的病理類型及組織分化程度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);正常卵巢、良性、交界性、卵巢上皮癌中P53蛋白的表達率分別為20.00%(8/40)、24.44%(11/45)、56.67%(17/30)、56.92% (37/65)，4組中C-erbB2蛋白的表達率分別為15.00%(6/40)、15.56%(7/45)、50.00%(15/30)、67.69%(44/65)，4組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。C-erbB2蛋白表達與腫瘤的臨床分期差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。VEGF蛋白在卵巢上皮癌中的表達與P53及C-erbB2蛋白表達呈正相關(guān)(r值分別為0.44和0.23，兩者均P＜0.05)，共同促進卵巢癌發(fā)生發(fā)展。結(jié)論VEGF、P53 及C-erbB2蛋白在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，P53及C-erbB2在癌基因方面促進血管生成因子VEGF的發(fā)生，共同促進卵巢腫瘤的發(fā)生發(fā)展。三種蛋白的聯(lián)合檢測對卵巢腫瘤的診斷、治療及預(yù)后評價有一定的指導(dǎo)意義。

【關(guān)鍵詞】VEGF; P53 ; C-erbB2蛋白;卵巢上皮性腫瘤;免疫組織化學(xué)

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卵巢癌是居婦科惡性腫瘤中病死率的首位，就診時半數(shù)以上患者已處于中晚期，因此早期診斷卵巢癌一直是困擾婦產(chǎn)科醫(yī)生的難題。腫瘤的發(fā)生多與腫瘤內(nèi)新生血管的大量生成有關(guān)，血管上皮生長因子(vascular epithelial growht factor，VEGF)亦稱血管通透因子(vascular permeability factor，VPF)是一種多功能的細胞因子，能刺激血管內(nèi)皮細胞分裂增殖，促進血管形成及增加血管通透性，從而促進腫瘤的生長增殖。P53 及C-erbB2蛋白均為癌基因，兩者正常情況下屬于沉默狀態(tài)，在惡性腫瘤組織中該兩種蛋白被激活。我們共同研究癌基因P53及C-erbB2蛋白與VEGF的關(guān)系，或許兩種基因的激活及蛋白的大量表達，是通過刺激內(nèi)皮細胞分裂增殖及促進腫瘤血管生成，而促進腫瘤細胞的生長增殖。故本文通過免疫組化方法檢測卵巢腫瘤中VEGF、P53及C-erbB2蛋白的表達，從而進一步探討三者在卵巢腫瘤中的作用。進一步探討其在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的重要作用，希望對卵巢腫瘤的診斷、治療及預(yù)后評價提供一定的指導(dǎo)意義。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇北京市潞河醫(yī)院2007年7月至2013年6月手術(shù)切除卵巢組織標本的蠟塊180例。其中: (1)正常卵巢組40例; (2)卵巢上皮性良性腫瘤組45例; (3)卵巢上皮性交界性腫瘤30例; (4)卵巢上皮性惡性腫瘤組65例，所有病例均經(jīng)病理確診。卵巢上皮性惡性腫瘤組按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO 2000)修訂的臨床分期標準進行分期:Ⅰ期10例，Ⅱ期15例，Ⅲ期30例，Ⅳ期10例;按病理組織學(xué)類型可分為:卵巢漿液性囊腺癌29例，黏液性囊腺癌15例，子宮內(nèi)膜樣癌9例，透明細胞癌5例，其他類型7例;分化程度:高分化14例，中分化21例，低分化30例。所有患者術(shù)前均未接受放療或化療。病理切片均由2位以上高年資病理醫(yī)師閱片診斷。

1.2免疫組化方法檢測標本中VEGF、P53及C-erbB2蛋白所有標本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，同時進行蘇木精-伊紅染色(HE)及免疫組化染色。免疫組化采用S-P法(鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法)，免疫組化操作按說明書進行。兔抗人單克隆抗體VEGF，鼠抗人單克隆抗體P53，兔抗人單克隆抗體C-erbB2購自于北京中山生物制品公司。采用TBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3結(jié)果判斷VEGF陽性染色為細胞漿著色，P53陽性染色為細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒; C-erbB2蛋白以細胞膜呈清晰的棕色著色為陽性，胞質(zhì)內(nèi)和核內(nèi)著色均不作陽性判斷依據(jù)。計算10個代表性的高倍視野下陽性細胞數(shù)占總細胞數(shù)的百分比，或觀察細胞膜和細胞質(zhì)的染色情況得出結(jié)果。VEGF無陽性細胞為陰性(－)，陽性細胞＜25%為(+ )、25%～50%為(+ + )、＞50%為(+ + + ); P53無陽性細胞為陰性(一)，陽性細胞＜30%為(+ )、30%～50%為(+ + )、＞50%為(+ + + ); C-erbB2蛋白陽性反應(yīng)切片中棕色顆粒主要出現(xiàn)在細胞膜，其中表達陰性指:胞膜或胞質(zhì)均未見染色，或陽性細胞比例＜10%;弱陽性(+ )指:陽性細胞比例10%～30%;中度陽性(+ + )指:陽性細胞比例31%～50%;強陽性(+ + + ):陽性細胞數(shù)＞50%。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗和fisher確切概率法，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1VEGF、P53及C-erbB2蛋白在正常卵巢和不同卵巢腫瘤組織中的表達VEGF、P53及C-erbB2蛋白在正常卵巢組織和卵巢良性腫瘤中的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，在交界性腫瘤與惡性腫瘤中的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。正常卵巢和卵巢良性腫瘤中的表達與交界性腫瘤和惡性腫瘤中的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1，圖1～6。

表1　VEGF、P53及C-erbB2蛋白在正常卵巢和不同卵巢上皮性腫瘤組織中的表達　例(%)

2.2VEGF、P53及C-erbB2蛋白在卵巢癌中的表達與臨床病理特征的關(guān)系卵巢癌組內(nèi)VEGF、P53及C-erbB2三種蛋白的表達與腫瘤的病理類型及組織分化程度均無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但VEGF和C-erbB2蛋白表達與腫瘤的臨床分期具有明顯差異(P＜0.05)，P53蛋白表達與腫瘤的臨床分期無明顯差異(P＞0.05)。見表2。

2.3VEGF、P53及C-erbB2蛋白在卵巢癌中表達的相關(guān)性分析上皮性卵巢癌組織中VEGF蛋白按表達強度分為四個等級，P53及C-erbB2蛋白分為陰性、陽性兩組，表達的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析法分析，結(jié)果顯示VEGF與P53蛋白的表達呈正相關(guān)(r =0.44，P＜0.05)，VEGF與C-erbB2蛋白的表達呈正相關(guān)(r =0.23，P＜0.05)。

3　討論

眾所周知，卵巢癌的特點是生長速度快、具有浸潤性及盆腹腔內(nèi)播散種植。新生血管的形成是卵巢癌細胞生長的基礎(chǔ)，同時又是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要途徑。血管形成是多種因素相互作用、多步驟協(xié)調(diào)發(fā)展的結(jié)果，其與細胞增殖、分化異常、血管生成及某些基因的異常表達有關(guān)。在眾多與腫瘤密切相關(guān)的蛋白表達中，VEGF、P53及C-erbB2是較為常見的，但多數(shù)文獻多分別研究其與卵巢癌的關(guān)系，本研究通過對三者的共同研究，以其進一步探討卵巢癌發(fā)生發(fā)展的過程。

VEGF是由二硫鍵連接的糖蛋白二聚體，是一種高度特異的血管內(nèi)皮細胞有絲分裂素，些許研究表明，其主要有以下生物學(xué)功能: (1)增強血管通透性，是已知最強的血管通透劑［1］; (2)促進血管形成能促進內(nèi)皮細胞有絲分裂，同時誘導(dǎo)抗凋亡因子bcl-2等的表達［2］，使內(nèi)皮細胞增殖加速而凋亡減少。VEGF是否還有其他生物學(xué)功能促進血管生成?許多學(xué)者研究，一些癌基因的表達增高也明顯促進腫瘤的生長增殖［3］。遂本研究共同研究VEGF、P53及C-erbB2蛋白，后兩種蛋白分別為抑癌基因及原癌基因表達產(chǎn)物，共同研究三者，為VEGF促進血管形成，增強腫瘤侵襲性提供了另一理論基礎(chǔ)。

圖1　VEGF表達(+ + + )卵巢漿液性腺癌(中分化)(SP×100)

圖2　P53表達(+ + + )卵巢漿液性腺癌(中低分化)(SP×100)

圖3　C-erbB2表達(+ + + )卵巢漿液性腺癌(中分化)(SP×100)

圖4　卵巢漿液性腺癌(低分化)VEGF表達陽性(SP×100)

圖5　卵巢漿液性腺癌(低分化)P53表達陽性(SP×100)

圖6　卵巢漿液性腺癌(低分化)C－erbB2表達陽性(SP×100)

表2　VEGF、P53及C-erbB2蛋白在卵巢癌中的表達與臨床病例特征的關(guān)系　例(%)

表3　上皮性卵巢癌組織中VEGF、P53及C-erbB2表達的關(guān)系例

我們研究了正常卵巢組織，良性、交界性和惡性上皮性卵巢腫瘤組織中VEGF的表達情況，結(jié)果顯示:交界性及惡性腫瘤中VEGF陽性表達率明顯高于良性腫瘤及正常卵巢組織(P＜0.05)，VEGF蛋白在不同病理類型、不同分化程度的卵巢癌中的陽性表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，而與臨床分期具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，與眾多學(xué)者的研究基本相似［4］。

同時，近年來我們在癌基因方面進行了大量不間斷研究，其中P53及C-erbB2蛋白是最重要的兩種。p53基因是迄今發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因，位于人17號染色體短臂上，基因組DNA長約20kb，分為野生型和突變型。野生型p53是一種抑癌基因，是細胞生長的“監(jiān)控器”，能誘導(dǎo)終末分化，維持基因穩(wěn)定，觸發(fā)衰老和誘導(dǎo)細胞凋亡，是負生長調(diào)控因子;而突變型不但無抑癌功能，還能抑制野生型活性，從而引起細胞的轉(zhuǎn)化，促進細胞癌變。多種惡性腫瘤中同時檢測到VEGF及P53的高表達，如乳腺癌、肺癌等［5、6］。人C-erbB2基因又稱為neu或Her-2或Her-2/neu密碼，定位于17g2l，編碼185-190kd的糖蛋白，是具有酪氨酸激酶活性的細胞膜受體，能激活C-erbB2基因編碼蛋白誘導(dǎo)的酪氨酸激酶活性，傳遞調(diào)節(jié)上皮細胞生長的分化信號。在許多腫瘤中都發(fā)現(xiàn)有C-erbB2的異常表達，表明該基因可能與腫瘤的形成和發(fā)生有關(guān)，同時有學(xué)者在鼻咽癌中檢測P53及C-erbB2的高表達［7］。本研究結(jié)果提示: P53及C-erbB2蛋白在正常卵巢、良性腫瘤中的表達明顯低于交界性、卵巢上皮癌中表達，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);卵巢癌組內(nèi)P53及C-erbB2蛋白的表達與腫瘤的病理類型及組織的分化程度無明顯差異(P＞0.05)，C-erbB2蛋白表達與腫瘤的臨床分期具有明顯差異(P ＜0.05)，但P53蛋白的表達與臨床分期無明顯差異。通過該研究推測: P53及C-erbB2蛋白在卵巢惡性組織中呈高表達狀態(tài)，表明癌基因的高表達在卵巢癌發(fā)生過程中是一普遍現(xiàn)象，其可作為卵巢良、惡性腫瘤的判斷標志之一。而晚期患者的C-erbB2表達明顯高于早期期患者，表明上皮性卵巢癌的期別越晚，C-erbB2的表達越強，提示原癌基因C-erbB2蛋白的表達促進卵巢癌發(fā)展，故對卵巢癌的診斷及判斷預(yù)后有重要作用。

在相關(guān)性分析中，VEGF蛋白在卵巢上皮癌中的表達與P53及C-erbB2蛋白表達具有正相關(guān)性(r =0.44、0.23，P＜0.05)，共同促進卵巢癌發(fā)生發(fā)展。由此推測原癌基因的擴增及抑癌基因的突變增殖對血管形成具有共同促進作用，或許可以成為VEGF促進血管形成的另一機制。

卵巢腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，通過對各種蛋白的不斷研究，以期更好的預(yù)防，盡早發(fā)現(xiàn)，準確治療，延長預(yù)后。VEGF、P53及C-erbB2蛋白可作為預(yù)測卵巢癌惡性生物行為及預(yù)后的重要指標。不僅有助于指導(dǎo)卵巢癌的臨床診斷和治療，也為卵巢癌的分子生物學(xué)治療提供了理論依據(jù)。

參考文獻

1 Jesmin S，Zaedi S，Islam AM，et al.Time-dependent alterations of VEGF and its signaling molecules in acute lung injury in a rat model of sepsis.Inflammation，2012，35: 484-500.

2 Li W，Jiang D.Effect of resveratrol on bcl-2 and VEGF expression in oxygen-induced retinopathy of prematurity.J Pediatr Ophthalmol Strabismus，2012，49: 230-235.

3 Khromova NV，Kopnin PB，Stepanova EV，et al.p53 hot-spot mutants increase tumor vascularization via ROS-mediated activation of the HIF1/VEGF-A pathway.Cancer Lett，2009，276: 143-151.

4 Crasta JA，Mishra S，Vallikad E，et al.Ovarian serous carcinoma: relationship of p53 and bcl-2 with tumor angiogenesis and VEGF expression.Int J Gynecol Pathol，2011，30: 521-526.

5 Noranizah W，Siti-Aishah MA，Munirah MA，et al.Immunohistochemical expression of vascular endothelial growth factor (VEGF)and p53 in breast lesions.Clin Ter，2010，161: 129-137.

6 Bircan A，Bircan S，Kapucuoglu N，et al.Maspin，VEGF and p53 expression in small biopsies of primary advanced lung cancer and relationship with clinicopathologic parameters.Pathol Oncol Res，2010，16: 553-561.

7 Kim TJ，Lee YS，Kang JH，et al.Prognostic significance of expression of VEGF and Cox-2 in nasopharyngeal carcinoma and its association with expression of C-erbB2 and EGFR.J Surg Oncol，2011，103: 46-52.

Expression and clinical significance of VEGF，P53，C-erbB2 protein in epithelial ovarian neoplasms

ZHAO Juan，CHEN Weizhi，MA Wei，et al.
Capital Medical University，Beijing Luhe Hospital gynecological，Beijing 101100，China

【Abstract】Objective To investigate the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF)，P53 and human epidermal growth factor receptor 2(C-erbB2 )protein in epithelial ovarian tumors，and to explore their roles in the pathogenesis and development of epithelial ovarian tumors.Methods The expression rates of VEGF，P53 and C-erbB2 protein in 40 cases of normal ovaries，45 cases of benign ovarian tumors，30 cases of borderline ovarian tumors and 65 cases of epithelial ovarian tumors were detected by immunohistochemistry (SP).Results The positive expression rates of VEGF protein were 17.50% (7/40)，24.44% (11/45)，63.33% (19/30)，73.85% (48/65)in normal ovaries，ovarian benign tumors，ovarian borderline tumors，ovarian epithelial tumors，respectively，there were significant differences among them (P＜0.05).The expression levels of VEGF protein were correlated to clinical staging in ovarian cancer group (P＜0.05)，however，which were not related with pathological type and histodifferentiation degree of ovarian cancer (P＞0.05).The positive expression rates of P53 protein were 20.00% (8/40)，24.44% (11/45)，56.67% (17/30)，56.92% (37/65)in normal ovaries，benign ovarian tumors，ovarian borderline tumors，ovarian epithelial tumors，respectrively，however，the positive expression rates of C-erbB2 protein were 15.00% (6/40)，15.56% (7/45)，50.00% (15/30)，67.69% (44/65)in the four kinds of tissues，respectively，there were significant differences among the 4 groups (P＜0.05).The expression levels of C-erbB2 protein were correlated to clinical staging of ovarian cancer(P＜0.05).The expression levels of VEGF were positively correlated to those of P53 and C-cerbB2 in ovarian epithelial tumors (r =0.44，r =0.23，P＜0.05)，which promoted the pathogenesis and development of ovarian cancer together.Conclusion The VEGF，P53 and C-erbB2 play an important role in the pathogenesis and development of ovarian cancer，and P53 and C-erbB2 increase the expression of VEGF in oncogenes，which promote the pathogenesis and development of ovarian cancer together.The combined detection of the three kinds of proteins is valuable in the diagnosis，treatment and prognostic evaluation of ovarian neoplasms.

【Key words】VEGF; P53; C-erbB2; epithelial ovarian tumors; immunohistochemistry

(收稿日期:2014－10－22)

通訊作者:陳隈陟，101100北京市，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院婦科;

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.06.002

【文章編號】1002－7386(2015)06－0808－04

【文獻標識碼】A

【中圖分類號】R 737.31