趙彥，康鳳鳳，王薇，何法霖，鐘堃，王治國

(北京醫(yī)院衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心，北京100730)

同型半胱氨酸不同檢測(cè)方法結(jié)果分析

趙彥，康鳳鳳，王薇，何法霖，鐘堃，王治國

(北京醫(yī)院衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心，北京100730)

目的評(píng)價(jià)并分析同型半胱氨酸(Hcy)項(xiàng)目不同檢測(cè)方法的結(jié)果。方法采用衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心(NCCL)的室內(nèi)質(zhì)量控制(IQC)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)調(diào)查分析全國110家實(shí)驗(yàn)室Hcy檢測(cè)項(xiàng)目的不精密度水平[即變異系數(shù)(CV)]。再利用NCCL基于Web的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(EQA)系統(tǒng)評(píng)估2012年全國110家實(shí)驗(yàn)室Hcy檢測(cè)的偏倚(Bias)。引入我國目前的EQA評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(TEa=20%)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并通過公式西格瑪(σ)=(TEa－Bias)/CV計(jì)算項(xiàng)目的σ度量值。同時(shí)評(píng)價(jià)各方法組實(shí)驗(yàn)室的及格率和實(shí)驗(yàn)室間CV。結(jié)果從σ水平、實(shí)驗(yàn)室間的不精密度水平以及EQA及格率三方面對(duì)Hcy不同檢測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行分析，化學(xué)發(fā)光法σ＞6、3＜σ≤6、0＜σ≤3、σ≤0的比例分別為0%、7.69%、30.77%、61.54%，免疫比濁法分別為9.09%、0%、63.64%、27.27%，循環(huán)酶法分別為11.63%、31.40%、47.67%、9.30%?；瘜W(xué)發(fā)光法、免疫比濁法、循環(huán)酶法5個(gè)批號(hào)質(zhì)控品的實(shí)驗(yàn)室間CV分別為33.66%～43.77%、19.54%～25.24%、10.46%～14.21%，及格率分別為53.3%、53.3%～80.0%、85.9%～92.3%。結(jié)論我國Hcy的檢測(cè)水平還有待提高。

同型半胱氨酸;六西格瑪;西格瑪度量;不精密度;偏倚

同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是一種含硫氨基酸。臨床及實(shí)驗(yàn)研究均表明高水平的Hcy是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和心肌梗死的危險(xiǎn)指標(biāo)，其水平高低與疾病的危險(xiǎn)程度成正比，因此越來越受到廣泛的重視和關(guān)注。為了保障Hcy檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量，需建立完善的質(zhì)量保證體系[1]。衛(wèi)生部臨檢中心已于2007年正式在全國范圍內(nèi)開展Hcy的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(external quality assessment，EQA)工作，同時(shí)也對(duì)室內(nèi)質(zhì)量控制(internal quality control，IQC)水平進(jìn)行調(diào)查研究。我們將EQA及IQC情況結(jié)合六西格瑪(6σ)理論對(duì)其不同檢測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行分析。

材料和方法

一、研究對(duì)象

衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心在2012年要求參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心Hcy室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目的所有單位同時(shí)上報(bào)2月份的室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，室內(nèi)質(zhì)控品為各臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部使用的相應(yīng)配套質(zhì)控品或者自制質(zhì)控品。EQA所用質(zhì)控品由美國伯樂(Bio－Rad)公司提供的5個(gè)批號(hào)的血清基質(zhì)質(zhì)控品。

二、方法

1.西格瑪(σ)度量值的估計(jì)對(duì)IQC數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得到每個(gè)實(shí)驗(yàn)室IQC的變異系數(shù)(coefficient of variation，CV)。采用基于Web方式的EQA軟件系統(tǒng)調(diào)查2012年參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心Hcy的EQA回報(bào)結(jié)果，按照檢測(cè)方法分組，將各實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與各組靶值比較，求5個(gè)批號(hào)質(zhì)評(píng)物的平均偏差作為各實(shí)驗(yàn)室方法的偏倚(Bias)估計(jì)。利用公式:σ=(TEa－Bias)/CV[2]，結(jié)合IQC評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(TEa=20%)，得到各實(shí)驗(yàn)室的σ度量值。σ≥3為實(shí)驗(yàn)室的最低水平，σ＞6稱為一流水平[3]。將各實(shí)驗(yàn)室的σ度量值按照σ≤0、0＜σ≤3、3＜σ≤6和σ＞6分成4組，計(jì)算各組的構(gòu)成比。

2.實(shí)驗(yàn)室間CV將3倍標(biāo)準(zhǔn)差(s)之外的檢測(cè)結(jié)果視為離群值拋除后，計(jì)算各組的實(shí)驗(yàn)室間CV。

3.及格率實(shí)驗(yàn)室80%以上(含80%)結(jié)果在允許范圍內(nèi)為成績(jī)合格。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為靶值± 2.5 μmol/L或靶值±20%(取大者)。

結(jié)果

參加全國Hcy調(diào)查的187家實(shí)驗(yàn)室中有15家實(shí)驗(yàn)室未回報(bào)檢測(cè)方法或者選擇其它檢測(cè)方法，對(duì)余下的172家實(shí)驗(yàn)室按照檢測(cè)方法分組并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析?；貓?bào)的IQC結(jié)果僅有110家為有效數(shù)據(jù)，因此將110家實(shí)驗(yàn)室的σ度量值進(jìn)行分組。循環(huán)酶法僅有37家實(shí)驗(yàn)室達(dá)到3σ水平，另外兩種檢測(cè)方法組的結(jié)果更不理想，均只有1家實(shí)驗(yàn)室達(dá)到3σ水平。見表1。

表2為5個(gè)批號(hào)質(zhì)評(píng)物在各分組中的實(shí)驗(yàn)室間CV。循環(huán)酶法的不精密度低于其他兩種方法。各分組的EQA及格率見表3。

討論

本研究結(jié)果顯示我國Hcy檢測(cè)水平與6σ水平還有很大差距。其中使用最多的是循環(huán)酶法，使用這種方法的實(shí)驗(yàn)室中有31.4%的σ值在3～6之間，僅有11.6%的實(shí)驗(yàn)室滿足σ＞6。而化學(xué)發(fā)光法和免疫比濁法組中σ≥3的實(shí)驗(yàn)室分別為7.69%和9.09%。表2中循環(huán)酶法組的穩(wěn)健CV范圍為10.46%～14.21%，是3個(gè)方法組中最小的。再結(jié)合2012年參加EQA各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室不同方法組的及格率，循環(huán)酶法的及格率均在85%以上。循環(huán)酶法的基本原理為Hcy經(jīng)三(2－羧乙基)膦還原成游離型Hcy，通過與共價(jià)底物反應(yīng)，循環(huán)放大，同時(shí)產(chǎn)生腺苷，腺苷立即被水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使NADH轉(zhuǎn)化為NAD+，樣本中的Hcy濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率成正比。由于循環(huán)酶法具有良好的精密度、線性范圍寬、抗干擾因素強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確且能夠滿足大批量樣本自動(dòng)檢測(cè)，是一種值得推廣的方法[4－6]。同理分析，化學(xué)發(fā)光法的σ水平、CV以及及格率均較低，免疫比濁法居中。當(dāng)然同一方法組的實(shí)驗(yàn)室可能使用的是不同廠家的儀器，各類型的儀器之間可能在精密度水平、系統(tǒng)誤差方面也不盡相同，這也會(huì)造成同一方法組間實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果差異較大。而且化學(xué)發(fā)光法和免疫免濁法這兩個(gè)方法組的實(shí)驗(yàn)室數(shù)較少，出現(xiàn)離群值對(duì)整組的影響也較大。

EQA計(jì)劃通過評(píng)價(jià)不同實(shí)驗(yàn)室的性能為檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的實(shí)踐提供了重大的價(jià)值，分為6個(gè)類別(見表4，與計(jì)劃設(shè)計(jì)有關(guān)EQA的評(píng)價(jià)能力)，最佳室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃的目標(biāo)是用第一類計(jì)劃，能評(píng)價(jià)整個(gè)測(cè)量區(qū)間的偏倚和再現(xiàn)性、校準(zhǔn)溯源性和實(shí)驗(yàn)室間的一致性。而現(xiàn)在的EQA還停留在第6階段，無參考測(cè)量程序或有證參考物質(zhì)的賦值[7]。本研究?jī)H將2012年的172個(gè)EQA結(jié)果及110家實(shí)驗(yàn)室的IQC結(jié)果用規(guī)范的σ度量方法結(jié)合起來，對(duì)Hcy檢測(cè)方法進(jìn)行簡(jiǎn)單分析，更為科學(xué)合理的性能評(píng)估還需要長(zhǎng)期、大量的數(shù)據(jù)。所以我們建議所有開展Hcy檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室都積極參加全國Hcy的EQA計(jì)劃，以便我們能夠盡快掌握更多實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)水平，并對(duì)方法學(xué)檢測(cè)性能進(jìn)行更全面的分析。

[1]王薇，王治國，李少男.全國同型半胱氨酸檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果分析[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，25(3):149－151.

[2]王薇，王治國，李少男.六西格瑪在臨床實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用[J].中國醫(yī)療器械信息，2008，14(12):10－15.

[3]王治國.臨床檢驗(yàn)6σ質(zhì)量設(shè)計(jì)與控制[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2009:31－36.

[4]葉余輝.循環(huán)酶法測(cè)定血清同型半胱氨酸試劑盒的評(píng)價(jià)[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11(8):465.

[5]常連剛，趙靜，任峰，等.循環(huán)酶法測(cè)定血漿同型半胱氨酸[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2007，22(1):16－19.

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Result analysis of various detection methods for homocysteine

ZHAO Yan，KANG Fengfeng，WANG Wei，HE Falin，ZHONG Kun，WANG Zhiguo.(National Center for Clinical Laboratory，Beijing Hospital，Ministry of Health，Beijing 100730，China)

ObjectiveTo evaluate the results of various detection methods for homocysteine(Hcy).MethodsThe internal quality control(IQC)information of 110 laboratories from National Center for Clinical Laboratory(NCCL) was collected.The imprecision[coefficient of variation(CV)]of Hcy was analyzed.Bias was estimated according to various detection methods in NCCL External Quality Assessment(EQA)in 2012 through online EQA platform.With current evaluation criteria for EQA(TEa=20%)，sigma(σ)value of each laboratory was calculated as the formula:σ =(TEa－bias)/CV.Furthermore，the passing rates and inter－laboratory CV for each group were evaluated.ResultsThe proportions of σ＞6，3＜σ≤6，0＜σ≤3 and σ≤0 by chemiluminescence，immunoturbidimetry and enzymatic cycling were 0%，7.69%，30.77%，61.54%;9.09%，0%，63.64%，27.27%and 11.63%，31.40%47.67%，9.30%，respectively.The inter－laboratory CV by the 3 methods for 5－run quality control materials were 33.66%－43.77%，19.54%－25.24%and 10.46%－14.21%，and the passing rates were 53.3%，53.3%－80.0%and 85.9%－92.3%.ConclusionsLaboratories in China need further efforts to improve the performance of Hcy detection.

Homocysteine;6 sigma;Sigma metric;Imprecision;Bias

1673－8640(2015)03－0284－03

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.020

2014－06－09)

(本文編輯:龔曉霖)

北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(7143182)

趙彥，女，1988年生，學(xué)士，技師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理工作。

王治國，聯(lián)系電話:010－58115055。