張春雷，李忠新，張書楠，陳桂冰，曾學(xué)輝

(深圳市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳518083)

復(fù)合質(zhì)控血清研制及臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)

張春雷，李忠新，張書楠，陳桂冰，曾學(xué)輝

(深圳市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳518083)

目的制備乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)抗體、人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體弱陽性對(duì)照復(fù)合質(zhì)控血清，用于日常室內(nèi)質(zhì)量控制。方法用HBsAg、HCV抗體、HIV抗體陽性血清分別與健康人血清進(jìn)行倍比稀釋，選S/CO在2～3之間的稀釋度制備室內(nèi)質(zhì)控血清。結(jié)果自制的復(fù)合質(zhì)控血清變異系數(shù)(CV)在15%以內(nèi)，有很好的穩(wěn)定性、精密度。結(jié)論自制復(fù)合質(zhì)控血清能作為HBsAg、HCV抗體、HIV抗體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的弱陽性室內(nèi)質(zhì)控血清。

乙型肝炎病毒表面抗原;丙型肝炎病毒抗體;人類免疫缺陷病毒抗體;復(fù)合質(zhì)控血清;穩(wěn)定性

全自動(dòng)免疫分析儀器因其檢測(cè)準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、自動(dòng)化程度高、符合實(shí)驗(yàn)室生物安全的需要等優(yōu)點(diǎn)，在臨床的應(yīng)用越來越廣泛。由于臨床免疫檢測(cè)影響因素較多，包括儀器、試劑保存及運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)，為了保證免疫檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性，每次實(shí)驗(yàn)均須有內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清(陽性及陰性血清)和外部對(duì)照質(zhì)控血清，以外部對(duì)照質(zhì)控血清進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。為了避免商品化質(zhì)控血清可能存在的基質(zhì)效應(yīng)，我們利用檢測(cè)樣本中陽性樣本制備了乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)抗體、人類免疫缺陷病毒(HIV)陽性對(duì)照復(fù)合質(zhì)控血清，用于日常室內(nèi)質(zhì)控。

材料和方法

一、材料

1.試劑HBsAg、HCV抗體試劑盒由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供，HIV抗體試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供。

2.儀器URANUS AE 200全自動(dòng)酶免分析儀，由深圳市愛康生物科技有限公司提供。

二、方法

1.樣本收集要求無污染、溶血、黃疸和脂血。其中HBsAg陽性復(fù)合血清10份，HCV抗體陽性復(fù)合血清5份，HIV抗體陽性復(fù)合血清3份。同時(shí)收集HBsAg及HBsAb陰性、HCV抗體陰性、HIV抗體陰性的健康人血清足量，56℃滅活30 min，3 000×g離心15 min，去除纖維蛋白沉淀，經(jīng)亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活后備用，所有血清仍需按照傳染物對(duì)待。

2.用陰性健康人血清分別對(duì)少量HBsAg陽性、HCV抗體陽性、HIV抗體陽性復(fù)合血清進(jìn)行倍比稀釋并對(duì)不同稀釋度血清進(jìn)行雙份平行檢測(cè)，選取S/CO值為2～3的稀釋度為最適稀釋度。

3.將上述陽性樣本按照最適稀釋度加至一定量的陰性健康人血清中，充分混勻，按照需求量分裝到塑料試管中，用量1周，加蓋密封保存于－20℃?zhèn)溆谩Ｊ褂脮r(shí)解凍后置4～8℃保存，使用前充分混勻。

4.嚴(yán)格按照操作規(guī)程對(duì)制備好的質(zhì)控血清進(jìn)行20次重復(fù)測(cè)定，求其均值()、標(biāo)準(zhǔn)差(s)和變異系數(shù)(CV)。

5.自制質(zhì)控血清的精密度和穩(wěn)定性觀察:每次取自制質(zhì)控血清與日常樣本一起檢測(cè)，持續(xù)檢測(cè)6個(gè)月后統(tǒng)計(jì)S/CO的均值、s、CV，并分析各月與第1個(gè)月的檢測(cè)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。不同月份質(zhì)控血清精密度和穩(wěn)定性的比較采用均數(shù)的t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、最適合稀釋度

對(duì)HBsAg陽性、HCV抗體陽性、HIV抗體陽性復(fù)合血清不同稀釋度血清進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)其s值有良好的濃度梯度，HBsAg陽性復(fù)合血清在1∶8 000～1∶16 000稀釋范圍內(nèi)，S/CO在2.02～3.58之間，選定1∶10 000為最適稀釋度，HCV抗體陽性在1∶4 000～1∶8 000稀釋度范圍內(nèi)，S/CO值在1.73～3.45范圍內(nèi)，HIV抗體陽性復(fù)合血清在1∶4 000～1∶8 000稀釋度范圍內(nèi)，S/CO值在1.94～3.85范圍內(nèi)，根據(jù)情況均選定1∶5 000作為最適稀釋度。

二、混合血清穩(wěn)定性測(cè)試

稀釋完成后，對(duì)質(zhì)控血清進(jìn)行20次重復(fù)測(cè)定，S/CO均值、s和CV。見表1。

三、混合血清保存穩(wěn)定性測(cè)試

連續(xù)6個(gè)月使用自制質(zhì)控血清繪制質(zhì)控圖，同時(shí)比較每個(gè)月質(zhì)控血清的，s，CV值，觀察其精密度及穩(wěn)定性，結(jié)果見表2、表3、表4。以均數(shù)t檢驗(yàn)比較，與一月份相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。由此可見，－20℃保存自制的質(zhì)控血清，至少可以保存6個(gè)月，解凍后4～8℃保存1周，可用作于室內(nèi)質(zhì)控使用。

討論

室內(nèi)質(zhì)控目的是控制實(shí)驗(yàn)室每天檢測(cè)結(jié)果的可靠性，是實(shí)驗(yàn)室管理最基本措施。臨床實(shí)驗(yàn)室只有建立一個(gè)全面的質(zhì)量管理體系，才能獲得可靠的測(cè)定結(jié)果。外部對(duì)照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性和試劑盒反應(yīng)批間或批內(nèi)差異而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一套對(duì)照血清。而弱陽性對(duì)照最能反映檢測(cè)結(jié)果的差異，即能顯示半定量分析或定性分析上的假陰性結(jié)果或誤差[1]。因此，為了保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和精密度，設(shè)置外部弱陽性對(duì)照質(zhì)控血清是實(shí)施室內(nèi)質(zhì)控的一種有效的方法。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)由于其操作簡便、成本低、適合批量檢查等優(yōu)點(diǎn)，在臨床和科研領(lǐng)域抗原及抗體的測(cè)定中有著廣泛的應(yīng)用。影響ELISA檢測(cè)的因素很多，包括試劑盒本身的質(zhì)量、運(yùn)輸和保存的環(huán)境，樣本本身含有一些自身抗體、樣本的保存和是否細(xì)菌污染及樣本的處理，洗液的配制及是否污染，溫育的溫度和時(shí)間，顯色的時(shí)間等，所以實(shí)驗(yàn)室采用室內(nèi)監(jiān)控尤其重要。

目前，HBsAg、HCV抗體、HIV抗體等項(xiàng)目，是手術(shù)前檢測(cè)的常規(guī)項(xiàng)目，ELISA方法檢測(cè)仍然是各級(jí)醫(yī)院主要選擇的方法。衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心已經(jīng)研制了用于進(jìn)行HBsAg、HCV抗體、HIV抗體等項(xiàng)目ELISA檢測(cè)國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品，單位為國際單位IU/mL。該種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)已在許多三級(jí)醫(yī)院得到廣泛的應(yīng)用，但價(jià)格偏貴，而且都是單一項(xiàng)目質(zhì)控品，給臨床的應(yīng)用和推廣帶來了不便。本研究中制作的是室內(nèi)多項(xiàng)目復(fù)合質(zhì)控品，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，HBsAg、HCV抗體、HIV抗體－20℃至少可以穩(wěn)定6個(gè)月，解凍血清4～8℃可保存一周。一般CV值達(dá)到了20%以內(nèi)，質(zhì)控品穩(wěn)定性較好[2]。本實(shí)驗(yàn)中CV值能夠控制在15%以內(nèi)，質(zhì)控品穩(wěn)定性良好。我們所在科室以上ELISA檢測(cè)項(xiàng)目近年均從臨床檢驗(yàn)中心采購商品化質(zhì)控品，采用全自動(dòng)酶免分析儀盡量減少人為的誤差，CV值一般穩(wěn)定在10%～15%。多項(xiàng)目質(zhì)控品制作過程操作簡便，能夠在各級(jí)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立完成，可行性高。同時(shí)，用HBsAg及HBsAb陰性、HCV抗體陰性、HIV抗體陰性的健康人血清作為基質(zhì)，排除了基質(zhì)效應(yīng)，能夠更好的監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)過程。目前有研究報(bào)道用ELISA試劑盒陽性對(duì)照配制室內(nèi)質(zhì)控血清的方法[3－5]，我們認(rèn)為不可取。目前試劑盒內(nèi)陽性對(duì)照一般不是從陽性樣本中得到，多是合成的半成品或片段，我們前期實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，ELISA陽性對(duì)照用金標(biāo)的試劑檢測(cè)結(jié)果為陰性。本研究中用陽性樣本配制室內(nèi)多項(xiàng)質(zhì)控品，能夠大大減少實(shí)驗(yàn)室成本。

自制復(fù)合質(zhì)控血清可有效控制實(shí)驗(yàn)室測(cè)定工作的準(zhǔn)確性及可靠性，提高日常檢測(cè)結(jié)果的一致性，有利于臨床檢測(cè)準(zhǔn)確性的提高，使檢測(cè)結(jié)果更接近于患者的真實(shí)情況，有利于臨床的診斷應(yīng)用。

[1]王治國.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:207－208.

[2]孔祥沙，季穎，張?，?，等.甲型肝炎病毒抗體室內(nèi)質(zhì)控血清制備及評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，36(12):1146－1147.

[3]韓光宇，譚昆，徐湛，等.自制抗－HIV臨界值質(zhì)控血清的室內(nèi)質(zhì)控及評(píng)價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(6):711－712.

[4]韋雪芳.ELISA檢測(cè)HIV抗體室內(nèi)質(zhì)控血清的制備[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(20):2527－2528.

[5]孫少巖，吳敏慧.HCV抗體臨界值質(zhì)控血清的制備及應(yīng)用[J].南京軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，23(3):181.

1673－8640(2015)03－0292－03

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.024

2014－07－09)

(本文編輯:儲(chǔ)怡星)

張春雷，男，1974年生，學(xué)士，副主任技師，主要從事臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)工作。